The invention discloses a method for preparing tumor stem cells and a special kit thereof. The method consists of the following steps in sequence: taking tumor cells, inoculating them into induction medium and culturing them for 3-5 days; inoculating them into tumor cell ball culture medium and culturing them for 1-3 days; inoculating them into tumor cell ball culture medium and suspension culture to obtain tumor stem cells; and containing MEK inhibitor, GSK3 inhibitor and HDAC inhibitor in induction medium. The tumor cell ball culture medium was mTeSR medium containing penicillin, streptomycin and B27 medium additives. Experiments show that the tumor stem cells prepared by the method have high expression of Oct4, Nanog and CD133, slow growth, and biological characteristics such as efflux Hoechst, tolerance to chemotherapeutics and so on. The characteristics of the tumor stem cells are obtained completely. The invention has great application value.
【技术实现步骤摘要】
一种制备肿瘤干细胞的方法及其专用试剂盒
本专利技术属于生物医学领域,具体涉及一种制备肿瘤干细胞的方法及其专用试剂盒。
技术介绍
胰腺癌是一种高度致命性消化道恶性肿瘤,恶性程度高,转移和复发率高,预后差。由于胰腺癌早期缺乏典型的临床表现,确诊时往往已经进入晚期,再加上胰腺癌对化疗药物不敏感,广泛耐药,尽管近几年在胰腺癌的医疗诊断和手术治疗方面都取得了一定进展,但胰腺癌仍然是癌症相关死亡的主要原因。研究证实,在血液恶性肿瘤和包括胰腺癌在内的实体瘤中存在肿瘤干细胞(CSCs),肿瘤干细胞在肿瘤复发中起着至关重要的作用。肿瘤干细胞理论认为,肿瘤存在异质性,肿瘤内存在一小部分能够自我更新,多效分化,高致瘤性以及对放疗化疗具有抵抗能力的癌细胞,其余大部分细胞失去生长分化潜能,没有或者只有有限的增殖分化能力,经过短暂的分化后最终死亡。肿瘤干细胞学说为胰腺癌发病机制和治疗策略的研究提供了新的依据,只有清除肿瘤干细胞才能根治恶性肿瘤,否则残存的肿瘤干细胞依然会导致肿瘤的复发,以前对于胰腺癌的研究忽略了肿瘤干细胞的存在,目前采取的治疗方法不能有效的清除胰腺癌中的肿瘤干细胞,这或许是导致胰腺癌治疗失败,肿瘤转移复发的根本原因。目前认为消除肿瘤干细胞是获得癌症永久性治愈的重要策略。肿瘤干细胞的发现和研究为癌症的研究和治疗带来了新的方向。2007年,Li等将人原发胰腺癌标本种植于非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠皮下,对第一代及传代后的肿瘤细胞进行标记,通过流式分选技术分选出0.2%-0.8%CD24+CD44+ESA+细胞,该亚群细胞在NOD/SCID小鼠体内 ...
【技术保护点】
1.用于制备肿瘤干细胞的试剂盒;所述试剂盒含有诱导培养基;所述诱导培养基中含有MEK抑制剂、GSK3抑制剂和HDAC抑制剂。
【技术特征摘要】
1.用于制备肿瘤干细胞的试剂盒;所述试剂盒含有诱导培养基;所述诱导培养基中含有MEK抑制剂、GSK3抑制剂和HDAC抑制剂。2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述诱导培养基中含有0.3~0.7μMMEK抑制剂、1~5μMGSK3抑制剂和0.8~1.2μMHDAC抑制剂。3.如权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于:所述MEK抑制剂为PD0325901;所述GSK3抑制剂为a1)或a2)或a3)或a4):a1)CHIR99021;a2)B216763;a3)BIO;a4)TWS119;所述HDAC抑制剂为VPA。4.如权利要求1至3任一所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还含有肿瘤细胞球培养基;所述肿瘤细胞球培养基为含有1340U/100mL~2000U/100mL青霉素、800U/100mL~1200U/100mL链霉素和15μL/mL~25μL/mLB27培养基添加剂的干细胞无血清完全培养基。5.一种制备肿瘤干细胞的方法,依次包括如下步骤:(1)取肿瘤细胞,接种至权利要求1至3中任一所述诱导培养基,贴壁培养3d~5d;(2)接种至权利要求4...
【专利技术属性】
技术研发人员:贾艳军,李鹰,
申请(专利权)人:首都医科大学附属北京朝阳医院,
类型:发明
国别省市:北京,11
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