The invention relates to an adipose stem cell membrane, in particular to a method for constructing an adipose stem cell membrane and its application. It belongs to the field of tissue engineering and regenerative medicine. The method comprises the following steps: step 1) adipose-derived stem cells are selected as seed cells to construct cell membrane; step 2) endometrial cells are used to induce co-cultured cells; step 3) adipose-derived stem cell membrane is constructed by chemical induction and co-culture. In the present invention, human adipose-derived stem cells are induced to form membranes by co-culture of endometrial cells with exogenous factors (TGF_beta 1, EGF, PDGF_BB, 17_beta estradiol) added to the cell membrane culture medium. The expression of mRNA in the epithelial markers of the induced adipose-derived membranes is up-regulated and the expression of CK18 protein is positive by immunofluorescence. Some stem cells were transformed into epithelial cells. The membrane derived from this system is more effective in the repair of endometrial epithelium.
【技术实现步骤摘要】
一种构建脂肪干细胞膜片的方法及应用
本专利技术涉及脂肪干细胞膜片,特别是一种构建脂肪干细胞膜片的方法及应用。属于组织工程与再生医学领域。
技术介绍
正常的子宫内膜分为基底层和功能层,功能层在雌孕激素的作用下发生周期性脱落,脱落后由基底层再生,如果基底层损伤,则子宫内膜功能层无法再生,胶原大量沉积,出现不可逆性瘢痕修复,造成宫腔粘连。90%的宫腔粘连的发生与妊娠或者非妊娠时子宫遭受机械性损伤有关,其中与妊娠相关的清宫术是导致宫腔粘连的主因,世界卫生组织(WHO)统计,全球每年有4000万妇女进行人工流产,中国每年人工流产达1400万人次,排世界第一位宫腔粘连已经成为继发性不孕患者的最常见原因,占继发性不孕症发病原因的8%,它还可导致习惯性流产,试管婴儿植入失败等并发症,严重威胁我国育龄期妇女的生殖健康。目前临床上治疗宫腔粘连的主要方法为宫腔镜下粘连松解术,术后放置宫内节育器等。但各种预防措施的效果均不尽如人意,治疗后粘连再形成的发生率在所有患者中约为3.1%~23.5%,重度患者中可达20%~62.5%。如果子宫内膜损伤面积过大或完全裸露,即使手术恢复了宫腔形态,内膜也很难再生,恢复功能。为了解决这一难题,生殖专家把目标转移到了目前的研究热点组织工程技术上,自从1993年细胞膜片技术专利技术以来,从最初昂贵的温度敏感培养基,发展到现在仅在完全培养基中加入活性因子即可诱导细胞重叠生长,从而获得由细胞、细胞外基质构成,为克服上述缺点带来希望。但是如何能有效防止子宫损伤后形成的宫腔粘连,能使细胞膜片具有促进组织再生机制,从而促进子宫内膜伤口愈合的功效目前还没有定论 ...
【技术保护点】
1.一种构建脂肪干细胞膜片的方法,其特征是:该方法包括如下步骤:步骤1)选择脂肪干细胞作为种子细胞构建细胞膜片;步骤2)将子宫内膜细胞用于诱导的共培养细胞;步骤3)采用化学诱导和共培养的方式构建脂肪干细胞膜片。
【技术特征摘要】
1.一种构建脂肪干细胞膜片的方法,其特征是:该方法包括如下步骤:步骤1)选择脂肪干细胞作为种子细胞构建细胞膜片;步骤2)将子宫内膜细胞用于诱导的共培养细胞;步骤3)采用化学诱导和共培养的方式构建脂肪干细胞膜片。2.根据权利要求1所述的一种构建脂肪干细胞膜片的方法,其特征是:所述步骤1)脂肪干细胞:取脂肪组织20ml,用PBS清洗,眼科剪剪碎后加20ml的0.25%的Ι型胶原酶37℃恒温摇床消化60min;加入等量的含10%胎牛血清的ɑ-mem完全培养基终止消化,1000转5min离心,去上清,加10ml含10%胎牛血清的ɑ-mem完全培养基重悬接种在75cm2培养瓶中,48h后换液,脂肪干细胞生长融合达到瓶底面积的80%-90%时胰酶消化传代。3.根据权利要求1所述的一种构建脂肪干细胞膜片的方法,其特征是:所述步骤2)子宫内膜细胞:取子宫内膜组织用无菌PBS反复冲洗,眼科剪剪去血污组织后,剪碎,加入20ml的0.25%Ι型胶原酶,37℃恒温摇床消化120min,加入等体积的含10%胎牛血清α-MEM完全培养液终止消化,用100目的筛网过滤,将滤液再次使用200目的筛网过滤,收集滤液1000r/min离心10min,弃上清,放入α-MEM完全培养液重悬,1000r/min,再次离心1...
【专利技术属性】
技术研发人员:王晓红,肖西峰,芦洁,李博,陈书强,孙惠君,杨芳,王珺,张琬琳,王晶晶,
申请(专利权)人:中国人民解放军第四军医大学,
类型:发明
国别省市:陕西,61
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