本发明专利技术提供的基于IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒，属于气传过敏原检测技术领域。所述试剂盒包括以下试剂，包被有气传过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG4抗体；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。本发明专利技术选用IgG4来检测气传过敏原，并且是基于间接法制备的ELISA试剂盒，具有检测灵敏性强，准确度高，重现性好的特点，并能够一次处理大批量的样品。实施例证明本发明专利技术提供的试剂盒检测灵敏度达到1ng/ml。
ELISA kit for detection of airborne allergens based on IgG4 antibody
The ELISA kit for detecting airborne allergens based on IgG4 antibody belongs to the technical field of airborne allergens detection. The kit comprises the following reagents, coated with an airborne allergen detection plate; washing buffer; sample dilution; standard or positive quality control substance; biotin-labeled anti-human IgG4 antibody; enzyme-labeled avidin solution; substrate chromogenic solution; terminating solution. The invention selects IgG4 to detect airborne allergens, and the ELISA kit is prepared based on indirect method. The kit has the characteristics of strong sensitivity, high accuracy and good reproducibility, and can process a large number of samples at a time. It is demonstrated that the detection sensitivity of the kit provided by the invention reaches 1ng/ml.
【技术实现步骤摘要】
基于IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒
本专利技术涉及过敏原检验
，具体涉及基于IgG4抗体检测气传过敏原的试剂盒，即气传过敏原特异性IgG4检测试剂盒。
技术介绍
过敏性疾病发病率占世界总人口的30％以上，被世界卫生组织列为21世纪的四大非感染性疾病之一。近年来过敏性疾病的发病率显著上升，成为全球关注的公众卫生问题，郭嘉等人对过敏性疾病流行病学调查结果显示，12亿总人口中有22％的人患有过敏性疾病，例如过敏性鼻炎、哮喘、结膜炎、湿疹、气传过敏、药物过敏和严重的过敏反应等，严重影响人们的生活质量和生命安全。气传过敏原如花粉颗粒、真菌孢子、尘螨、谷物面粉、动物毛发和尿液、鸟羽毛等是过敏性疾病的重要诱因，其中花粉是气传过敏原的主要来源，导致了10％～20％的变应性疾病的发生。不同的花粉有着不同的蛋白成分，其抗原性也不一致，不同花粉间可能存在交叉反应性。尘螨主要有屋尘螨、粉尘螨、宇尘螨等，是引起变应性鼻炎和支气管哮喘的重要过敏原。猫和狗是常见的动物过敏原的来源，在一些特定的工作环境中鼠、豚鼠、马、兔亦可成为重要的过敏原来源，以上动物的毛发、上皮、皮屑、尿液、唾液均可有很强的致敏性。近年来此类疾病日益增多，成为常见病、多发病，是我国健康及经济发展领域需要解决的重大问题基于过敏性疾病“是一组由肥大细胞/嗜碱性粒细胞介导的疾病”的定义，对于已经致敏的易感者来说，任何能诱导大量肥大细胞/嗜碱性粒细胞激活的物质均会诱发过敏反应。在这些物质中，IgE介导的过敏反应无疑是研究最多，了解最深的一个，40余年的临床实践显示，IgE介导的过敏反应是过敏反应中的最重要亚型。传统认为气传性过敏原引起的过敏反应也是由IgE介导的过敏反应，例如，公开号为CN105403692A的中国专利公开了检测屋尘螨过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法，公开号为CN103983789A的中国专利公开了一种用于特异性尘螨类过敏原IgE筛查的试纸条。可见，目前现有技术对气传过敏原的研究停留在由IgE介导的过敏反应，这会导致不能及时准确地确定过敏性疾病的发生。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于基于IgG4检测气传过敏原的试剂盒，使该试剂盒具有较强的特异性和较高的灵敏度。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了基于IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒，包括以下组分：包被有气传过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG4抗体溶液；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。优选的，所述气传过敏原的包被浓度为0.1～2000μg/ml。优选的，所述包被有气传过敏原的检测板中气传过敏原的种类包括户尘螨、粉尘螨、热带无爪螨、德国小蠊、美洲大蠊、狗上皮、猫上皮、艾蒿、黄花蒿、大籽蒿、葎草、三裂叶豚草、矮豚草、梯牧草、桦树、杨树、柳树、榆树、白蜡、法国梧桐、松树、柏树、软叶针葵、交链孢霉、烟曲霉、特异青霉、黑根霉、黑曲霉、谷物面粉、鸟羽毛、蜂毒、乳胶或百合花。优选的，所述洗涤缓冲液为PBS缓冲液。优选的，所述生物素标记的抗IgG4抗体溶液的质量浓度为0.01～8000μg/ml。优选的，所述底物显色液为四甲基联苯胺底物溶液或2,2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸底物溶液。优选的，所述样品稀释液为PBS缓冲液。优选的，所述PBS缓冲液包括以下重量份的组分：8.0份NaCl，0.20份KCl，1.16份Na2HPO4，0.20份KH2PO4和1000份水；所述PBS缓冲液的pH值为7.0～7.6。优选的，所述终止液为0.5～2mol/L的硫酸溶液或质量浓度为30％～40％的氢氧化钠溶液。优选的，所述酶标记的亲和素溶液的浓度为使用时工作液的1～5000倍。本专利技术提供的基于IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒，包括以下试剂，包被有气传过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG4抗体；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。本专利技术采用首次选用IgG4来检测气传过敏原，并且基于间接法制备的ELISA试剂盒，具有检测灵敏性强的特点，能够一次处理大批量的样品。实施例证明本专利技术提供的试剂盒检测灵敏度达到1ng/ml。进一步的，本专利技术提供的基于IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒，阳性质控品是人IgG4蛋白，气传过敏原包被的酶标板可以检测检测血浆、血清等液体中的任何经空气传播的气传过敏原诱导机体产生的气传过敏原特异性IgG4，具有检测气传过敏原的种类多，应用范围广的特点。采用生物素-亲和素系统能够有效提高检测结果的灵敏度。附图说明图1为本专利技术试剂盒制备和使用流程图；图2为实施例1中IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒的标准曲线。具体实施方式本专利技术提供了基于IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒，包括以下试剂：包被有气传过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG4抗体溶液；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括包被有气传过敏原的检测板。所述气传过敏原的包被浓度优选为0.1～2000μg/ml，更优选为0.1～100μg/ml。本专利技术中，所述包被有气传过敏原的检测板中气传过敏原的种类包括户尘螨、粉尘螨、热带无爪螨、德国小蠊、美洲大蠊、狗上皮、猫上皮、艾蒿、黄花蒿、大籽蒿、葎草、三裂叶豚草、矮豚草、梯牧草、桦树、杨树、柳树、榆树、白蜡、法国梧桐、松树、柏树、软叶针葵、交链孢霉、烟曲霉、特异青霉、黑根霉、黑曲霉、谷物面粉、鸟羽毛、蜂毒、乳胶或百合花。在本专利技术中，所述检测板的种类优选为透明的聚苯乙烯板和不透明的白色聚苯乙烯板。所述透明的聚苯乙烯板用于定量检测；所述不透明的白色聚苯乙烯板用于定性检测。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括洗涤缓冲液。在本专利技术中，所述洗涤缓冲液优选为PBS缓冲液。所述的PBS缓冲液优选包括以下重量份的组分8.0份NaCl，0.20份KCl，1.16份Na2HPO4和0.20份KH2PO4和1000份水；所述的PBS缓冲液的pH值为7.0～7.6。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括生物素标记的抗人IgG4抗体溶液。所述生物素标记的抗人IgG4抗体溶液的质量浓度优选为0.01～8000μg/ml。所述生物素标记的抗人IgG4抗体溶液的添加体积优选为0.02～0.2ml/孔。所述抗人IgG4抗体优选为抗人IgG4的单克隆抗体。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括酶标记的亲和素溶液。所述酶标记的亲和素溶液的浓度为使用时工作液的1～5000倍。本专利技术对所述酶标记亲和素的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的酶标记亲和素溶液即可。酶标记的亲和素溶液优选为HRP标记的链霉亲和素。本专利技术中，所述ELISA试剂盒包括样品稀释液。所述样品稀释液为pH值为7.0～7.6的PBS缓冲液。所述PBS缓冲液的组分包括下列重量份组分：8.0份NaCl，0.20份KCl，1.16份Na2HPO4和0.20份KH2PO4和1000份水。本专利技术提供的ELISA试剂盒包括标准品或阳性质控品。所述标准品或阳性质控品为人IgG4蛋白。所述阳性质控品的质量浓度优选为0.01～1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基于抗IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒，其特征在于，包括以下组分：包被有气传过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG4抗体溶液；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。
【技术特征摘要】
1.基于抗IgG4抗体检测气传过敏原的ELISA试剂盒，其特征在于，包括以下组分：包被有气传过敏原的检测板；洗涤缓冲液；样品稀释液；标准品或阳性质控品；生物素标记的抗人IgG4抗体溶液；酶标记的亲和素溶液；底物显色液；终止液。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述气传过敏原的包被浓度为0.1～2000μg/ml。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述气传过敏原的种类包括户尘螨、粉尘螨、热带无爪螨、德国小蠊、美洲大蠊、狗上皮、猫上皮、艾蒿、黄花蒿、大籽蒿、葎草、三裂叶豚草、矮豚草、梯牧草、桦树、杨树、柳树、榆树、白蜡、法国梧桐、松树、柏树、软叶针葵、交链孢霉、烟曲霉、特异青霉、黑根霉、黑曲霉、谷物面粉、鸟羽毛、蜂毒、乳胶或百合花。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤缓冲液为PBS缓冲液。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：何韶衡，何萍，
申请(专利权)人：辽宁汇普源生物医学科技开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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