一种鉴别砗磲卵子成熟度的方法技术

本发明专利技术公开了一种鉴别砗磲卵子成熟度方法。A、砗磲亲本选择：选择健康无损砗磲个体作为卵子成熟度的鉴别对象，将选好的砗磲清理干净暂养于海水中；B、性腺组织采集：利用注射器从砗磲出水孔伸入，插入其性腺表层组织，吸取性腺组织；C、成熟度鉴别：将收集的性腺组织进行显微观察，在显微镜下能观察到卵子熟度情况包括以下三种类型：卵未成熟期，卵呈泪滴或梨型，卵径未达到自然排放卵子规格；卵成熟期，圆形或椭圆形，卵径与排放卵子大小一致，卵黄物质积累丰富，双层卵膜，且相对光滑；卵过熟期，卵为圆形，双层卵膜发生褶皱，卵子容易破裂导致卵黄物质溢出。

A method to identify the maturity of eggs of oocytes

The invention discloses a method for identifying egg maturity. A, inkstone parental selection: select healthy and non-destructive inkstone individuals as the object of egg maturity identification, the selected inkstone will be cleaned up and temporarily raised in seawater; B, gonadal tissue collection: the use of syringes from the inkstone out of the foramen, inserted into its gonadal surface tissue, to absorb gonadal tissue; C, maturity identification: the collection of the gonadal tissue Microscopic observation of gonadal tissue showed that the maturity of eggs could be observed under microscope, including the following three types: immature eggs, the eggs were teardrop or pear-shaped, the diameter of eggs did not reach the specifications of natural ovulation; mature eggs, round or oval, the diameter of eggs and the size of eggs were the same, the accumulation of yolk substances was rich, double-layer eggs. Membrane, and relatively smooth; egg overmaturity, the egg is round, double membrane folds, egg rupture easily lead to yolk material overflow.

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别砗磲卵子成熟度的方法
：本专利技术属于海洋生物技术中贝类遗传育种领域，具体的说是一种鉴别砗磲卵子成熟度的方法。
技术介绍
：砗磲属于软体动物门瓣鳃纲帘蛤目砗磲科，主要分布在印度洋、西太平洋海域和南中国海的低潮区附近的珊瑚礁间或较浅礁内区域。在我国,主要砗磲物种包括库氏砗磲、无鳞砗磲、鳞砗磲、长砗磲、诺瓦砗磲、番红砗磲以及砗蚝属的砗蚝。随着潜水设备和机动船的普及，砗磲资源受到比较严重的破坏，如库氏砗磲在我国南海几乎灭绝，无鳞砗磲也变得极其罕见，其它的砗磲物种仍面临着濒危，而砗磲的人工繁育是解决资源短缺的最有效办法。在砗磲人工繁殖中，配子质量直接关系到子代能否存活、种群繁衍生息。砗磲是一种雌雄同体雄性先熟的双壳贝类，繁殖期内雌雄配子共存于生殖性腺中。其中，精子只要处于运动状态大多处于成熟阶段，具有受精能力；而卵子的成熟度是决定合子质量的关键因素，但由于砗磲在外观上并无显著表型差异，故很难直接判断卵子成熟度。以往判别砗磲卵子是否成熟往往采用解剖的方式，杀死了大量的砗磲亲本，造成了严重的亲贝损耗。由此可见，开发一种无损伤鉴别砗磲卵子成熟度的方法对砗磲人工繁育具有重要的理论价值和应用前景。
技术实现思路
：为了解决当前砗磲卵子成熟度鉴别难的问题，本专利技术提供了一种鉴别砗磲卵子成熟度的方法，为砗磲人工繁育提供了优质的配子来源，为苗种生产提供可靠的技术保证。本专利技术的鉴别砗磲卵子成熟度的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、砗磲亲本选择：选择健康无损砗磲个体作为卵子成熟度的鉴别对象，将选好的砗磲清理干净暂养于海水中；B、性腺组织采集：利用注射器从砗磲出水孔伸入，插入其性腺表层组织，吸取性腺组织；C、成熟度鉴别：将收集的性腺组织进行显微观察，在显微镜下可以观察到卵子熟度情况包括以下三种类型；卵未成熟期，一般呈泪滴或梨型，卵径未达到自然排放卵子规格；卵成熟期，通常是圆形或椭圆形，卵径与排放卵子大小一致，卵黄物质积累丰富，双层卵膜，且相对光滑；卵过熟期，卵为圆形，双层卵膜发生褶皱，卵子容易破裂导致卵黄物质溢出。所述的砗磲亲本选择，是根据砗磲种类差异，挑选有雌性发生的个体。无鳞砗磲，壳长≥40cm，平均体重≥10kg；鳞砗磲，壳长≥30cm，平均体重≥2.5kg；长砗磲，壳长≥20cm，平均体重≥2kg；番红砗磲，壳长≥12cm，平均体重≥0.2kg；砗蚝，壳长在≥20cm，平均体重≥1.5kg。所述的注射器优选为5mL塑料注射器。进一步优选是将使用5mL塑料注射器的针头替换为规格为0.6×100mm的针头，该规格的针头可以轻松从砗磲出水口伸入，插入性腺组织而不会损伤其他组织或器官；所述的成熟度鉴别，根据显微镜下卵径将其分为未成熟、成熟和过熟3个时期。其中，自然排放卵子的卵径根据物种不同有差异，无鳞砗磲、鳞砗磲、长砗磲、诺瓦砗磲的卵径均为100μm，番红砗磲卵径为96μm，砗蠔卵径为120μm。利用本专利技术的方法能够快速无损鉴别砗磲卵子成熟度，对砗磲人工繁育具有重要的理论价值和应用前景。附图说明：图1：A,未成熟期，卵子直径小于同物种自然排放卵子规格，呈现梨形或者椭圆形；B，成熟期，卵子直径与同物种砗磲自然排放规格一致，呈现为圆形或者椭圆形，卵内营养物质丰富，双层卵膜光滑；C，过熟期，卵子直径与成熟期一致，但是双层卵膜中出现褶皱。具体实施方式：以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。实施例1:A、砗磲亲贝挑选：于2015年5月，从海南采集10个鳞砗磲运输至中国科学院南海海洋研究所海南热带海洋生物实验站，清理干净后微充气暂养在盐度为32ppt，温度为26-28℃的沙滤海水中。选择健康无损壳长为30-40cm，平均重量为5kg的个体作为性腺成熟度鉴别对象；B、性腺组织采集：将选择好的砗磲亲本放入盛满海水的玻璃钢桶中，做好标记。利用5mL塑料注射器伸入鳞砗磲出水孔，插入性腺表层吸取1.5mL性腺组织至离心管中，避免穿刺肾脏或其他重要器官。取完一个个体之后，注射器和针头用海水冲洗后，使用酒精灭菌后再用于另一个个体。C、显微镜观察：将采集到的性腺组织在显微镜下观察，发现2个未成熟，卵径小于100μm；6个成熟，卵径100μm，卵黄物质丰富，颜色较深，双层卵膜圆滑；2个过成熟，卵径100μm，双层卵膜发生褶皱(图1)。D、鉴别后，采用五羟色胺催产剂注入成熟砗磲的性腺部位，进行催产，排放出卵子形态为圆形，直径在100μm，卵黄物质丰富，受精率、孵化率均在95％以上。进一步证实，本专利技术鉴别标准是有效的。而用五羟色胺催产剂注入未成熟和过成熟的砗磲的性腺部位进行催产，发现未成熟砗磲排放的卵子卵径小于100μm，卵子未成熟，而过成熟的砗磲排放的卵子卵径100μm，双层卵膜发生褶皱，卵子过成熟。实施例2:A、砗磲亲贝挑选：于2015年6月，从海南采集10个长砗磲运输至中国科学院南海海洋研究所海南热带海洋生物实验站，清洗干净后微充气暂养在盐度为32ppt，温度为26-28℃的沙滤海水中。选择健康无损壳长为30-40cm，平均重量为4kg的个体作为性腺成熟度鉴别对象；B、性腺组织采集：将选择好的砗磲亲本放入盛满新鲜海水的玻璃钢桶中，做好标记。利用5mL塑料注射器伸入长砗磲出水孔，插入性腺表层吸取1.5mL性腺组织至离心管中，避免穿刺肾脏或其他重要器官。取完一个个体之后，注射器和针头用海水冲洗后，使用酒精灭菌后再用于另一个个体。C、显微镜观察：将收集到的组织在显微镜下观察，发现1个未成熟，卵径小于100μm；6个成熟，卵径100μm，卵黄物质丰富，颜色较深，双层卵膜圆滑；3个过成熟，卵径100μm，双层卵膜发生褶皱，卵子容易破裂导致卵黄物质溢出(图1)。D、鉴别后，采用五羟色胺催产剂注入成熟长砗磲的性腺部位，进行催产，排放出卵子形态为圆形，直径在100μm，卵黄物质丰富，受精率、孵化率均在93％以上。进一步证实，本专利技术鉴别标准是有效的。而用五羟色胺催产剂注入未成熟和过成熟的砗磲的性腺部位进行催产，发现未成熟砗磲排放的卵子卵径小于100μm，卵子未成熟，而过成熟的砗磲排放的卵子卵径100μm，双层卵膜发生褶皱，卵子过成熟，卵子容易破裂导致卵黄物质溢出。实施例3:A、砗磲亲贝挑选：于2016年3月，从海南采集20个砗蚝运输至中国科学院南海海洋研究所海南热带海洋生物实验站，清洗干净后微充气暂养在盐度为32ppt，温度为26-28℃的沙滤海水中。选择健康无损壳长为30-40cm，平均重量为5kg的个体作为性腺成熟度鉴别对象；B、性腺组织采集：将选择好的砗磲亲本放入盛满新鲜海水的玻璃钢桶中，做好标记。利用5mL塑料注射器伸入砗磲出水孔，插入表层性腺组织吸取1.5ml性腺组织至离心管中，避免穿刺肾脏或其他重要器官。取完一个个体之后，注射器和针头用海水冲洗后，使用酒精灭菌后再用于另一个个体。C、显微镜观察：将采集到的性腺组织在显微镜下观察，发现16个未成熟，卵径小于120μm；4个成熟，卵径120μm，卵黄物质丰富，颜色较深，双层卵膜圆滑，0个过成熟(图1)。D、鉴别后，采用五羟色胺催产剂注入成熟长砗磲的性腺部位，进行催产，排放出卵子形态为圆形，直径在120μm，卵黄物质丰富，受精率、孵化率均在90％以上。进一步证实，本专利技术鉴别标准是有效的。而本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴别砗磲卵子成熟度的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、砗磲亲本选择：选择健康无损砗磲个体作为卵子成熟度的鉴别对象，将选好的砗磲清理干净暂养于海水中；B、性腺组织采集：利用注射器从砗磲出水孔伸入，插入其性腺表层组织，吸取性腺组织；C、成熟度鉴别：将收集的性腺组织进行显微观察，在显微镜下能观察到卵子熟度情况包括以下三种类型：卵未成熟期，卵呈泪滴或梨型，卵径未达到自然排放卵子规格；卵成熟期，圆形或椭圆形，卵径与排放卵子大小一致，卵黄物质积累丰富，双层卵膜，且相对光滑；卵过熟期，卵为圆形，双层卵膜发生褶皱，卵子容易破裂导致卵黄物质溢出。

【技术特征摘要】
1.一种鉴别砗磲卵子成熟度的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、砗磲亲本选择：选择健康无损砗磲个体作为卵子成熟度的鉴别对象，将选好的砗磲清理干净暂养于海水中；B、性腺组织采集：利用注射器从砗磲出水孔伸入，插入其性腺表层组织，吸取性腺组织；C、成熟度鉴别：将收集的性腺组织进行显微观察，在显微镜下能观察到卵子熟度情况包括以下三种类型：卵未成熟期，卵呈泪滴或梨型，卵径未达到自然排放卵子规格；卵成熟期，圆形或椭圆形，卵径与排放卵子大小一致，卵黄物质积累丰富，双层卵膜，且相对光滑；卵过熟期，卵为圆形，双层卵膜发生褶皱，卵子容易破裂导致卵黄物质溢出。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的选择健康无损砗磲个体，是根据砗磲种类差异，挑选有雌性发生的个...

【专利技术属性】
技术研发人员：李军，张跃环，张扬，肖述，向志明，马海涛，喻子牛，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44