一种Desertorin B及其提取方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种Desertorin B及其提取方法和应用，Desertorin B的分子式为C23H20O8，提取步骤如下：(1)在菌种培养基中对猫儿屎内生真菌塔宾曲霉DS37进行菌种培养；(2)在发酵培养基中对步骤(1)中获得的菌种进行发酵培养，然后用石油醚、乙酸乙酯和甲醇浸提若干次，合并提取液并过滤，回收混合溶剂，滤液减压浓缩，得到粗品浸膏，最后经硅胶柱层析得到Desertorin B。本发明专利技术制得的Desertorin B有很好的抑制玉米大斑病菌作用，可以用于农业防治和药剂防治技术；并且Desertorin B具有较强的抗MCF‑7和HepG2细胞株活性，可以为抗肿瘤药物的开发提供一种可能；同时，Desertorin B具有一定的抗氧化活性。

A Desertorin B and its extraction method and Application

The present invention discloses a Desertorin B and its extraction method and application. The molecular formula of Desertorin B is C23H20O8. The extraction steps are as follows: (1) strain culture of the cat excrement endophytic fungus Aspergillus tabinensis DS37 in the culture medium; (2) fermentation culture of the strain obtained in the fermentation medium, and then using stone Oil ether, ethyl acetate and methanol were extracted several times, combined with the extract and filtered. The mixed solvent was recovered, and the filtrate was decompressed and concentrated to obtain crude extract. Desertorin B was finally obtained by silica gel column chromatography. The Desertorin B prepared by the invention has good inhibition effect on the pathogen of corn leaf spot and can be used for agricultural control and pesticide control technology; and the Desertorin B has strong anti-MCF_7 and HepG2 cell line activity, which can provide a possibility for the development of anti-tumor drugs; at the same time, Desertorin B has certain antioxidant activity. Sex.

【技术实现步骤摘要】
一种DesertorinB及其提取方法和应用
本专利技术涉及DesertorinB制备领域，具体涉及一种DesertorinB及其提取方法和应用。
技术介绍
猫儿屎(Decaisneainsignis(Griff.)Hook.f.&Thomson)系木通科(Lardiyabalaeeae)猫儿屎属植物。丛生落叶直立灌木，广泛分布于我国西南部和中部地区。木通科植物猫儿屎是我国传统的民间中草药，味辛、甘、性平，根及果实甘、凉具有清肺止咳，祛风除湿，治疗风湿关节痛，抗肿瘤等功效。迄今为止，对猫儿屎的研究主要集中在它的植物化学成分，而对其内生真菌的研究相对较少。据报道，内生真菌次生代谢产物种类主要有：生物碱、萜类、甾体、有机酸类等化合物，均具有一定的生物活性。然而未见猫儿屎内生真菌中有关DesertorinB及其活性的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种DesertorinB及其提取方法和应用，以克服上述现有技术存在的缺陷，本专利技术从猫儿屎内生真菌DS37次生代谢产物中分离得到DesertorinB，且该DesertorinB有较好的抑菌活性和抗肿瘤活性，同时具有一定的抗氧化活性。为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种DesertorinB，所述DesertorinB的化学结构式为：一种DesertorinB的提取方法，包括以下步骤：(1)在菌种培养基中对猫儿屎内生真菌塔宾曲霉DS37进行菌种培养；(2)在发酵培养基中对步骤(1)中获得的菌种进行发酵培养，所得发酵物用石油醚、乙酸乙酯和甲醇浸提若干次，合并提取液并过滤，回收混合溶剂，滤液减压浓缩，得到粗品浸膏；(3)将步骤(2)得到的粗品浸膏在硅胶色谱柱上，分别用体积梯度为1:0:0,0:1:0,0:1:1,0:0:1的石油醚/乙酸乙酯/甲醇洗脱剂进行洗脱，得到A-D四个组分；(4)将步骤(3)得到的B组分在硅胶色谱柱上，分别用体积梯度为100:0,100:20,100:50,100:100,100:200,0:100的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂进行洗脱，得到B1-B6六个组分，B5组分继续在硅胶色谱柱上，用体积梯度为100:100,100:130,100:160,100:190,100:220,100:250,100:300,0:100的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂进行洗脱，得到B5.1-B5.8八个组分，将B5.4组分静置纯化，得到DesertorinB。进一步地，步骤(1)中所述的菌种培养基含有如下质量百分数的组分：葡萄糖3％，硝酸钠0.3％，磷酸氢二钾0.1％，氯化钾0.05％，无水硫酸镁0.05％，硫酸亚铁0.001％，余量为水；步骤(2)中所述的发酵培养基含有如下质量百分数的组分：大米70-80％，氯化钠5％，硝酸钠0.1％，谷氨酸钠0.5％，余量为水，且所述的发酵培养基pH＝8。进一步地，步骤(1)中菌种培养的条件为：28℃下培养7-10天；步骤(2)中发酵培养的条件为：20-24℃下培养35-40天；步骤(2)中发酵物用石油醚/乙酸乙酯/甲醇浸提8次；步骤(2)所述的石油醚、乙酸乙酯和甲醇均为工业用标准。DesertorinB在抑制真菌或细菌上的应用。进一步地，所述真菌为玉米大斑病菌。DesertorinB在抗肿瘤上的应用。进一步地，所述抗肿瘤指对人肺癌细胞、人前列腺癌细胞、人乳腺癌细胞、人肝癌细胞和人正常肝细胞的体外作用。DesertorinB在抗氧化上的应用。进一步地，所述抗氧化指对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼的作用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术通过对猫儿屎内生真菌DS37固体发酵物进行提取，得到此DesertorinB，其分子式为C23H20O8，通过对本专利技术DesertorinB的抑菌活性测试，发现该化合物有较好的抗真菌活性，尤其对玉米大斑病菌有很好的抑菌活性，为猫儿屎内生真菌DS37次生代谢产物的抑菌活性成分，因此，可以用于农业防治和药剂防治技术。另外，通过对本专利技术DesertorinB的抗肿瘤活性测试，发现该化合物有较好的抗肿瘤活性，尤其对MCF-7和HepG2细胞株有很好的细胞毒活性。同时，DesertorinB具有一定的抗氧化活性。附图说明图1为本专利技术DesertorinB的HR-ESI-M谱；图2为本专利技术DesertorinB的1H-NMR谱；图3为本专利技术DesertorinB的13C-NMR谱；图4为本专利技术DesertorinB的自由基清除率线性拟合图；图5为阳性对照维生素C的自由基清除率线性拟合图；图6为DesertorinB的化学结构式。保藏说明本专利技术对从猫儿屎植物茎部分离得到的一株内生真菌塔宾曲霉DS37进行了下述保藏：保藏时间：2018年3月22日，保藏地点：中国，武汉。中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；保藏号为CCTCCM2018147，分类命名为塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)。具体实施方式下面对本专利技术的实施方式做进一步详细描述：一种DesertorinB化合物，该化合物的化学结构式：该化合物的提取方法如下：(1)在菌种培养基中对猫儿屎内生真菌塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)DS37进行菌种培养，具体在28℃下培养7-10天；其中，菌种培养基含有质量百分数组分：葡萄糖3％，硝酸钠0.3％，磷酸氢二钾0.1％，氯化钾0.05％，无水硫酸镁0.05％，硫酸亚铁0.001％，余量为水，自然pH；(2)在发酵培养基中对步骤(1)中获得的菌种进行发酵培养，具体20-24℃下培养35-40天，以发酵物(9.2kg)为原料用石油醚/乙酸乙酯/甲醇浸提8次，合并提取液并过滤，回收混合溶剂，减压浓缩，得到粗品浸膏1500g；其中，发酵培养基含有质量百分数组分：大米70-80％，氯化钠5％，硝酸钠0.1％，谷氨酸钠0.5％，余量为水，pH＝8；(3)将步骤(2)得到的粗品浸膏在硅胶色谱柱上，分别用体积梯度为1:0:0,0:1:0,0:1:1,0:0:1的石油醚/乙酸乙酯/甲醇洗脱剂进行洗脱，得到A(110g)，B(420g)，C(700g)，D(100g)四个组分；(4)将步骤(3)得到的B组分在硅胶色谱柱上，分别用体积梯度为100:0,100:20,100:50,100:100,100:200,0:100的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂进行洗脱，得到B1-B6六个组分，B5组分继续在硅胶色谱柱上，用体积梯度为100:100,100:130,100:160,100:190,100:220,100:250,100:300,0:100的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂进行洗脱，得到B5.1-B5.8八个组分，B5.4组分静置纯化，得到DesertorinB72.4mg。本专利技术制备的猫儿屎内生真菌DS37次生代谢产物DesertorinB是一种强生物活性的香豆素类化合物，目前从猫儿屎植物的内生真菌中还未见有关该化合物活性研究的报道，也未见从其他植物及内生真菌中分离得到此化合物活性研究的报道，更未见有人工合成此化合物活性研究的报道。本专利技术对猫儿屎内生真菌DS37固体发酵物采用硅胶柱层析的方法分离鉴定了一个强生物活性的香豆素类化合物——5,5'-二甲基-7-羟基-4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Desertorin B，其特征在于，所述Desertorin B的化学结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种DesertorinB，其特征在于，所述DesertorinB的化学结构式为：2.一种权利要求1所述的DesertorinB的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在菌种培养基中对猫儿屎内生真菌塔宾曲霉DS37进行菌种培养；(2)在发酵培养基中对步骤(1)中获得的菌种进行发酵培养，所得发酵物用石油醚、乙酸乙酯和甲醇浸提若干次，合并提取液并过滤，回收混合溶剂，滤液减压浓缩，得到粗品浸膏；(3)将步骤(2)得到的粗品浸膏在硅胶色谱柱上，分别用体积梯度为1:0:0,0:1:0,0:1:1,0:0:1的石油醚/乙酸乙酯/甲醇洗脱剂进行洗脱，得到A-D四个组分；(4)将步骤(3)得到的B组分在硅胶色谱柱上，分别用体积梯度为100:0,100:20,100:50,100:100,100:200,0:100的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂进行洗脱，得到B1-B6六个组分，B5组分继续在硅胶色谱柱上，用体积梯度为100:100,100:130,100:160,100:190,100:220,100:250,100:300,0:100的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂进行洗脱，得到B5.1-B5.8八个组分，将B5.4组分静置纯化，得到DesertorinB。3.根据权利要求2所述的一种DesertorinB的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述的菌种培养基含有如下质量百分数的组分：葡萄糖3％，硝酸钠0.3％，磷酸氢二钾0.1％，氯化钾0.05％，无水硫酸镁0.05％，硫酸亚铁0.001％，余量为水；步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨秀芳，王宁宁，陈镝，马养民，雒佳欣，陈璞，庄瑜瑜，侯艳艳，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61