本发明专利技术公开了一种铱配合物在制备线粒体靶向抗肿瘤药物中的应用。所述的铱配合物结构式为：[Ir(ppy)2(HPIP)]Cl，其中ppy代表的配体为2‑苯基吡啶，HPIP代表的配体为3‑(1H‑咪唑[4,5‑f][1,10]邻菲罗啉‑2‑yl)苯酚。本发明专利技术所述铱配合物对人肿瘤细胞HeLa、HepG2、A‑549、及顺铂耐药株CP/R‑A549均有强的抑制作用，能够蓄积在肿瘤细胞的线粒体并诱导肿瘤细胞发生凋亡，可作为新的以肿瘤细胞线粒体为靶点的抗肿瘤药物。
Application of an iridium complex in the preparation of mitochondrial targeted anti-tumor drugs
The invention discloses an iridium complex in the application of preparing mitochondrial targeted anti-tumor drugs. The structure formula of the iridium complex is [Ir (ppy) 2 (HPIP)] Cl, in which the ligand PPy represents is 2_phenylpyridine, and the ligand HPIP represents is 3(1H_imidazole [4,5 f] [1,10] phenanthroline_2_yl) phenol. The iridium complex has strong inhibitory effect on human tumor cells HeLa, HepG2, A_549, and cisplatin-resistant strain CP/R_A549. It can accumulate in the mitochondria of tumor cells and induce apoptosis of tumor cells. It can be used as a new anticancer drug targeting on the mitochondria of tumor cells.
【技术实现步骤摘要】
一种铱配合物在制备线粒体靶向抗肿瘤药物中的应用
本专利技术属于抗肿瘤药物
，具体涉及一种铱配合物在制备线粒体靶向抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
全世界每年约有760万人死于癌症，占总死亡人数的13％，每年全球被确诊癌症患者达1270万，我国每年约有150万死于癌症，且呈每年逐步上升趋势。肿瘤治疗主要包括手术治疗、放射治疗、化学治疗三个方面。化学治疗，即用化学合成药物治疗疾病的方法。传统的化疗药物由于具有卓越的细胞毒性，使化疗成为目前临床治疗肿瘤疾病的重要手段，但是由于其对于正常细胞和肿瘤细胞的差异识别能力不强，造成在临床应用中对肿瘤患者产生严重的毒副作用，这是导致中断治疗和治疗失败的主要原因。所以，研发靶向性强、毒副作用低的抗肿瘤药物显得愈发迫切。金属铱配合物和其他金属抗癌药物相比，具有更高的细胞毒性和更小的毒副作用，呈现出广阔的发展前景，已成为国内外的研究热点。肿瘤细胞与正常细胞的线粒体无论在结构上还是功能上都存在较大差异，主要表现在线粒体能量代谢、膜电位及通透性、线粒体内ROS水平等几方面，肿瘤细胞由于发生较为广泛的变异而更容易受线粒体损伤的影响，许多研究巧妙利用这些特点使线粒体靶向药物成为近年抗肿瘤药物的新的设计方向(NatureReviewsDrugDiscovery,2010,9:447-464.)。正常细胞一般利用氧化磷酸化方式生成ATP，而肿瘤细胞由于快速增殖而倾向于发生糖酵解来提供更多的能量。与正常细胞相比，某些癌细胞中的线粒体膜电位异常升高，氯尼达明(Lonidamine)，奥利默森(Oblimersen)，白藜芦醇(Resveratrol)等药物可以通过直接使线粒体的膜电位消散，或者通过调节bcl-2及Bax等与线粒体膜通透性密切相关的凋亡蛋白家族，最终导致线粒体基质的渗透性膨胀而诱导肿瘤细胞凋亡。另外肿瘤细胞特别是肿瘤干细胞线粒体ROS水平明显偏低，甲萘醌(menadione),钆莫特沙芬(motexafingadolinium)，拉帕醌(lapachone)，等药物皆是通过在线粒体中产生过量的ROS或者抑制SOD的活性来诱导肿瘤细胞凋亡(TrendsinCellBiology,2008,18(4):165-173.)。综上所述，直接作用在线粒体的抗肿瘤药物有避开传统化学治疗抵抗机制的潜力，可以用于耐药肿瘤的治疗；而利用肿瘤细胞和正常细胞线粒体的差异也使得线粒体靶向药物的毒副作用明显降低，从而达到增效减毒的抗肿瘤药物的临床应用需求。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的在于提供一种铱配合物的制备及在抗肿瘤药物中的应用。本专利技术的上述目的通过如下技术方案予以实现：一种铱配合物在制备线粒体靶向抗肿瘤药物中的应用，其中，所述铱配合物的阳离子结构式为阴离子为Cl-。所述铱配合物合成方法参考：DaltonTrans.,2014,43,17463–17474。所述的铱配合物结构式为：所述的铱配合物结构式为：[Ir(ppy)2(HPIP)]Cl，其中ppy代表的配体为2-苯基吡啶，HPIP代表的配体为3-(1H-咪唑[4,5-f][1,10]邻菲罗啉-2-yl)苯酚。本专利技术所述铱配合物对人(卵巢肿瘤、乳腺肿瘤、肝肿瘤或肺肿瘤)的肿瘤细胞HeLa、A-549、HepG2、MCF-7及顺铂耐药株CP/R-A549均有强的抑制作用，而且对人正常肝细胞L02毒性很小。所述铱配合物具有绿色荧光，进入细胞后通过细胞器共定位研究发现该配合物能特异靶向蓄积在肿瘤细胞线粒体。能够诱导肿瘤细胞发生凋亡。可作为新的以肿瘤细胞线粒体为靶点的抗肿瘤药物。附图说明图1为铱配合物在HeLa细胞中的细胞器共定位实验结果图；图2为铱配合物诱导HeLa细胞发生凋亡的流式细胞术结果图；具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的解释说明，但具体实施例并不对本专利技术作任何限定。除非特别说明，实施例中所涉及的试剂、方法均为本领域常用的试剂和方法。所述铱配合物合成方法参考：DaltonTrans.,2014,43,17463–17474。所述的铱配合物结构式为：[Ir(ppy)2(HPIP)]Cl，其中ppy代表的配体为2-苯基吡啶，HPIP代表的配体为3-(1H-咪唑[4,5-f][1,10]邻菲罗啉-2-yl)苯酚。实施例1铱配合物体外抗肿瘤活性测定筛选的细胞株有：肿瘤细胞HeLa、A-549、HepG2、MCF-7、及顺铂耐药株CP/R-A549，对照细胞采用正常人胚肝细胞L02。阳性对照药物采用顺铂。测定采用溴化四氮唑蓝(MTT)法，其原理为：溴化四氮唑蓝[MTT,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide]是一种能接受氢原子的染料，活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲臢，而死细胞则无此功能。用二甲基亚砜(DMSO)溶解甲臢后，在一定的波长下用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的存活率。实验步骤：取对数生长期的肿瘤细胞，接种于96孔培养板中，200μL/孔。实验各样品均为5个浓度，每个浓度设6个复孔。加入药物后，将细胞置于37℃，5％C02培养箱内继续培养48小时，然后加MTT，再继续培养4小时，吸去上清液，每孔加150μLDMSO，用酶标仪在49Onm波长测各孔吸光度，按下列公式计算细胞增殖抑制率。相关的细胞增殖的抑制率及细胞数量的死亡率用下面的公式进行计算：抑制率(％)＝(对照组平均OD值-给药组平均OD值)/对照组平均OD值×100％；根据中国药科大学新药筛选中心提供的半数抑制率(IC50)计算软件求出IC50值，实验结果见表1。表1铱配合物对各种细胞的半数抑制浓度aIC50的单位用μM表示，数据以均数±标准差表示，bCP/R:为顺铂耐药株，cL02:为正常人肝细胞。实验结果表明，铱配合物对多种肿瘤细胞的半数抑制率明显低于经典化疗药物顺铂，但是对于顺铂耐药株有显著的抑制作用，而且对人正常肝细胞的毒性明显小于顺铂。这说明本专利技术所指的铱配合物可以用作抗癌药物应用。实施例2线粒体靶向定位取对数生长期的HeLa细胞，调整浓度为1×104/mL，接种到35mm细胞培养皿，待细胞生长到60％汇合度，加入铱配合物及线粒体特异性荧光探针Mito-Tracker，孵育30分钟，用激光共聚焦显微镜(ZeissAxioObserverD1)检测铱配合物在细胞内定位，实验结果如图1所示(A为铱配合物(绿色荧光)，B为线粒体特异性荧光探针(红色荧光)，C为细胞核染料DAPI图像(蓝色荧光)，D为图A、B与C的叠加)。实验表明，图1-D显示出由铱配合物发出的绿色荧光及线粒体特异性荧光探针发出的红色荧光叠加后呈现橘黄色荧光，证明所指铱配合物可以靶向定位在细胞的线粒体中。实施例3铱配合物诱导肿瘤细胞发生凋亡测定采用流式细胞术Annexin-V染色法，其原理为：磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种铱配合物在制备线粒体靶向抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述铱配合物的阳离子结构为
【技术特征摘要】
1.一种铱配合物在制备线粒体靶向抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述铱配合物的阳离子结构为阴离子为Cl-。2.根据权利要求1所述的铱配合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为卵巢肿瘤、乳腺肿瘤、肝肿瘤或肺肿瘤。3.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖秋妙，王金全，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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