本发明专利技术提供的基于IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒，属于食物过敏原检测技术领域。所述试剂盒包括以下试剂，包被有食物过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG3抗体；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。本发明专利技术首次选用IgG3来检测食物过敏原，并且是基于间接法制备的ELISA试剂盒，具有检测灵敏性强，准确度高，重现性好的特点，且能够一次处理大批量的样品。实施例证明本发明专利技术提供的试剂盒检测灵敏度达到1ng/ml。
ELISA kit for detection of food allergens based on IgG3 antibody
The ELISA kit for detecting food allergens based on IgG3 antibody belongs to the technical field of food allergen detection. The kit comprises the following reagents, coated with a food allergen detection plate; washing buffer; sample dilution; standard or positive quality control substance; biotin-labeled anti-human IgG3 antibody; enzyme-labeled avidin solution; substrate chromogenic solution; terminating solution. The method first selects IgG3 to detect food allergens, and the ELISA kit is prepared based on indirect method. The kit has the characteristics of strong sensitivity, high accuracy and good reproducibility, and can process a large number of samples at one time. It is demonstrated that the detection sensitivity of the kit provided by the invention reaches 1ng/ml.
【技术实现步骤摘要】
基于IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒
本专利技术涉及食物过敏原检测
，具体涉及基于IgG3抗体检测食物过敏原的试剂盒，即食物过敏原特异性IgG3检测试剂盒。
技术介绍
过敏性疾病发病率占世界总人口的30％以上，被世界卫生组织列为21世纪的四大非感染性疾病之一。近年来过敏性疾病的发病率显著上升，成为全球关注的公众卫生问题，郭嘉等人对过敏性疾病流行病学调查结果显示，12亿总人口中有22％的人患有过敏性疾病，例如过敏性鼻炎、哮喘、结膜炎、湿疹、食物过敏、药物过敏和严重的过敏反应等，严重影响人们的生活质量和生命安全。食物过敏原如蛋品，花生，牛奶，黄豆，小麦，树木坚果，鱼类和甲壳类食物，是主要食物过敏原。其中甲壳类食物中，虾过敏原备受关注，据报道0.6％～2.8％的过敏性疾病患者对虾过敏；人们在虾肉中检测出至少13种IgE结合蛋白，但原肌球蛋白被鉴定为惟一的主要过敏原，相对分子质量介于34000～39000之间；据报道，原肌球蛋白是虾、蟹、牡蛎、乌贼等无脊椎动物的重要抗原，具有高度保守的氨基酸序列。鸡蛋过敏中，蛋白比蛋黄更易引起过敏，卵类黏蛋白为主要过敏原；其阳性率在儿童食物过敏中达35％，而成人过敏也高达12％。由于花生过敏反应的严重性及高发性，该过敏原引起医疗机构的广泛关注，据报道食物诱导的过敏反应中，花生过敏占10％～47％。近年来此类疾病日益增多，成为常见病、多发病，是我国健康及经济发展领域需要解决的重大问题。目前，专利CN1620504A公开了用基于由特定物质的一部分基因得到的信息设计的引物进行PCR，用来测定食物中有无特定物质的方法，在检出食物中所含的微量成分和识别有害的特定物质过敏源方面是优异的，但是该方法依赖已知检测物的引物，但是PCR方法复杂，检测时间长，成本高；专利CN101285840A公开了一种食物中过敏原的检测方法，尽管该方法能够快速简单得到检测结果但是该专利中并未公开相关的检测抗体种类亚型，同时没有公开该方法检测食物过敏原的检测灵敏度和准确性。另外，以飞行质谱的分子量峰和图谱形状为基本参数来鉴定特征性的蛋白点。通过分析过敏原蛋白的特征对食物中过敏原进行检测鉴定，但是需要专门的大型精密仪器，检测成本高，分析困难需要专门的检测人员和分析人员综上所述，虽然目前研究的有关食物过敏原检测的方法很多，但都存在检测速度慢，成本高，不适合批量检测的问题，而且需要特定的分析仪器进行机读，制约了食物中过敏原检测的发展。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于基于IgG3检测食物过敏原的试剂盒，使该试剂盒具有较强的特异性和较高的灵敏度。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了基于IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒，包括以下组分：包被有食物过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG3抗体溶液；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。优选的，所述食物过敏原的包被浓度为0.1～2000μg/ml。优选的，所述包被有食物过敏原的检测板中食物过敏原的种类包括水产品类、畜禽类、蛋奶类、蔬菜类、水果类、谷物类或坚果类。优选的，所述洗涤缓冲液为PBS缓冲液。优选的，所述生物素标记的抗人IgG3抗体的质量浓度为0.01～8000μg/ml。优选的，所述底物显色液为四甲基联苯胺底物溶液或2,2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸底物溶液。优选的，所述样品稀释液为PBS缓冲液。优选的，所述PBS缓冲液包括以下重量份的组分：8.0份NaCl，0.20份KCl，1.16份Na2HPO4，0.20份KH2PO4和1000份水；所述PBS缓冲液的pH值为7.0～7.6。优选的，所述终止液为0.5～2mol/L的硫酸溶液溶液或质量浓度30％～40％的氢氧化钠溶液。优选的，所述酶标记的亲和素溶液的浓度为使用时工作液的1～5000倍。本专利技术提供的基于IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒，包括以下试剂，包被有食物过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG3抗体；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。本专利技术选用IgG3来检测食物过敏原，并且基于间接法制备的ELISA试剂盒，具有检测灵敏性强的特点，并能够一次处理大批量的样品。实施例证明本专利技术提供的试剂盒检测灵敏度达到1ng/ml。进一步的，本专利技术提供的基于IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒，标准品或阳性质控品是人IgG3蛋白，食物过敏原蛋白包被酶标板可以检测血浆、血清等液体中的经口进食的任何食物诱导机体产生的过敏原特异性IgG3，具有检测食物过敏原的种类多，应用范围广的特点。采用生物素-亲和素系统能够有效提高检测结果的灵敏度。附图说明图1为本专利技术试剂盒制备和使用流程图；图2为实施例1中IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒的标准曲线。具体实施方式本专利技术提供了基于IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒，包括以下试剂：包被有食物过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG3抗体溶液；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括包被有食物过敏原的检测板。所述食物过敏原的包被浓度优选为0.1～2000μg/ml，更优选为0.2～1000μg/ml。本专利技术中，所述包被有食物过敏原的检测板中食物过敏原的种类包括水产品类、畜禽类、蛋奶类、蔬菜类、水果类、谷物类或坚果类。所述水产品类包括鱼、虾、蟹、贝和蛤等。所述畜禽类包括猪肉、鸡肉、牛肉和羊肉。蛋奶类包括鸡蛋和牛奶。所述蔬菜包括萝卜、蘑菇、芹菜、辣椒和青椒。所述水果类包括柑橘、橙子、香蕉、苹果、猕猴桃、芒果、葡萄、菠萝和番茄。所述谷物类包括小麦、燕麦、大米、玉米、黄豆和豌豆。所述坚果类包括松子、花生、榛子、核桃和开心果。本专利技术中，所述检测板的种类优选为透明的聚苯乙烯板和不透明的白色聚苯乙烯板。所述透明的聚苯乙烯板用于定量检测；所述不透明的白色聚苯乙烯板用于定性检测。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括洗涤缓冲液。所述洗涤缓冲液优选为PBS缓冲液。本专利技术中，所述ELISA试剂盒包括样品稀释液。所述样品稀释液为PBS缓冲液。所述的PBS缓冲液的溶质优选包括以下重量份的组分8.0份NaCl，0.20份KCl，1.16份Na2HPO4和0.20份KH2PO4和1000份水；所述的PBS缓冲液的pH值为7.0～7.6。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括生物素标记的抗人IgG3抗体制剂。所述生物素标记的抗人IgG3抗体制剂的质量浓度优选为0.01～8000μg/ml。所述生物素标记的抗人IgG3抗体制剂的添加体积优选为0.02～0.2ml/孔。本专利技术中，所述抗人IgG3抗体优选为抗人IgG3的单克隆抗体。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括标准品或阳性质控品。所述标准品或阳性质控品为人IgG3蛋白。所述阳性质控品的质量浓度优选为0.01～1000μg/ml；所述阳性质控品的添加量优选为0.02～0.2ml/孔。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括酶标记亲和素溶液。本专利技术中，所述酶标记亲和素溶液为使用时工作液的1～5000倍。本专利技术对所述酶标记亲和素的来源本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基于IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒，其特征在于，包括以下组分：包被有食物过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG3抗体溶液；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。
【技术特征摘要】
1.基于IgG3抗体检测食物过敏原的ELISA试剂盒，其特征在于，包括以下组分：包被有食物过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG3抗体溶液；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述食物过敏原的包被浓度为0.1～2000μg/ml。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述包被有食物过敏原的检测板中食物过敏原的种类包括水产品类、畜禽类、蛋奶类、蔬菜类、水果类、谷物类或坚果类。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤缓冲液为PBS缓冲液。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗人IgG3抗体溶液的质量浓度为0.1～2000μg/ml。6....
【专利技术属性】
技术研发人员：何韶衡，何萍，
申请(专利权)人：沈阳汇敏源生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。