一种新型的目的基因检测方法技术

本发明专利技术公开了一种新型的目的基因检测方法，使用结合了抗原或抗体的基因片段扩增的双链基因与一种粒子反应，该粒子是结合了识别上述抗原的抗体或识别上述抗体的抗原的粒子。通过测定反应后粒子的凝集程度来检测目的基因的存在。本发明专利技术采用抗原抗体结合的办法来检测目的基因，验证目的基因是否存在，抗原和抗体均不含放射性元素，不会造成放射性污染，利于在高校授课中推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种新型的目的基因检测方法
本专利技术涉及基因工程领域，尤其是涉及一种新型的目的基因检测方法。
技术介绍
基因是遗传的基本单元，携带有遗传信息的DNA或RNA序列，通过复制，把遗传信息传递给下一代，指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表达。基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术。是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。在基因工程领域，对目的基因的检测是至关重要的一步。现有的目的基因检测方法多是采用基因探针进行检测，凭借基因探针本身的特性来确定目的基因是否存在。在现有的技术中，通常采用放射性同位素作为示踪剂，以标示基因探针的位置。然而在放射性同位素示踪剂制备期间、贮存期间以用试验体系中所使用的溶剂、化学试剂、酶等可能会产生化学杂质、放射化学杂质及辐射自分解引起的放射性杂质，这些杂质的存在，使得示踪实验中使用的示踪剂不“纯”，而或多或少影响实验的结果，甚至会导致错误结论。并且放射性同位素示踪属于放射性实验，无论是每次实验或阶段性实验结束后，都可能有不同程度的放射性污染和放射性废物的出现，处理不当极易引发污染。
技术实现思路
本专利技术为克服上述情况不足，旨在提供一种能解决上述问题的技术方案。一种新型的目的基因检测方法，其具体步骤为：S1、细胞破碎：破碎样本细胞，并将破碎后的细胞残骸溶解到溶剂中，形成细胞器溶液；S2、分离细胞核：将细胞器溶液置于离心管中，再将离心管放入离心机中，经过离心机的离心作用，分离出细胞核溶液；S3、基因提取：将裂解剂加入细胞核溶液中，裂解细胞核得到基因溶液，并通过离心机的离心处理，将基因溶液进一步提纯；S4、基因处理：在基因溶液中添加限制性内切酶将基因溶液中的基因切割成片段，再将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞进行扩增，并且在扩增过程中添加可与目的基因结合的抗原或抗体；S5、探针制备：制作识别目的基因的探针，该探针为与抗体或抗原结合的质粒，该抗体或抗原识别添加在目的基因上的抗原或抗体；S6、基因检测：将探针添加到基因片段所在的溶液中，通过测定反应后粒子的凝集程度来检测目的基因的存在。作为本专利技术进一步的方案：所述步骤S1中，样本细胞取自同一生物个体。作为本专利技术进一步的方案：所述步骤S2中，离心管在使用前用50％硝酸清洗去除残余的DNA，并高压消毒。作为本专利技术进一步的方案：所述步骤S3中，使用等体积饱和酚作为裂解剂，裂解细胞核得到基因溶液。作为本专利技术进一步的方案：所述步骤S4中，与目的基因结合的抗原或抗体为纳米抗原或纳米抗体。作为本专利技术进一步的方案：所述步骤S5中，制备探针所用的抗原或抗体为纳米抗原或纳米抗体。作为本专利技术进一步的方案：所述步骤S6中，测定反应后粒子的凝集程度的方法为电泳法。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术采用抗原抗体结合的办法来检测目的基因，验证目的基因是否存在，抗原和抗体均不含放射性元素，不会造成放射性污染，利于在高校授课中推广使用。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例1中，一种新型的目的基因检测方法，其具体步骤为：S1、细胞破碎：破碎样本细胞，并将破碎后的细胞残骸溶解到溶剂中，形成细胞器溶液；S2、分离细胞核：将细胞器溶液置于离心管中，再将离心管放入离心机中，经过离心机的离心作用，分离出细胞核溶液；S3、基因提取：将裂解剂加入细胞核溶液中，裂解细胞核得到基因溶液，并通过离心机的离心处理，将基因溶液进一步提纯；S4、基因处理：在基因溶液中添加限制性内切酶将基因溶液中的基因切割成片段，再将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞进行扩增，并且在扩增过程中添加可与目的基因结合的抗原；S5、探针制备：制作识别目的基因的探针，该探针为与抗体结合的质粒，该抗体识别添加在目的基因上的抗原；S6、基因检测：将探针添加到基因片段所在的溶液中，通过测定反应后粒子的凝集程度来检测目的基因的存在。本专利技术实施例2中，一种新型的目的基因检测方法，其具体步骤为：S1、细胞破碎：破碎样本细胞，并将破碎后的细胞残骸溶解到溶剂中，形成细胞器溶液；S2、分离细胞核：将细胞器溶液置于离心管中，再将离心管放入离心机中，经过离心机的离心作用，分离出细胞核溶液；S3、基因提取：将裂解剂加入细胞核溶液中，裂解细胞核得到基因溶液，并通过离心机的离心处理，将基因溶液进一步提纯；S4、基因处理：在基因溶液中添加限制性内切酶将基因溶液中的基因切割成片段，再将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞进行扩增，并且在扩增过程中添加可与目的基因结合的抗体；S5、探针制备：制作识别目的基因的探针，该探针为与抗原结合的质粒，该抗原识别添加在目的基因上的抗体；S6、基因检测：将探针添加到基因片段所在的溶液中，通过测定反应后粒子的凝集程度来检测目的基因的存在。本专利技术的工作原理是：本专利技术使用结合了抗原或抗体的基因片段扩增的双链基因与一种粒子反应，该粒子是结合了识别上述抗原的抗体或识别上述抗体的抗原的粒子。通过测定反应后粒子的凝集程度来检测目的基因的存在。对于本领域技术人员而言，显然本专利技术不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本专利技术的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本专利技术。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本专利技术的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本专利技术内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型的目的基因检测方法，其特征在于，其具体步骤为：S1、细胞破碎：破碎样本细胞，并将破碎后的细胞残骸溶解到溶剂中，形成细胞器溶液；S2、分离细胞核：将细胞器溶液置于离心管中，再将离心管放入离心机中，经过离心机的离心作用，分离出细胞核溶液；S3、基因提取：将裂解剂加入细胞核溶液中，裂解细胞核得到基因溶液，并通过离心机的离心处理，将基因溶液进一步提纯；S4、基因处理：在基因溶液中添加限制性内切酶将基因溶液中的基因切割成片段，再将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞进行扩增，并且在扩增过程中添加可与目的基因结合的抗原或抗体；S5、探针制备：制作识别目的基因的探针，该探针为与抗体或抗原结合的质粒，该抗体或抗原识别添加在目的基因上的抗原或抗体；S6、基因检测：将探针添加到基因片段所在的溶液中，通过测定反应后粒子的凝集程度来检测目的基因的存在。

【技术特征摘要】
1.一种新型的目的基因检测方法，其特征在于，其具体步骤为：S1、细胞破碎：破碎样本细胞，并将破碎后的细胞残骸溶解到溶剂中，形成细胞器溶液；S2、分离细胞核：将细胞器溶液置于离心管中，再将离心管放入离心机中，经过离心机的离心作用，分离出细胞核溶液；S3、基因提取：将裂解剂加入细胞核溶液中，裂解细胞核得到基因溶液，并通过离心机的离心处理，将基因溶液进一步提纯；S4、基因处理：在基因溶液中添加限制性内切酶将基因溶液中的基因切割成片段，再将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞进行扩增，并且在扩增过程中添加可与目的基因结合的抗原或抗体；S5、探针制备：制作识别目的基因的探针，该探针为与抗体或抗原结合的质粒，该抗体或抗原识别添加在目的基因上的抗原或抗体；S6、基因检测：将探针添加到基因片段所在的溶液中，通过测定反应后粒子的凝集程...

【专利技术属性】
技术研发人员：佟艳辉，潘虹，袁霞，
申请(专利权)人：上海中溢精准医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31