葡聚糖酶，编码它们的核酸以及制备和使用它们的方法技术

本发明专利技术涉及具有葡聚糖酶，例如内切葡聚糖酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶活性或这些活性的组合的多肽，和编码它们的多核苷酸。在一个方面，葡聚糖酶活性是内切葡聚糖酶活性(例如内‑1,4‑β‑D‑葡聚糖4‑葡聚糖水解酶活性)，和包括水解纤维素、纤维素衍生物(例如羧甲基纤维素和羟乙基纤维素)、地衣多糖中的1,4‑β‑D‑糖苷键，以及水解混合的β‑1,3‑葡聚糖，诸如谷物β‑D‑葡聚糖或木葡聚糖和含有纤维素部分的其他植物中的β‑1,4键。此外，本发明专利技术也提供了设计新酶的方法，和使用它们的方法。在可选择的方面，新型葡聚糖酶，例如内切葡聚糖酶、甘露聚糖酶或木聚糖酶在增高的pH和温度中具有增加的活性和稳定性。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

Glucan enzymes, nucleic acids encoding them, and methods of making and using them

The present invention relates to polypeptides with or encoding glucanases, such as endoglucanase, mannanase, xylanase, or combinations of these activities. In one aspect, glucanase activity is endoglucanase activity (e.g., endo 1,4_beta D_glucan 4_glucanase hydrolase activity), and includes hydrolysis of cellulose, cellulose derivatives (e.g. carboxymethyl cellulose and hydroxyethyl cellulose), 1,4_beta D_glycoside bond in lichen polysaccharides, and hydrolysis of mixed beta_1_glycosides. 3. Glucan, such as cereal beta D glucan or xylan, and beta 1,4 bonds in other plants containing cellulose. In addition, the invention also provides methods for designing new enzymes and methods for using them. Alternatively, novel glucanases, such as endoglucanase, mannanase or xylanase, exhibit increased activity and stability at elevated pH and temperature.

【技术实现步骤摘要】
葡聚糖酶，编码它们的核酸以及制备和使用它们的方法本申请是分案申请，基于申请号为201310370349.X的分案申请。原申请的申请日为2004年7月2日，中国申请号为200480025009.2，国际申请号为PCT/US2004/021492，专利技术名称为“葡聚糖酶，编码它们的核酸以及制备和使用它们的方法”。
总体上说，本专利技术涉及酶，编码该酶的多核苷酸，该多核苷酸和多肽的用途；更具体地，本专利技术涉及具有葡聚糖酶，例如内切葡聚糖酶活性的多肽(例如酶、抗体)，内切葡聚糖酶活性例如催化内部的内-β-1,4-和/或β-1,3-葡聚糖酶键(glucanaselinkages)的水解。在一个方面，内切葡聚糖酶活性(例如内-1,4-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶活性)包括水解在纤维素、纤维素衍生物(例如羧甲基纤维素和羟乙基纤维素)、地衣多糖中的1,4-和/或β-1,3-β-D-糖苷键，水解混合的β-1,3-葡聚糖，诸如谷物β-D-葡聚糖或木葡聚糖和含有纤维素部分的其他植物或有机物质中的β-1,4键。在一个方面，本专利技术多肽具有木聚糖酶或甘露聚糖酶活性。
技术介绍
内切葡聚糖酶(例如内-β-1,4-葡聚糖酶，EC3.2.1.4；内-β-1,3(1)-葡聚糖酶，EC3.2.1.6；内-β-1,3-葡聚糖酶,EC3.2.1.39)水解纤维素和葡聚糖的内部β-1,4-和/或β-1,3-糖苷键，产生分子量较小的葡萄糖和葡萄糖寡聚体。葡聚糖是多糖，由1,4-β-和/或1,3-糖苷-连接的D-吡喃型葡萄糖形成。内切葡聚糖酶具有相当大的商业价值，被用于食品工业、用于焙烤和果蔬加工、农业废物降解、用于生产动物饲料(例如鸡饲料)、用于浆和纸的生产、纺织品制造和家用和工业洗涤剂。内切葡聚糖酶由真菌和细菌产生。β-葡聚糖是谷物中主要的非-淀粉多糖。取决于种类和生长条件，葡聚糖含量可以变化很大。这种多糖的物化特性导致能在氧化条件下产生粘性溶液或者甚至产生凝胶。此外，葡聚糖的水结合能力(water-bindingcapacity)高。所有这些特性为若干工业包括酿造、焙烤、动物营养带来了问题。在酿造应用中，葡聚糖的存在产生麦芽汁过滤难和浑浊形成问题(hazeformationissues)。在焙烤应用(特别是糕点和饼干)中，葡聚糖会产生发粘面团，这使得难以加工(machine)，并减小饼干的大小。此外，该碳水化合物与焙烤的产品的快速再水化密切相关，导致脆性丧失，货架期减短。对于用谷物食物制成的单胃动物(monogastricanimal)饲料的应用，β-葡聚糖是肠内物质粘性的成因，因此不利地影响饲料的可消化性和动物的生长速度。对于反刍动物，这些β-葡聚糖是摄入的纤维的基本组分，葡聚糖较完全的消化将有助于获得较高的食物转化效率。内切葡聚糖酶在动物胃中具有活性对动物饲料是有利的。内切葡聚糖酶对于消化所有植物物质中发现的纤维素、β-1,4-连接的葡聚糖也是重要的。纤维素是自然界中最丰富的多糖。消化纤维素的酶在浆和纸工业、在纺织品制造和家用和工业用洗涤剂中具有利用价值。在此讨论的出版物被提供，仅仅是显示了它们先于本专利技术申请日而公开。并不能凭借在此的任何内容认为，本专利技术没有资格先于在前专利技术的那些公开内容。
技术实现思路
本专利技术提供了分离的、合成的、或重组的核酸，该核酸包括与本专利技术的示范性核酸具有至少约50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或更大的序列同一性或完全的(100％)序列同一性的序列，所述本专利技术的示范性核酸例如SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:41、SEQIDNO:43、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:51、SEQIDNO:53、SEQIDNO:55、SEQIDNO:57、SEQIDNO:59、SEQIDNO:61、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67、SEQIDNO:69、SEQIDNO:71、SEQIDNO:73、SEQIDNO:75、SEQIDNO:77、SEQIDNO:79、SEQIDNO:81、SEQIDNO:83、SEQIDNO:85、SEQIDNO:87、SEQIDNO:89、SEQIDNO:91、SEQIDNO:93、SEQIDNO:95、SEQIDNO:97、SEQIDNO:99、SEQIDNO:101、SEQIDNO:103、SEQIDNO:105、SEQIDNO:107、SEQIDNO:109、SEQIDNO:111、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:119、SEQIDNO:121、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:127、SEQIDNO:129、SEQIDNO:131、SEQIDNO:133、SEQIDNO:135、SEQIDNO:137、SEQIDNO:139、SEQIDNO:141、SEQIDNO:143、SEQIDNO:145、SEQIDNO:147、SEQIDNO:149、SEQIDNO:151、SEQIDNO:153、SEQIDNO:155、SEQIDNO:157、SEQIDNO:199、SEQIDNO:161、SEQIDNO:163、SEQIDNO:165、SEQIDNO:167、SEQIDNO:169、SEQIDNO:171、SEQIDNO:173、SEQIDNO:175、SEQIDNO:177、SEQIDNO:179、SEQIDNO:181、SEQIDNO:183、SEQIDNO:185、SEQIDNO:187、SEQIDNO:189、SEQIDNO:191、SEQIDNO:193、SEQIDNO:195、SEQIDNO:197、SEQIDNO:199、SEQIDNO:201、SEQIDNO:203、SEQIDNO:205、SEQIDNO:207、SEQIDNO:209、SEQIDNO:211、SEQIDNO:213、SEQIDNO:215、SEQIDNO:217、SEQIDNO:219、SEQIDNO:221、SEQIDNO:223、SEQIDNO:225、SEQIDNO:227、SEQIDNO:229、SEQIDNO:231、SEQIDNO:233、SEQIDNO:235、SEQI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离或重组的核酸，所述核酸包括与SEQ ID NO:351、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:177、SEQ ID NO:179、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:233、SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:239、SEQ ID NO:241、SEQ ID NO:243、SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:265、SEQ ID NO:267、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:271、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:283、SEQ ID NO:285、SEQ ID NO:287、SEQ ID ...

【技术特征摘要】
2003.07.02 US 60/484,7251.分离或重组的核酸，所述核酸包括与SEQIDNO:351、SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:41、SEQIDNO:43、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:51、SEQIDNO:53、SEQIDNO:55、SEQIDNO:57、SEQIDNO:59、SEQIDNO:61、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67、SEQIDNO:69、SEQIDNO:71、SEQIDNO:73、SEQIDNO:75、SEQIDNO:77、SEQIDNO:79、SEQIDNO:81、SEQIDNO:83、SEQIDNO:85、SEQIDNO:87、SEQIDNO:89、SEQIDNO:91、SEQIDNO:93、SEQIDNO:95、SEQIDNO:97、SEQIDNO:99、SEQIDNO:101、SEQIDNO:103、SEQIDNO:105、SEQIDNO:107、SEQIDNO:109、SEQIDNO:111、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:119、SEQIDNO:121、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:127、SEQIDNO:129、SEQIDNO:131、SEQIDNO:133、SEQIDNO:135、SEQIDNO:137、SEQIDNO:139、SEQIDNO:141、SEQIDNO:143、SEQIDNO:145、SEQIDNO:147、SEQIDNO:149、SEQIDNO:151、SEQIDNO:153、SEQIDNO:155、SEQIDNO:157、SEQIDNO:199、SEQIDNO:161、SEQIDNO:163、SEQIDNO:165、SEQIDNO:167、SEQIDNO:169、SEQIDNO:171、SEQIDNO:173、SEQIDNO:175、SEQIDNO:177、SEQIDNO:179、SEQIDNO:181、SEQIDNO:183、SEQIDNO:185、SEQIDNO:187、SEQIDNO:189、SEQIDNO:191、SEQIDNO:193、SEQIDNO:195、SEQIDNO:197、SEQIDNO:199、SEQIDNO:201、SEQIDNO:203、SEQIDNO:205、SEQIDNO:207、SEQIDNO:209、SEQIDNO:211、SEQIDNO:213、SEQIDNO:215、SEQIDNO:217、SEQIDNO:219、SEQIDNO:221、SEQIDNO:223、SEQIDNO:225、SEQIDNO:227、SEQIDNO:229、SEQIDNO:231、SEQIDNO:233、SEQIDNO:235、SEQIDNO:237、SEQIDNO:239、SEQIDNO:241、SEQIDNO:243、SEQIDNO:245、SEQIDNO:247、SEQIDNO:249、SEQIDNO:251、SEQIDNO:253、SEQIDNO:255、SEQIDNO:257、SEQIDNO:259、SEQIDNO:261、SEQIDNO:263、SEQIDNO:265、SEQIDNO:267、SEQIDNO:269、SEQIDNO:271、SEQIDNO:273、SEQIDNO:275、SEQIDNO:277、SEQIDNO:279、SEQIDNO:281、SEQIDNO:283、SEQIDNO:285、SEQIDNO:287、SEQIDNO:289、SEQIDNO:291、SEQIDNO:293、SEQIDNO:295、SEQIDNO:297、SEQIDNO:299、SEQIDNO:301、SEQIDNO:303、SEQIDNO:305、SEQIDNO:307、SEQIDNO:309、SEQIDNO:311、SEQIDNO:313、SEQIDNO:315、SEQIDNO:317、SEQIDNO:319、SEQIDNO:321、SEQIDNO:323、SEQIDNO:325、SEQIDNO:327、SEQIDNO:329、SEQIDNO:331、SEQIDNO:333、SEQIDNO:335、SEQIDNO:337、SEQIDNO:339、SEQIDNO:341、SEQIDNO:343、SEQIDNO:345、SEQIDNO:347、SEQIDNO:349、SEQIDNO:353、SEQIDNO:355、SEQIDNO:357、SEQIDNO:359、SEQIDNO:361、SEQIDNO:363、SEQIDNO:365、SEQIDNO:367、SEQIDNO:369、SEQIDNO:371、SEQIDNO:373、SEQIDNO:375、SEQIDNO:377、SEQIDNO:379、SEQIDNO:381、SEQIDNO:383、SEQIDNO:385、SEQIDNO:387、SEQIDNO:389、SEQIDNO:391、SEQIDNO:393、SEQIDNO:395、SEQIDNO:397、SEQIDNO:399、SEQIDNO:401、SEQIDNO:403、SEQIDNO:405、SEQIDNO:407、SEQIDNO:409、SEQIDNO:411、SEQIDNO:413、SEQIDNO:415、SEQIDNO:417、SEQIDNO:419、SEQIDNO:421、SEQIDNO:423、SEQIDNO:425、SEQIDNO:427、SEQIDNO:429、SEQIDNO:431、SEQIDNO:433、SEQIDNO:435、SEQIDNO:437、SEQIDNO:439、SEQIDNO:441、SEQIDNO:443、SEQIDNO:445、SEQIDNO:447、SEQIDNO:449、SEQIDNO:451、SEQIDNO:453、SEQIDNO:455、SEQIDNO:457、SEQIDNO:459、SEQIDNO:461、SEQIDNO:463、SEQIDNO:465、SEQIDNO:467、SEQIDNO:469、SEQIDNO:471、SEQIDNO:473、SEQIDNO:475、SEQIDNO:477、SEQIDNO:479、SEQIDNO:481、SEQIDNO:483、SEQIDNO:485、SEQIDNO:487、SEQIDNO:489、SEQIDNO:491、SEQIDNO:493、SEQIDNO:495、SEQIDNO:497、SEQIDNO:499、SEQIDNO:501、SEQIDNO:503、SEQIDNO:505、SEQIDNO:507、SEQIDNO:509、SEQIDNO:511、SEQIDNO:513、SEQIDNO:515或SEQIDNO:517具有至少50％的序列同一性的核酸序列，所述序列同一性在至少约20、30、40、50、60、75或100个残基的区域内，其中所述核酸编码至少一种具有葡聚糖酶活性的多肽，所述序列同一性通过采用序列比对算法的分析或通过目视检查法来测定。2.如权利要求1所述的分离或重组的核酸，其中所述序列同一性至少约51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％或64％。3.如权利要求2所述的分离或重组的核酸，其中所述序列同一性至少约65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大的序列同一性。4.如权利要求1所述的分离或重组的核酸，其中所述的序列同一性是在至少大约50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150或更多个残基，或者基因或转录物的全长区域上。5.如权利要求3所述的分离或重组的核酸，其中所述核酸序列包括SEQIDNO:351、SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:41、SEQIDNO:43、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:51、SEQIDNO:53、SEQIDNO:55、SEQIDNO:57、SEQIDNO:59、SEQIDNO:61、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67、SEQIDNO:69、SEQIDNO:71、SEQIDNO:73、SEQIDNO:75、SEQIDNO:77、SEQIDNO:79、SEQIDNO:81、SEQIDNO:83、SEQIDNO:85、SEQIDNO:87、SEQIDNO:89、SEQIDNO:91、SEQIDNO:93、SEQIDNO:95、SEQIDNO:97、SEQIDNO:99、SEQIDNO:101、SEQIDNO:103、SEQIDNO:105、SEQIDNO:107、SEQIDNO:109、SEQIDNO:111、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:119、SEQIDNO:121、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:127、SEQIDNO:129、SEQIDNO:131、SEQIDNO:133、SEQIDNO:135、SEQIDNO:137、SEQIDNO:139、SEQIDNO:141、SEQIDNO:143、SEQIDNO:145、SEQIDNO:147、SEQIDNO:149、SEQIDNO:151、SEQIDNO:153、SEQIDNO:155、SEQIDNO:157、SEQIDNO:199、SEQIDNO:161、SEQIDNO:163、SEQIDNO:165、SEQIDNO:167、SEQIDNO:169、SEQIDNO:171、SEQIDNO:173、SEQIDNO:175、SEQIDNO:177、SEQIDNO:179、SEQIDNO:181、SEQIDNO:183、SEQIDNO:185、SEQIDNO:187、SEQIDNO:189、SEQIDNO:191、SEQIDNO:193、SEQIDNO:195、SEQIDNO:197、SEQIDNO:199、SEQIDNO:201、SEQIDNO:203、SEQIDNO:205、SEQIDNO:207、SEQIDNO:209、SEQIDNO:211、SEQIDNO:213、SEQIDNO:215、SEQIDNO:217、SEQIDNO:219、SEQIDNO:221、SEQIDNO:223、SEQIDNO:225、SEQIDNO:227、SEQIDNO:229、SEQIDNO:231、SEQIDNO:233、SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·斯蒂尔，W·卡伦，S·希利，D·普利安，
申请(专利权)人：维莱尼姆公司，
类型：发明
国别省市：美国,US