一种生物活性胰岛调糖宝制剂及制备方法技术

本发明专利技术提供的是一种生物活性胰岛调糖宝制剂及制备方法，该制剂是以动物（猪、牛、羊）胰岛活性细胞和胰脏蛋白多肽为主要原料，加入药用辅料组成，其具体制备方法为：从健康动物胰脏中经过分离、纯化、扩增培养、包被和超滤等一系列集成化工艺制备高活性胰岛细胞包被液、胰蛋白多肽液，将二者按比例合并后加入稳定剂和促吸收剂，最终经冷冻干燥制成冻干燥粉，也可制成肠溶胶囊。本发明专利技术通过生物学手段直接对机体补充胰岛活性细胞和胰蛋白多肽，使体外培养的大量活性胰岛细胞、蛋白多肽通过机体吸收后，在体内充分发挥生物学群体效应，维持正常糖代谢水平，还可有效控制糖尿病并发症。

Preparation and preparation method of bioactive islet glycemic preparation

The invention provides a bioactive islet glycemic preparation and a preparation method. The preparation is composed of an animal (pig, ox * goat) islet active cell and a pancreas protein polypeptide as the main raw material, and is added with pharmaceutical excipients. The specific preparation method is: separation, purification, amplification, cultivation and package from the pancreas of healthy animals. High activity islet cell coating solution and trypsin polypeptide solution were prepared by a series of integrated processes, such as coating and ultrafiltration. The two were combined in proportion, then stabilizers and absorbents were added. Finally, freeze-dried powder and enteric-coated capsule were prepared by freeze-drying. The invention directly supplements islet active cells and pancreatic protein polypeptides to the body by biological means so that a large number of active islet cells and protein polypeptides cultured in vitro are absorbed by the body, and the biological colony effect is fully exerted in the body to maintain normal glucose metabolism level, and the complications of diabetes can be effectively controlled.

【技术实现步骤摘要】
一种生物活性胰岛调糖宝制剂及制备方法
本专利技术属于生物制备
，尤其涉及一种生物活性胰岛调糖宝制剂及制备方法。
技术介绍
糖尿病是血中胰岛素绝对或相对不足，导致血糖过高，出现糖尿，进而引起脂肪和蛋白质代谢紊乱，临床上可出现多尿、烦渴、多饮、多食、消瘦等表现，糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。由于经济的发展、人们饮食结构的改变以及人口老龄化，使糖尿病患者迅速增加，糖尿病成为危害人类健康的全球性疾病，发病率为3-5%；死亡率仅次于心血管病和肿瘤，预测到2025年全世界糖尿病患者将达到3亿人。因为糖尿病具有病程长、并发症多、致残率高等原因，给个人、家庭和国家带来极大的负担。糖尿病目前尚无治愈的有效方法，控制患者血糖水平、预防并发症的发生是治疗糖尿病的关键措施。通过直接注射胰岛素可明显降低血糖含量，但长期注射胰岛素可使局部皮肤红肿、发痒、硬结、感染、皮下脂肪萎缩或纤维化增生。每天注射胰岛素不仅给患者带来不便及痛苦，更重要的是胰岛素的应用仅能控制高血糖，无法预防其慢性并发症的发生。目前临床上常用的口服降糖药具有一定的副作用，可引起消化系统的不良反应，有些还会引起麻疹、贫血、白细胞和血小板减少症、头晕乏力等症状。因此寻找开发能有效地控制血糖和糖尿病并发症且副作用低的新产品已引起人们的关注。胰岛素是由胰岛β细胞分泌的，当体内各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗，或者胰岛β细胞受到细胞介导性，使自身免疫性被破坏，就会引起血中胰岛素绝对或相对缺乏，所以机体胰岛β细胞能不能正常分泌足量代谢所需的胰岛素是血糖恢复健康水平的关键因素。本专利技术另辟蹊径，通过生物学手段直接对机体补充胰岛活性细胞和胰蛋白多肽，使体外培养的大量活性胰岛细胞通过机体吸收后，在体内充分发挥生物学效应，释放胰岛素，保护胰岛营养水平，调节糖代谢，有效地控制血糖生态平衡和糖尿病并发症，目前尚未发现有胰岛活性细胞调糖口服剂的使用、销售及报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种生物活性高、无副作用、能规模化生产的生物活性胰岛调糖宝口服制剂。该制剂是从动物（猪、牛、羊）新鲜胰脏分离出的胰岛细胞，应用无血清培养技术进行大量扩增培养，得到具有高活性和高纯度的动物胰岛细胞，并按比例加入了联产工艺中提取的胰脏蛋白多肽，同时添加了稳定剂和促吸收剂，使体外培养的胰岛细胞能够保持高活性，在体内能够被充分吸收，发挥生物学群体效应，释放胰岛素，有效的调节血糖水平。同时提供其相应的便于规模化生产、绿色环保的制备方法是本专利技术的另一个专利技术目的。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种生物活性胰岛调糖宝制剂，是以动物胰脏提取的胰岛活性细胞和胰脏蛋白多肽为主要原料，加入药用辅料组成口服制剂，具体成分为每1000mL制剂中含：胰岛细胞包被液30-50%；胰蛋白多肽液20%-40%；甘胆酸钠3-5%；血浆白蛋白1-5%；羧甲基壳聚糖1-3%；木糖醇5-10%，余量为醋酸盐缓冲液，各组份充分混合后调pH值为7.0-7.5。所述动物胰脏为猪、牛、羊的胰脏。本专利技术的生物活性胰岛调糖宝制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）动物胰脏的处理取新鲜或冷冻胰脏，去除包膜、血管、结缔组织，分离出胰岛组织放入4℃PBS溶液中浸泡1-2h；其余胰脏组织依次用绞肉机、胶体磨制成胰浆，加入胰浆体积2-3倍的86-88%的乙醇和占胰浆重量5%的草酸，在10-15℃条件下搅拌提取3h，离心，上层为胰蛋白多肽乙醇液，下层沉淀为胰渣，可作为提取胰酶的原料另做处理；（2）胰岛细胞包被液的制备胰岛细胞的分离及纯化采用细胞球珠研磨仪使胰岛与其它胰腺部分脱离，将研磨浆放入4℃Hank`s液中，过500μm金属不绣钢网；将收集的过滤物在4℃环境中，用1500r/min离心5min，收集细胞沉淀物，用常规葡聚糖不连续密度梯度离心法纯化，将纯化细胞与RPMI-1640混匀，取样镜检，观察胰岛细胞形态、活性、纯度、数量、成活率；从分离到纯化结束应控制在5h左右；胰岛细胞的扩增培养在RPMI-1640培养液加入生长因子纤维连接蛋白，每升培养基加入5-10mg，于5%的CO2培养罐37℃培养，24-48h换一次培养液，检测细胞活性，形态、胰岛素释放量等；使细胞总数达到8×105个，活力95%以上；胰岛细胞包被液的制备：在培养合格的胰岛细胞液中添加钨酸钠溶液使该细胞液中的钨酸钠浓度为50-500μmol/L，添加占胰岛细胞液体积8-10%的聚乙二醇4000-8000，制成胰岛细胞包被液；这样既保护了胰岛细胞，同时也为胰岛细胞在体内充分发挥生物学效应创造良好的条件；（3）胰蛋白多肽液的制备将步骤（1）中胰脏处理后的蛋白多肽乙醇液在30-40℃以下减压蒸去乙醇，然后用生理盐水稀释至蛋白含量2%左右，用NAOH调pH至7.5-8.0，过滤，收集过滤液。将过滤液通过截留分子量1万的超滤装置截留液与（1）中胰渣合并用于提取胰酶；收集透过液即为胰蛋白多肽液；（4）生物活性胰岛调糖宝成品的制备：按比例取各成分（1000mL）：A、胰岛细胞包被液：30-50%B、胰蛋白多肽液：20-40%C、血清白蛋白：1-5%；D、甘胆酸钠：3-5%；E、羧甲基壳聚糖：1-3%；F、木糖醇：5-10%：余量为醋酸盐缓冲液；各组份充分混合后调pH值为7.0-7.5；制备步骤：先将A、B、C三种分别用生物膜过滤除菌然后混合得混合物1，冷藏保存待用；然后将D、E、F三种混合均匀，用高温消毒法灭菌，制成混合物2；最后将混合物1和2合并，用灭菌醋酸盐缓冲液稀释至1000mL，制成冷冻预混液；将冷冻预混液放入冷冻干燥机，制成冷冻干燥粉，在冷藏条件下密封保存待用；按市场需求和规格要求，制成冻干制剂或肠溶胶囊制剂，即得成品。本专利技术产品中加入从胰脏中提取的蛋白多肽，不但可为胰岛细胞提供良好的营养环境，维持胰岛细胞的活性，还可以为机体补充蛋白、多肽，激活免疫系统，增强人体免疫能力，促进和维持细胞正常的新陈代谢，调节脂代谢，抗动脉硬化，改善微循环；调节体内糖代谢紊乱，改善胰岛功能，解除细胞对胰岛的抵抗，改善三多一少、浮肿等症状，有效控制并发症。本专利技术产品中加入的甘胆酸钠可促进机体对多种给药途径如鼻腔、直肠、小肠、大肠、口颊、舌下及口服胰岛素的吸收，常作为胰岛素的促吸收剂，对血糖降低具有明显的帮助效果；羧甲基壳聚糖是一种水溶性壳聚糖衍生物，具有高分子天然材料属性，抗菌性强，是一种两性聚电解质，稳定性强，在医药中常作为稳定剂；血清白蛋白合成于肝脏，是脊椎动物血浆中含量最丰富的蛋白质，羧甲基壳聚糖和血清白蛋白相溶可形成载血清白蛋白壳聚糖微球，具有明显的球状结构，可提高蛋白药物的稳定性，控制其释放速度，延长药物作用时间,提高药物生物利用度。在制备胰岛细胞包被液中加入的钨酸钠是一种微量元素，近年来研究发现钨酸钠具有很强的降糖作用，而且钨酸钠毒性低，生物利用度高，具有促进细胞有丝分裂的作用，促进胰岛细胞的增值分化，并能增强胰岛细胞的功能，增加胰岛素的分泌。包被液中加入的辅料聚乙二醇4000-8000对人体无毒、无刺激性、具有优良的水溶性、相溶性、粘接性和热稳定性，它常作为细胞、蛋白质和多肽的保护剂，可避免蛋白质、细胞和酶等活本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物活性胰岛调糖宝制剂，其特征在于，它是以动物胰脏提取的胰岛活性细胞和胰脏蛋白多肽为主要原料，加入药用辅料组成口服制剂，具体组成为每1000 mL制剂中含：胰岛细胞包被液30‑50%；胰蛋白多肽液20‑‑40%；甘胆酸钠 3‑5%；血浆白蛋白 1‑5%；羧甲基壳聚糖1‑3%；木糖醇 5‑10%，余量为醋酸盐缓冲液；充分混合后调pH值为7.0‑7.5。

【技术特征摘要】
1.一种生物活性胰岛调糖宝制剂，其特征在于，它是以动物胰脏提取的胰岛活性细胞和胰脏蛋白多肽为主要原料，加入药用辅料组成口服制剂，具体组成为每1000mL制剂中含：胰岛细胞包被液30-50%；胰蛋白多肽液20--40%；甘胆酸钠3-5%；血浆白蛋白1-5%；羧甲基壳聚糖1-3%；木糖醇5-10%，余量为醋酸盐缓冲液；充分混合后调pH值为7.0-7.5。2.根据权利要求1所述的生物活性胰岛调糖宝制剂，其特征在于：所述动物胰脏为猪、牛、羊的胰脏。3.一种如权利要求1所述生物活性胰岛调糖宝制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）动物胰脏的处理取新鲜或冷冻胰脏，去除包膜、血管、结缔组织，分离出胰岛组织放入4℃PBS溶液中浸泡1-2h；其余胰脏组织依次用绞肉机、胶体磨制成胰浆，加入胰浆体积2-3倍的86-88%的乙醇和占胰浆重量5%的草酸，在10-15℃条件下搅拌提取3h，离心，上层为胰蛋白多肽乙醇液，下层沉淀为胰渣，可作为提取胰酶的原料另做处理；（2）胰岛细胞包被液的制备胰岛细胞的分离及纯化采用细胞球珠研磨仪使胰岛与其它胰腺部分脱离，将研磨浆放入4℃Hank`s液中，过500μm金属不绣钢网；将收集的过滤物在4℃环境中，用1500r/min离心5min，收集细胞沉淀物，用常规葡聚糖不连续密度梯度离心法纯化，将纯化细胞与RPMI-1640混匀，取样镜检，观察胰岛细胞形态、活性、纯度、数量、成活率；从分离到纯化结束应控制在5h左右；胰岛细胞的扩增培养在RPMI-1640培养液加入生长因子纤维连接蛋白，每升培养基加入5-10mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓帆，王福芳，李树凯，李海波，常晟舸，李海涛，常学东，王浩林，刘冲，张俊英，
申请(专利权)人：张晓帆，
类型：发明
国别省市：河南,41