一种可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质制造技术

本发明专利技术提供了一种可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质，具有这样的特征：可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质具有微孔结构以及附着在微孔结构表面的生物活性因子，微孔结构为海绵状，微孔结构的微孔的形状为圆形或椭圆形，可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的微孔大小不一，最大直径可达50μm，其中，生物活性因子为具有生物活性的生长因子，可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质通过将牛心包在真空条件下置于非离子型去污剂缓冲液中进行多次冻融后再依次在非离子型去污剂缓冲液、无菌去离子水以及磷酸盐溶液中进行震荡清洗，最后浸没在生物活性因子琼脂糖材料中得到的。

A microporous acellular bovine pericardium matrix with slow release of bioactive factors

The invention provides a microporous acellular bovine pericardial matrix capable of slowly releasing bioactive factors, which has the following characteristics: the microporous acellular bovine pericardial matrix capable of slowly releasing bioactive factors has microporous structure and bioactive factors attached to the surface of microporous structure, and the microporous structure is spongy and the microporous structure is microporous. The microporous acellular bovine pericardial matrix, which can slow release bioactive factors, has different micropore sizes and a maximum diameter of 50 micron. The bioactive factors are growth factors with biological activity, and the microporous acellular bovine pericardial matrix, which can slow release bioactive factors, can be placed in the bovine pericardium by the bovine pericardium. After freezing and thawing in a non-ionic detergent buffer under vacuum, the detergent buffer, sterile deionized water and phosphate solution were cleaned by oscillation, and then immersed in the bioactive factor agarose material.

【技术实现步骤摘要】
一种可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质
本专利技术涉及组织工程领域，具体涉及一种可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质。
技术介绍
组织工程是将活细胞接种在组织基质上，制造出一种与受者组织相容性好，无免疫原性、不需抗凝、耐久性强的生物材料。其中，天然基质材料是组织工程研究的重要内容之一。理想的天然基质材料应具备以下优点：(1)良好的组织相容性，无生物毒性；(2)具有三维立体结构，材料需呈多孔海绵状，有利于细胞粘附浸润，以及营养物质的深入和代谢产物的排泄；(3)富含生物活性因子，为宿主细胞生长提供良好的微环境；(4)具有良好的机械性能，能抵抗体内血液等流体冲刷。目前，组织工程基质材料主要分为人工高分子生物合成材料和天然基质材料两类。人工高分子生物合成材料组织相容性差、体内组织重塑不良，故限制了其广泛应用。而天然基质材料，例如牛心包因其来源广泛、具有良好的张力强度、易于塑形和缝合等优点，而广泛用于生物型人工心脏瓣膜、人工血管的制备以及各种组织器官缺损的修补材料。在当前的应用过程中，常用戊二醛对牛心包中的细胞和基质进行交联固定，以达到降低免疫原性、减轻异物反应、稳定胶原基质、增强抗酶解能力以及达到对材料进行消毒、保存的目的。尽管这种处理的牛心包在临床上已经获得很大成功，但戊二醛并不能完全封闭异种抗原，残留抗原所引起的免疫排斥反应以及戊二醛所致的钙化是导致构建组织器官失功、影响其临床使用寿命的主要原因之一。另外戊二醛具有生物毒性，导致宿主细胞不易生长，体内重塑性差。因此，研发无免疫原性、组织相容性和力学性能优良，在结构上呈多孔海绵状、富含生物活性分子的牛心包基质材料对解决当前牛心包临床应用瓶颈至关重要。脱细胞是组织工程研究中降低移植组织免疫原性、保留移植物三维组织结构和生物力学性能的重要方法。其中，去污剂是最常用的脱细胞试剂，其可分为离子型和非离子型去污剂两种。虽然离子型去污剂能取得良好的脱细胞效果，但是残存毒性、易去除可溶性的生物活性因子、基质材料结构致密等导致细胞很难内生性生长，在宿主体内重塑效果不佳，这成为限制其处理临床组织标本的瓶颈。
技术实现思路
本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质。本专利技术提供了一种可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质，具有这样的特征：可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质具有微孔结构以及附着在微孔结构表面的生物活性因子，微孔结构为海绵状，微孔结构的微孔的形状为圆形或椭圆形，可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的微孔大小不一，最大直径可达50μm，其中，生物活性因子为具有生物活性的生长因子，可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质通过将牛心包在真空条件下置于非离子型去污剂缓冲液中进行多次冻融后再依次在非离子型去污剂缓冲液、无菌去离子水以及磷酸盐溶液中进行震荡清洗，最后浸没在生物活性因子琼脂糖材料中得到的。在本专利技术提供的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质中，还可以具有这样的特征：其中，非离子型去污剂缓冲液包括：Tris缓冲液、非离子型去污剂以及脱氧胆酸钠，Tris缓冲液的物质的量浓度范围为8～12mmol/L，PH值为7.4～7.8，非离子型去污剂在Tris缓冲液的体积分数范围为0.8％～1.5％W/V，脱氧胆酸钠在Tris缓冲液的体积分数范围为0～0.8％W/V。在本专利技术提供的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质中，还可以具有这样的特征：其中，去污剂为聚乙二醇辛基苯基醚。在本专利技术提供的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质中，还可以具有这样的特征：其中，生物活性因子琼脂糖材料中的生物活性因子的浓度范围为2.0～12.0μg/ml。在本专利技术提供的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质中，还可以具有这样的特征：其中，将牛心包在真空条件下置于非离子型去污剂缓冲液中进行2～10次冻融，每次冻融的冷冻时间为4～5h。在本专利技术提供的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质中，还可以具有这样的特征：其中，经过冻融后的牛心包瓣在非离子型去污剂缓冲液中进行震荡处理需要在30～50℃摇床中震荡处理28～96h。在本专利技术提供的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质中，还可以具有这样的特征：其中，对牛心包用无菌去离子水震荡清洗12～48h。在本专利技术提供的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质中，还可以具有这样的特征：其中，对牛心包用磷酸盐溶液震荡清洗48～96h。专利技术的作用与效果根据本专利技术所涉及的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质，因为具有微孔结构和生物活性因子，微孔的形状为圆形或椭圆形，微孔大小不一，最大直径可达50μm，这样的微孔结构以及孔隙率能够促进去污剂侵入组织内部去除细胞，进而能够减少去污剂的使用浓度，有效保留牛心包的三维结构及生物力学性能，并且显著降低去污剂的残留毒性。此外，可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质在宿主体内能够释放生物活性因子，从而促进间充质干细胞聚集，维持宿主细胞成纤维细胞样表型。可用于生物型人工心脏瓣膜、人工血管的制备以及各种组织器官缺损的修补材料。因此，可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质非常适用于生物型人工心脏瓣膜、人工血管的制备以及各种组织器官缺损的修补材料。附图说明图1是本专利技术的实施例中牛心包和可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的示意图；图2是本专利技术的实施例中牛心包和可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的扫描电镜示意图；以及图3是本专利技术的实施例中牛心包和可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的生物力学性能检测结果的示意图。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下实施例结合附图对本专利技术可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质作具体阐述。图1是本专利技术的实施例中牛心包和可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的示意图。图2是本专利技术的实施例中牛心包和可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的扫描电镜示意图。如图1、2所示，图1(a)处理前牛心包、图2(a)表示正常对照的牛心包，图1(b)、图2(b)表示可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质。如图1、2所示，本实施例中的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质具有连续的微孔结构。微孔结构为海绵状，微孔结构的微孔的形状为圆形或椭圆形大小不一，最大直径可达50μm。微孔结构充填有生物活性因子。生物活性因子为有生物活性的生长因子。在本实施例中，生长因子为人重组碱性成纤维细胞生长因子(Humanrecombinantbasicfibroblastgrowthfactor,HrbFGF)。可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的吸水率为27.76±0.05％。本实施例中的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的制备过程如下：步骤一，在真空条件下，将牛心包置于非离子型去污剂缓冲液中冷冻2～6h，非离子型去污剂缓冲液包括：Tris缓冲液、非离子型去污剂以及脱氧胆酸钠。非离子型去污剂为聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)。Tris缓冲液的浓度范围为8～12mmol/L，PH值为7.4～7.8，TritonX-100本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质，其特征在于：所述可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质具有微孔结构以及附着在所述微孔结构表面的生物活性因子，所述微孔结构为海绵状，所述微孔结构的微孔的形状为圆形或椭圆形，所述可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的微孔大小不一，最大直径可达50μm，其中，所述生物活性因子为具有生物活性的生长因子，所述可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质通过将牛心包在真空条件下置于非离子型去污剂缓冲液中进行多次冻融后再依次在非离子型去污剂缓冲液、无菌去离子水以及磷酸盐溶液中进行震荡清洗，最后浸没在生物活性因子琼脂糖材料中得到的。

【技术特征摘要】
1.一种可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质，其特征在于：所述可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质具有微孔结构以及附着在所述微孔结构表面的生物活性因子，所述微孔结构为海绵状，所述微孔结构的微孔的形状为圆形或椭圆形，所述可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质的微孔大小不一，最大直径可达50μm，其中，所述生物活性因子为具有生物活性的生长因子，所述可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质通过将牛心包在真空条件下置于非离子型去污剂缓冲液中进行多次冻融后再依次在非离子型去污剂缓冲液、无菌去离子水以及磷酸盐溶液中进行震荡清洗，最后浸没在生物活性因子琼脂糖材料中得到的。2.根据权利要求1所述的可缓释生物活性因子的微孔隙脱细胞牛心包基质，其特征在于：其中，所述非离子型去污剂缓冲液包括：Tris缓冲液、非离子型去污剂以及脱氧胆酸钠，所述Tris缓冲液的浓度范围为8～12mmol/L，PH值为7.4～7.8，所述非离子型去污剂在所述Tris缓冲液的体积分数范围为0.8％～1.5％W/V，所述脱氧胆酸钠在所述Tris缓冲液的体积分数范围为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓红，吴昊，徐志云，夏翠萍，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海,31