本发明专利技术公开了miR‑214拮抗剂在制备治疗高血压产品中的应用。该应用以依据miR‑214拮抗剂及其类似物可通过与体内的成熟miR‑214强竞争性结合，阻止miR‑214与其靶基因mRNA的互补配对，抑制miR‑214发挥作用，进而提高一氧化氮合酶的表达，从而实现降血压的效果。与现有技术相比，miR‑214拮抗剂及其类似物降压效果明显，无明显副作用。
Application of miR-214 antagonists in the preparation of products for the treatment of hypertension
The invention discloses the application of miR 214 antagonist in the preparation of products for the treatment of hypertension. This application is based on the fact that microRNA214 antagonists and their analogues can enhance the expression of nitric oxide synthase (NOS) by binding strongly to mature microRNA214 in vivo, blocking the complementary pairing of microRNA214 with its target gene mRNA, and inhibiting the effect of microRNA214 on blood pressure. Compared with the existing technology, miR 214 antagonist and its analogues have obvious hypotensive effect without obvious side effects.
【技术实现步骤摘要】
miR-214拮抗剂在制备治疗高血压产品中的应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种miR-214拮抗剂在制备治疗高血压产品中的应用。
技术介绍
高血压是最常见的慢性病，也是心脑血管病最主要的危险因素。以往的调查资料表明，中国高血压的患病率和绝对数正在快速增长，且只有28.8%的人血压可得到有效控制。因此，如何有效治疗并防治高血压是目前的热点问题之一。高血压患者除了进行非药物干预外，各类降压药的产生无疑可有效控制患者血压。常见降压药有六大类，包括利尿剂，β-受体阻滞剂，钙拮抗剂，血管紧张素转换酶抑制剂，血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂及α-受体阻滞剂。但降压药物在治疗过程中产生的副作用却限制了其广泛应用，如钙拮抗剂（二氢吡啶类地平等）疗效迅速，强力，且疗效个体差异小，但会引起患者心动过速，足踝水肿，头痛，眩晕等，个别患者会有恶心，胃部不适，过敏反应等。因此，如何避免毒副作用及需找新的高血压药物，是目前亟待解决的关键问题。研究发现，高血压的发生与血管内皮细胞功能紊乱存在着密切的关系。血管内皮细胞是介于血流和血管壁组织之间的一层单核细胞，可通过自分泌、内分泌、旁分泌三种途径分泌一系列NO、PGI2、ET-1等血管活性物质发挥调节血管紧张性、抗血栓形成、抑制平滑肌细胞增殖及血管壁炎症反应等功能。NO是内皮细胞产生最重要的舒血管因子，由内皮细胞的NO合酶(eNOs)作用于L-精氨酸产生，NO可扩散至血管壁平滑肌细胞激活鸟氨酸环化酶，介导cGMP调控的血管舒张。不仅如此，NO还具有抑制血小板聚集、抑制单核细胞粘附于内皮细胞、抑制平滑肌细胞增殖等作用。然而血管内皮在受到一系列有害因素作用时，内皮细胞释放的舒血管因子减少，缩血管因子增多，打破血管平衡稳态。原发性高血压患者几乎都有血管内皮损伤，虽然内皮损伤与高血压孰因孰果尚未明确，但目前的研究结果倾向于认为高血压患者内皮受损继发于高血压。血压急剧升高损害内皮细胞，使内皮细胞释放NO减少，NO生物利用度降低。微小RNA（microRNA，miRNA）为体内分泌，因其在多组织、多器官中广泛表达，参与血液循环，且可同时对多个靶点进行有效调控，目前已成为各领域的研究热点。miRNAs在肾脏和心血管系统中的调控作用已得到广泛关注。业已证实miRNAs参与调控心肌肥厚、动脉粥样硬化、心力衰竭以及先天性心脏病等。目前的研究发现人体有2000多种成熟的miRNAs，调控约60%的mRNAs表达和翻译。近年来研究发现，miR-214多与恶性肿瘤相关，且miR-199a/miR-214聚合体通过靶向E-Cadherin及Claudin-2促进高糖诱导的腹膜纤维化，此外，miR-214的调节异常还会导致缺氧性肺动脉高压，但其在系统性高血压中机制仍不明确。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种miR-214拮抗剂在制备治疗高血压产品中的应用。miR-214拮抗剂在制备治疗高血压产品中的应用。作为改进的是，所述高血压由血管紧张素Ⅱ诱导引起。作为改进的是，所述产品为药物。作为改进的是，所述miR-214拮抗剂的序列为5’ACUGCCUGUCUGUGCCUGCUGU3’。一种治疗高血压的药物，活性成分为miR-214拮抗剂及其类似物。上述miR-214拮抗剂的类似物可通过与体内的成熟miR-214强竞争性结合，阻止miR-214与其靶基因mRNA的互补配对，抑制miR-214发挥作用。有益效果：我们的研究结果表明，给予C57BL/6小鼠腹腔注射miR-214拮抗剂可显著降低小鼠收缩压（7-8mmHg），这对于正常生理状态下的小鼠机体机能影响不大。而给予血管紧张素II处理后的C57BL/6小鼠注射miR-214拮抗剂，可显著降低小鼠收缩压（20-30mmHg），降压幅度明显高于生理状态。此外，给予血管内皮细胞条件性miR-214敲除小鼠血管紧张素II（AngII）处理，发现miR-214敲除小鼠（miR-214fl/fl；Tek-Cre）的血压显著低与对照鼠（miR-214fl/fl）。这与给予C57BL/6小鼠腹腔注射miR-214拮抗剂的效果一致。同时，无论给予miR-214拮抗剂还是血管内皮细胞条件性miR-214敲除小鼠的主动脉中eNOS的水平均显著升高。此外，高血压病人血清中miR-214的水平也显著高于正常对照组（如图11所示）。因此，miR-214可能通过靶向一氧化氮合酶（eNOS）降低小鼠血压，是一种治疗高血压的有效手段，从而为后期研发相关制备高血压药物提供可能。与现有技术相比，miR-214拮抗剂及其类似物可以降血压，说明miR-214拮抗剂具有降血压的作用；血管内皮条件性敲除miR-214可显著降低血管紧张素Ⅱ诱导的高血压，且血压的降低可能通过调控eNOS的表达升高介导。附图说明图1为腹腔注射mir-214拮抗剂后C57BL/6小鼠血压变化情况；图2为对已进行血管紧张素II处理的C57BL/6小鼠腹腔注射mir-214拮抗剂后，C57BL/6小鼠血压变化情况；图3为血管内皮条件性miR-214敲除小鼠收缩压的变化情况；图4为给予miR-214拮抗剂处理后C57BL/6小鼠主动脉miR-214的相对表达量的变化情况；图5为给予miR-214拮抗剂处理后C57BL/6小鼠主动脉总eNOS的mRNA表达量的变化情况；图6为给予miR-214拮抗剂处理后C57BL/6小鼠主动脉磷酸化及总eNOS的蛋白表达量的变化情况，其中，1-对照组，2-miR-214拮抗剂；图7为对已进行血管紧张素II处理的C57BL/6小鼠腹腔注射mir-214拮抗剂后，小鼠主动脉磷酸化及总eNOS的蛋白表达量的变化情况，其中，3-给予血管紧张素II，4-给予血管紧张素II和miR-214拮抗剂；图8为血管内皮细胞条件性敲除miR-214后小鼠主动脉miR-214的表达量的变化情况；图9为血管内皮细胞条件性敲除miR-214后小鼠主动脉总eNOS的mRNA表达量的变化情况；图10为血管内皮细胞条件性敲除miR-214后小鼠主动脉磷酸化及总eNOS的蛋白表达量的变化情况，其中，5-对照组，6-miR-214敲除小鼠；图11为高血压病人血清中miR-214的表达水平显著高于正常对照组。具体实施方式下面结合具体实例对本专利技术的发酵方法进行详细描述和说明。其内容是对本专利技术的解释而非限定本专利技术的保护范围。主要仪器及试剂：小动物无创血压分析系统（BP-2000-M6-R4，VisitechSystems，美国）；ABIPrism7500型荧光定量PCR仪（AppliedBiosystems，美国）；血管紧张素II（sigma，美国），miR-214拮抗剂（吉玛，上海）；Trizol（Invitrogen）；SYBRPrimeScriptRT-PCRkit（TaKaRa）。总的eNOS抗体购自Abcam(Cat.#ab73980)；p-eNOS（Ser1179Cat.#9574）购自CST(Danvers,MA)。实验动物：取8周龄C57BL/6小鼠（南京模式动物研究所提供）各8只，分为两组。miR-214fl/fl小鼠由南京模式动物研究所引进，Tek-Cre转基因小鼠则由美国Jackson公司引进。血管本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.miR‑214拮抗剂在制备治疗高血压产品中的应用。
【技术特征摘要】
2018.05.15 CN 20181045984171.miR-214拮抗剂在制备治疗高血压产品中的应用。2.根据权利要求1所述的miR-214拮抗剂在制备治疗高血压产品中的应用，其特征在于，所述高血压由血管紧张素Ⅱ诱导引起。3.根据权利要求1所述的miR-21...
【专利技术属性】
技术研发人员：李树珍，张爱华，贾占军，公伟，于婧，夏薇薇，于晓文，杨运文，
申请(专利权)人：南京市儿童医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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