一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组、其LAMP检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，提供一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组，其包括有外引物对和内引物对，其针对金黄色葡萄球菌上的特定区域，利用LAMP技术能够扩增金黄色葡萄球菌上的靶基因，实现金黄色葡萄球菌的快速检测，同时，提升金黄色葡萄球菌检测结果的准确率。此外，本发明专利技术还提供一种包括该LAMP检测引物组的金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒以及其检测方法，其能够实现金黄色葡萄球菌的快速检测，具有灵敏度高，特异性好的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组、其LAMP检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组、其LAMP检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)属于微球菌科葡萄球菌属，是一种革兰氏阳性球菌，广泛分布于自然界，如空气、水、人和动物的排泄物中，是人类化脓性感染和细菌性中毒中最常见的病原体之一，可引起局部化脓性感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至引起败血症、脓毒症等全身感染。近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占全球感染的第二位，所以金黄色葡萄球菌所引起的疾病已成为全球性的公共卫生问题，严重危害人类安全和健康。而对于金黄色葡萄球菌的感染的快速检验，是指导临床感染治疗用药的关键。目前对于金黄色葡萄球菌包括耐药菌的检测方法主要是微生物培养及生化鉴定、免疫检测和各种PCR检测等。微生物培养及生化鉴定培养方法是检验金黄色葡萄球菌的经典方法，存在需要专业的实验室，操作繁琐，检测时间长等缺点。目前，多采用PCR技术测到金黄色葡萄球菌，但因技术对模板的数量和质量都有较高的要求，需要热循环及凝胶电泳等设备，价格相对昂贵，很难做到现场快速测定。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组，其利用金黄色葡萄球菌的特定区域，进行LAMP，能够快速、简便且精准地实现金黄色葡萄球菌的扩增。本专利技术的第二目的在于提供一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其利用上述LAMP检测引物组进行LAMP，能够有效缩短检测时间，提高金黄色葡萄球菌检测的准确率。本专利技术的第三目的在于提供一种金黄色葡萄球菌的检测方法，其利用上述金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组或其LAMP检测试剂盒进行金黄色葡萄球菌的快速检测，其具有灵敏度高，特异性好的优点。本专利技术是这样实现的：一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组，其包括有外引物对和内引物对，外引物对包括序列如SEQIDNo.1所示的上游引物以及序列SEQIDNo.2所示的下游引物，内引物对包括序列如SEQIDNo.3的上游引物以及序列如SEQIDNo.4所示的下游引物。根据上述的LAMP检测引物组在扩增或检测金黄色葡萄球菌中的应用。一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其包括有如上述金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组。一种金黄色葡萄球菌的检测方法，其包括以下步骤：利用外引物对、内引物对和/或环引物对在LAMP反应体系下，扩增目的基因；外引物对包括序列如SEQIDNo.1所示的上游引物以及序列SEQIDNo.2所示的下游引物，内引物对包括序列如SEQIDNo.3的上游引物以及序列如SEQIDNo.4所示的下游引物；环引物对包括序列如SEQIDNo.5所示的上游引物以及序列如SEQIDNo.6所示的下游引物。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术实施例提供一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组，其包括有外引物对和内引物对，其针对金黄色葡萄球菌上的特定区域，利用LAMP技术能够扩增金黄色葡萄球菌上的靶基因，实现金黄色葡萄球菌的快速检测，同时，提升金黄色葡萄球菌检测结果的准确率。此外，本专利技术还提供一种包括该LAMP检测引物组的金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒以及其检测方法，其能够实现金黄色葡萄球菌的快速检测，具有灵敏度高，特异性好的优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术第七实施例中的不同硫酸镁浓度下的LAMP反应颜色变化图；图2为本专利技术第七实施例中的不同硫酸镁浓度下的LAMP反应电泳图(其中，M:markerDL2000；C:阴性对照；1:MgSO4浓度2mM；2:3mM；3:4mM；4:5mM；5:6mM；6:7mM；7:8mM)；图3为本专利技术第八实施例中的LAMP特异性实验结果图(其中，M:markerDL2000；C:阴性对照；1:金黄色葡萄球菌ATCC29213；2:金黄色葡萄球菌ATCC25923；3:金黄色葡萄球菌ATCC43300；4:人葡萄球菌；5:腐生葡萄球菌；6:肺炎链球菌；7:表面葡萄球菌；8:铜绿假单胞菌；9:粪肠球菌)；图4为本专利技术第九实施例中金黄色葡萄球菌ATCC29213灵敏度实验(1:1ng/μL；2:100pg/μL；3:10pg/μL；4:1pg/μL；5:100fg/μL；6:10fg/μL；7:1fg/μL)；图5为为本专利技术第九实施例中金黄色葡萄球菌ATCC29213灵敏度实验电泳图(M:markerDL2000；C:阴性对照；1:1ng/μL；2:100pg/μL；3:10pg/μL；4:1pg/μL；5:100fg/μL；6:10fg/μL；7:1fg/μL)；图6为本专利技术第九实施例中金黄色葡萄球菌ATCC25923灵敏度实验(1:1ng/μL；2:100pg/μL；3:10pg/μL；4:1pg/μL；5:100fg/μL；6:10fg/μL；7:1fg/μL)；图7为本专利技术第九实施例中金黄色葡萄球菌ATCC25923灵敏度实验电泳图(M:markerDL2000；C:阴性对照；1:1ng/μL；2:100pg/μL；3:10pg/μL；4:1pg/μL；5:100fg/μL；6:10fg/μL；7:1fg/μL)。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组、其LAMP检测试剂盒及其检测方法进行具体说明。LAMP，Loop-mediatedIsothermalamplification，又称环介导等温扩增技术。LAMP法的特征是针对靶基因上的六个区域设计四条引物，利用链置换型DNA聚合酶在恒温条件下进行扩增反应，反应能产生大量的扩增产物，即焦磷酸镁白色沉淀，通过肉眼观察白色沉淀的有无来判断靶基因是否存在。本专利技术实施例采用环介导等温扩增(LAMP)技术，并针对金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)设计了LAMP检测引物组。本专利技术实施例提供的一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组，其包括有外引物对和内引物对，外引物对包括序列如SEQIDNo.1所示的上游引物以及序列SEQIDNo.2所示的下游引物，内引物对包括序列如SEQIDNo.3的上游引物以及序列如SEQIDNo.4所示的下游引物。进一步地，在本专利技术的一些实施例中，金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组还可以包括有环引物对，环引物对包括序列如SEQIDNo.5所示的上游引物以及序列如SEQIDNo.6所示的下游引物。环引物对可以在外引物对以及内引物对的基础上增加LAMP扩增反应的速率，有效提高目的基因的扩增效率。本专利技术实施例提供上述金黄色葡萄球菌的LAM本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组，其特征在于，其包括有外引物对和内引物对，所述外引物对包括序列如SEQ ID No.1所示的上游引物以及序列SEQ ID No.2所示的下游引物，所述内引物对包括序列如SEQ ID No.3的上游引物以及序列如SEQ ID No.4所示的下游引物。

【技术特征摘要】
1.一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组，其特征在于，其包括有外引物对和内引物对，所述外引物对包括序列如SEQIDNo.1所示的上游引物以及序列SEQIDNo.2所示的下游引物，所述内引物对包括序列如SEQIDNo.3的上游引物以及序列如SEQIDNo.4所示的下游引物。2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组，其特征在于，还包括有环引物对，所述环引物对包括序列如SEQIDNo.5所示的上游引物以及序列如SEQIDNo.6所示的下游引物。3.如权利要求1或2所述的LAMP检测引物组在扩增或检测金黄色葡萄球菌中的应用。4.一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，其包括有如权利要求1或2所述金黄色葡萄球菌的LAMP检测引物组。5.根据权利要求4所述的金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，其包括有以下一种或多种成分：BstDNA聚合酶、10×反应缓冲液、染料、dNTPs、标准阳性模板以及阴性对照。6.一种金黄色葡萄球菌的检测方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：李杉，王健松，杨佳宁，张瑞玲，张雷，
申请(专利权)人：华南理工大学，广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂，
类型：发明
国别省市：广东,44