胎盘干细胞群制造技术

本发明专利技术提供了胎盘干细胞和胎盘干细胞群，及其培养、增殖和扩增的方法。本发明专利技术还提供了分化胎盘干细胞的方法。本发明专利技术进一步提供了使用胎盘干细胞进行分析和移植的方法。

Placental stem cell population

The invention provides a placental stem cell and a placental stem cell population, and a method for its culture, proliferation and expansion. The invention also provides a method for differentiating placenta stem cells. The invention further provides a method for analyzing and transplanting the placenta stem cells.

【技术实现步骤摘要】
胎盘干细胞群本申请是申请日为2006年12月28日、申请号为200680053575.3、名称为“胎盘干细胞群”的专利技术申请的分案。本申请要求2005年12月29日提交的美国临时申请号60/754,968的利益；以及2006年12月22日提交的美国临时申请号60/846,641的利益。1.专利
本专利技术提供了分离的胎盘干细胞，胎盘干细胞群，包含该干细胞的组合物，以及获得该干细胞的方法。2.专利技术背景人类干细胞是全能或多能前体细胞，其能产生多种成熟人类细胞系。有证据证明，干细胞可用于恢复许多，如果不是全部的，组织，以及恢复生理和解剖功能。许多不同类型的哺乳动物干细胞已经被表征。参见，例如，Caplan等，美国专利号5,486,359(人类间充质干细胞)；Boyse等，美国专利号5,004,681(胎儿和新生儿造血干细胞和祖细胞)；Boyse等，US5,192,553(相同的)；Beltrami等，Cell114(6):763-766(2003)(心脏干细胞)；Forbes等，J.Pathol.197(4):510-518(2002)(肝干细胞)。脐带血和来源于脐带血的全部有核细胞已被用于移植，以部分或完全地恢复已经进行消融治疗(ablativetherapy)的患者的造血功能。3.专利技术概述本专利技术提供了分离的胎盘干细胞，胎盘干细胞群，包含该干细胞的组合物，以及获得该干细胞的方法。本专利技术首先提供了分离的干细胞，包含这种干细胞的细胞群，其中该干细胞存在于并可分离自胎盘组织(例如，羊膜、绒毛膜、胎盘小叶等等)。胎盘干细胞显示干细胞的一种或多种特性(例如，显示与干细胞相关的标记，在未分化状态培养时复制至少10-20倍，分化成三个胚层的成熟细胞，等等)，并能附着于组织培养基质(例如，组织培养塑料如组织培养皿或多孔板的表面)。在一实施方案中，本专利技术提供了一种分离的胎盘干细胞，其是CD200+或HLA-G+。在特定的实施方案中，所述细胞是CD200+和HLA-G+。在特定的实施方案中，所述细胞是CD73+和CD105+。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-或CD45-。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-和CD45-。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-、CD45-、CD73+和CD105+。在另一特定的实施方案中，当在允许拟胚体形成的条件下培养所述群时，所述干细胞促进包含胎盘干细胞的分离的胎盘细胞群中一种或多种拟胚体的形成。在另一实施方案中，本专利技术提供了一种分离的胎盘细胞群，其包括，例如，被富集的CD200+、HLA-G+干细胞。在不同的实施方案中，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或者至少95％或以上的所述分离的胎盘细胞是CD200+、HLA-G+干细胞。在上述群体的特定的实施方案中，所述干细胞是CD73+和CD105+。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-或CD45-。在更特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-、CD45-、CD73+和CD105+。在其它的特定实施方案中，所述群体被扩增，例如，传代至少1次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的实施方案中，当在允许形成拟胚体的条件下培养该群体时，所述群体形成一种或多种拟胚体。在另一实施方案中，本专利技术提供了一种分离的干细胞，其是CD73+、CD105+和CD200+。在特定的实施方案中，所述干细胞是HLA-G+。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-或CD45-。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-和CD45-。在更特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-、CD45-和HLA-G+。在另一特定的实施方案中，当在允许拟胚体形成的条件下培养所述群体时，所述干细胞促进包含干细胞的分离的胎盘细胞群形成一种或多种拟胚体。在另一实施方案中，本专利技术提供了一种分离的胎盘细胞群，其包括，例如，被富集的CD73+、CD105+、CD200+干细胞。在不同的实施方案中，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或者至少95％的所述分离的胎盘细胞是CD73+、CD105+、CD200+干细胞。在所述群体的特定的实施方案中，所述干细胞是HLA-G+。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-或CD45-。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-和CD45-。在更特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-、CD45-和HLA-G+。在其它的特定实施方案中，所述群体被扩增，例如，传代至少1次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的实施方案中，在允许形成拟胚体的条件下培养该群体时，所述群体形成一种或多种拟胚体。本专利技术还提供了一种分离的干细胞，其是CD200+和OCT-4+。在特定的实施方案中，干细胞是CD73+和CD105+。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是HLA-G+。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-或CD45-。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-和CD45-。在更特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-、CD45-、CD73+、CD105+和HLA-G+。在另一特定的实施方案中，当在允许形成拟胚体的条件下培养所述群体时，所述干细胞促进在包含胎盘干细胞的分离的胎盘细胞群中形成一种或多种拟胚体。在另一实施方案中，本专利技术提供了一种分离的细胞群，其包括，例如，富集的CD200+、OCT-4+干细胞。在不同的实施方案中，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或至少95％的所述分离的胎盘细胞是CD200+、OCT-4+干细胞。在上述群体的特定的实施方案中，所述干细胞是CD73+和CD105+。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是HLA-G+。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-或CD45-。在更特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-、CD45-、CD73+、CD105+和HLA-G+。在其它的特定实施方案中，所述群体被扩增，例如，已经传代至少1次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定实施方案中，当在允许形成拟胚体的条件下培养该群体时，所述群体形成一种或多种拟胚体。在另一实施方案中，本专利技术提供了一种分离的干细胞，其是CD73+和CD105+，而且当在允许形成拟胚体的条件下培养所述群体时，其促进在包含所述干细胞的分离的胎盘细胞群中形成一种或多种拟胚体。在特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-或CD45-。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是CD34-、CD38-和CD45-。在另一特定的实施方案中，所述干细胞是OCT-4+。在更特定的实施方案中，所述干细胞是OCT-4+、CD34-、C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生产细胞群的方法，包括鉴定胎盘细胞，该细胞附着于基质并∶表达CD200和HLA‑G；表达CD73、CD105和CD200；表达CD200和OCT‑4；表达CD73、CD105和HLA‑G；表达CD73和CD105，和当所述群体在允许形成拟胚体的条件下培养时，促进在胎盘细胞群中形成一种或多种拟胚体；或表达OCT‑4，和(c)当所述群体在允许形成拟胚体的条件下培养时，促进在胎盘细胞群中形成一种或多种拟胚体；和从其它的细胞中分离所述细胞以形成细胞群。

【技术特征摘要】
2005.12.29 US 60/754,968;2006.09.22 US 60/846,6411.一种生产细胞群的方法，包括鉴定胎盘细胞，该细胞附着于基质并∶表达CD200和HLA-G；表达CD73、CD105和CD200；表达CD200和OCT-4；表达CD73、CD105和HLA-G；表达CD73和CD105，和当所述群体在允许形成拟胚体的条件下培养时，促进在胎盘细胞群中形成一种或多种拟胚体；或表达OCT-4，和(c)当所述群体在允许形成拟胚体的条件下培养时，促进在胎盘细胞群中形成一种或多种拟胚体；和从其它的细胞中分离所述细胞以形成细胞群。2.权利要求1的方法，其中所述基质包括纤粘连蛋白。3.权利要求1的方法，其中所述鉴定使用抗体完成。4.权利要求1的方法，其中所述鉴定使用流式细胞仪完成。5.权利要求1的方法，其中所述分离使用磁珠完成。6.权利要求1的方法，其中所述分离通过荧光激活细胞分选完成。7.权利要求1的方法，其中在所述分离以后，扩增所述细胞群。8.一种生产干细胞系的方法，包括用编码生长促进蛋白的DNA序列转化干细胞；和把所述干细胞暴露于促进所述生长促进蛋白生产的条件下。9.权利要求8的方法，其中所述生长促进蛋白是v-myc、N-myc、c-myc、p53、SV40大T抗原、多瘤大T抗原、E1a腺病毒或人乳头瘤病毒E7蛋白。10.权利要求8的方法，其中所述DNA序列是可调控的。11.权利要求8的方法，其中所述DNA序列是可受四环素调控的。12.权利要求8的方法，其中所述生长促进蛋白具有可调控活性。13.权利要求8的方法，其中所述生长促进蛋白是温度敏感突变体。14.一种生产干细胞群的方法，包括鉴定以比在培养中已经进行与所述胎盘干细胞相同的传代次数的骨髓来源的间充质干细胞可检测地更高的水平表达一种或多种基因的附着胎盘干细胞，其中所述基因是ACTG2、ADARB1、AMIGO2、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、COL4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PJP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，以及分离所述胎盘细胞。15.权利要求14的方法，其中所述附着的胎盘细胞以比已经在培养中进行与所述胎盘干细胞相同的传代次数的骨髓来源的间充质干细胞可检测地更高的水平表达5种或更多种所述基因。16.权利要求14的方法，其中所述附着的胎盘细胞以比已经在培养中进行与所述胎盘干细胞相同的传代次数的骨髓来源的间充质干细胞可检测地更高的水平表达10种或更多种所述基因。17.权利要求14的方法，其中所述附着的胎盘细胞以比已经在培养中进行与所述胎盘干细胞相同的传代次数的骨髓来源的间充质干细胞可检测地更高的水平表达20种或更多种所述基因。18.权利要求14的方法，其中所述附着的胎盘细胞以高于已经在培养中进行与所述胎盘干细胞相同的传代次数的骨髓来源的间充质干细胞的可检测水平表达每种所述基因。19.一种制备胎盘干细胞库的方法，包括∶扩增来自人分娩后胎盘的原代培养胎盘干细胞至第一若干群倍增；冷冻保藏所述胎盘干细胞以形成主细胞库；扩增来自主细胞库的大量胎盘干细胞至第二若干群倍增；冷冻保藏所述胎盘干细胞以形成工作细胞库；扩增来自工作细胞库的大量胎盘干细胞至第三若干群倍增；和以单独剂量冷冻保藏所述胎盘干细胞，其中所述单独剂量共同组成胎盘干细胞库。20.权利要求19的方法，其中群倍增的总数为大约20。21.权利要求19的方法，其中所述第一若干群倍增为大约4次群倍增；所述第二若干群倍增为大约8次群倍增；和所述第三若干群倍增为大约8次群倍增。22.权利要求19的方法，其中所述原代培养胎盘干细胞包括来自胎盘灌注液的胎盘干细胞。23.权利要求19的方法，其中所述原代培养胎盘干细胞包括来自消化的胎盘组织的胎盘干细胞。24.权利要求19的方法，其中所述原代培养胎盘干细胞包括来自胎盘灌注液和来自消化的胎盘组织的胎盘干细胞。25.权利要求19的方法，其中所述胎盘干细胞原代培养物中的全部所述胎盘干细胞来自于同一胎盘。26.权利要求19的方法，进一步包括从来自所述工作细胞库的所述大量的所述胎盘干细胞中选择CD200+或HLA-G+胎盘干细胞，以形成单独剂量。27.权利要求19的方法，其中所述单独剂量包括大约104到大约105胎盘干细胞。28.权利要求19的方法，其中所述单独剂量包括大约105到大约106胎盘干细胞。29.权利要求19的方法，其中所述单独剂量包括大约106到大约1...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨沙·道恩·阿布拉门逊，詹姆士·W·爱丁格，赫伯特·费莱克，罗伯特·J·哈黎里，克利斯登·S·拉巴左，马里安·佩雷拉，王佳伦，叶倩，
申请(专利权)人：人类起源公司，
类型：发明
国别省市：美国,US