一种蛴螬抗菌肽的提取方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种蛴螬抗菌肽的提取方法及其应用，还提供了一种鱼饲料。该蛴螬抗菌肽的提取方法大致为：洗净活虫并注射培养好的菌液，消毒后制成匀浆，通过超声与滤膜对其进行提取过滤，最后进行真空干燥得到所需蛴螬抗菌肽。本发明专利技术能在保持活性的前提下高效提取蛴螬抗菌肽。

Extraction method of antibacterial peptides from grubs and its application

The invention discloses a method for extracting the antibacterial peptide from grubs and its application, and also provides a fish feed. The method of extracting antimicrobial peptides from grubs is as follows: washing living insects and injecting cultured bacterial liquid, making homogenate after disinfection, extracting and filtering them through ultrasonic and filter membrane, and finally drying in vacuum to get the required grubs antimicrobial peptides. The invention can efficiently extract the antibacterial peptides from grubs under the premise of keeping activity.

【技术实现步骤摘要】
一种蛴螬抗菌肽的提取方法及其应用
本专利技术涉及一种抗菌肽的提取方法，具体涉及一种从蛴螬中提取抗菌肽的方法。
技术介绍
：蛴螬，又名鸡婆虫，土蚕，老母虫，白时虫等，体型肥大，成年后通称金龟甲或金龟子，其组成主要由脂肪、蛋白质组成。昆虫作为地球上种群数量种类均较为巨大的物种，昆虫拥有独特的与大型动物不一样免疫机制，其通过分泌包括抗菌肽在内的各种免疫物质进行免疫防御，因此通过诱导的形式促进昆虫转化分泌出各类抗菌肽，将其提取利用，可以得到比传统药物更好疗效的产品。抗菌肽是一类小分子肽类活性物质，是具有抗菌活性的短肽，存在于各类生物体内。抗菌肽对微生物与寄生虫均有一定的抗性，但对生物体本身影响较小或无影响，且到目前为止尚未发现抗菌肽能使微生物与寄生虫产生抗性，是一种可以用于替代抗性日益严重的抗生素的产品。关于蛴螬抗菌肽的提取应用，报道较少，且传统提取方法为直接打浆过滤得到，纯度和含量均有所不足。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于，提供一种从蛴螬中提取抗菌肽的方法，以解决上述技术问题。本专利技术能在保持活性的前提下高效提取蛴螬抗菌肽。为实现上述目的，本专利技术提供如下方案：本专利技术提供一种从蛴螬中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)捕捉新鲜的蛴螬，洗净备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3～5体积比的菌液混合，离心收集菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入步骤(1)的蛴螬腹部，继续饲养1～3d；(3)将步骤(2)诱导后的蛴螬置于75～80％酒精中浸泡10s后，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(4)取步骤(3)的匀浆，加入10～20倍体积的提取液，然后超声提取40～60min，过滤，收集滤液；(5)将步骤(4)的滤液用超滤膜除去大分子杂质，收集超滤透过液；(6)将步骤(5)的超滤透过液用纳滤膜除去小分子杂质，收集纳滤截留液；(7)将步骤(6)的纳滤截留液在40～50℃下真空干燥，得蛴螬抗菌肽。进一步的，所述步骤(4)中提取液为0.05mol/L乙酸铵缓冲液、35μg/ml苯甲基硫酰氟、1mg/ml苯基硫脲按比例3～5:1:1组成的混合液。进一步的，所述步骤(4)中超声条件：功率为150～250W，频率为40～50kHz。进一步的，所述步骤(5)中超滤膜截留分子量为10000～12000Da。进一步的，所述步骤(6)中纳滤膜截留分子量为200～250Da。进一步的，上述提取得到的蛴螬抗菌肽能应用于饲料中。进一步的，所述饲料为鱼饲料。进一步的，本专利技术还提供一种鱼饲料，包含如下重量份的成分：蛴螬抗菌肽5～10份、豆粕10～20份、菜粕10～20份、复合维生素1.2～2.5份、纤维素酶1～3份、果胶酶1～3份。与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：(1)在本专利技术中提取过程中添加了苯甲基硫酰氟，能通过抑制抗菌肽的分解，防止因此而产生的抗菌肽成品率降低与品质下降；同时也添加了苯基硫脲，能通过增加蛋白质的溶解性能，从而增加抗菌肽的提取率；(2)本专利技术的提取方法采用了膜分离技术，利用物理分离过程进行提取，避免破坏抗菌肽的活性，使获得的抗菌肽纯度更高，品质更好；(3)蛴螬抗菌肽可以应用在鱼饲料中，通过抗菌肽提高鱼的免疫，减少发病，达到间接促生长和提高成品鱼品质的作用。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明。实施例1一种从蛴螬中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)捕捉新鲜的蛴螬，洗净备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:4体积比的菌液混合，离心收集菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入步骤(1)的蛴螬腹部，继续饲养2d；(3)将步骤(2)诱导后的蛴螬置于78％酒精中浸泡10s后，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(4)取步骤(3)的匀浆，加入15倍体积的提取液，提取液为0.05mol/L乙酸铵缓冲液、35μg/ml苯甲基硫酰氟、1mg/ml苯基硫脲按比例4:1:1组成的混合液，然后在功率为200W，频率为45kHz的条件下超声提取50min，过滤，收集滤液；(5)将步骤(4)的滤液用截留分子量为10000Da的超滤膜除去大分子杂质，收集超滤透过液；(6)将步骤(5)的超滤透过液用截留分子量为250Da的纳滤膜除去小分子杂质，收集纳滤截留液；(7)将步骤(6)的纳滤截留液在45℃下真空干燥，得蛴螬抗菌肽。实施例2一种从蛴螬中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)捕捉新鲜的蛴螬，洗净备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3体积比的菌液混合，离心收集菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入步骤(1)的蛴螬腹部，继续饲养3d；(3)将步骤(2)诱导后的蛴螬置于75％酒精中浸泡10s后，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(4)取步骤(3)的匀浆，加入10倍体积的提取液，提取液为0.05mol/L乙酸铵缓冲液、35μg/ml苯甲基硫酰氟、1mg/ml苯基硫脲按比例3:1:1组成的混合液，然后在功率为250W，频率为40kHz的条件下超声提取40min，过滤，收集滤液；(5)将步骤(4)的滤液用截留分子量为12000Da的超滤膜除去大分子杂质，收集超滤透过液；(6)将步骤(5)的超滤透过液用截留分子量为250Da的纳滤膜除去小分子杂质，收集纳滤截留液；(7)将步骤(6)的纳滤截留液在40℃下真空干燥，得蛴螬抗菌肽。实施例3一种从蛴螬中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)捕捉新鲜的蛴螬，洗净备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:5体积比的菌液混合，离心收集菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入步骤(1)的蛴螬腹部，继续饲养1d；(3)将步骤(2)诱导后的蛴螬置于80％酒精中浸泡10s后，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(4)取步骤(3)的匀浆，加入20倍体积的提取液，提取液为0.05mol/L乙酸铵缓冲液、35μg/ml苯甲基硫酰氟、1mg/ml苯基硫脲按比例5:1:1组成的混合液，然后在功率为150W，频率为50kHz的条件下超声提取60min，过滤，收集滤液；(5)将步骤(4)的滤液用截留分子量为10000Da的超滤膜除去大分子杂质，收集超滤透过液；(6)将步骤(5)的超滤透过液用截留分子量为200Da的纳滤膜除去小分子杂质，收集纳滤截留液；(7)将步骤(6)的纳滤截留液在50℃下真空干燥，得蛴螬抗菌肽。实施例4一种鱼饲料，具体如表1。表1：鱼饲料重量份蛴螬抗菌肽7.5豆粕15菜粕15复合维生素1.8纤维素酶2.0果胶酶2.0实施例5一种鱼饲料，具体如表2。表2：鱼饲料重量份蛴螬抗菌肽8.0豆粕18菜粕13复合维生素2.0纤维素酶2.5果胶酶1.5对比例1一种从蛴螬中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)捕捉新鲜的蛴螬，洗净备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:4体积比的菌液混合，离心收集菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入步骤(1)的蛴螬腹部，继续饲养2d；(3)将步骤(2)诱导后的蛴螬置于78％酒精中浸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛴螬抗菌肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)捕捉新鲜的蛴螬，洗净备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3～5体积比的菌液混合，离心收集菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入步骤(1)的蛴螬腹部，继续饲养1～3d；(3)将步骤(2)诱导后的蛴螬置于75～80％酒精中浸泡10s后，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(4)取步骤(3)的匀浆，加入10～20倍体积的提取液，然后超声提取40～60min，过滤，收集滤液；(5)将步骤(4)的滤液用超滤膜除去大分子杂质，收集超滤透过液；(6)将步骤(5)的超滤透过液用纳滤膜除去小分子杂质，收集纳滤截留液；(7)将步骤(6)的纳滤截留液在40～50℃下真空干燥，得蛴螬抗菌肽。

【技术特征摘要】
1.一种蛴螬抗菌肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)捕捉新鲜的蛴螬，洗净备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3～5体积比的菌液混合，离心收集菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入步骤(1)的蛴螬腹部，继续饲养1～3d；(3)将步骤(2)诱导后的蛴螬置于75～80％酒精中浸泡10s后，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(4)取步骤(3)的匀浆，加入10～20倍体积的提取液，然后超声提取40～60min，过滤，收集滤液；(5)将步骤(4)的滤液用超滤膜除去大分子杂质，收集超滤透过液；(6)将步骤(5)的超滤透过液用纳滤膜除去小分子杂质，收集纳滤截留液；(7)将步骤(6)的纳滤截留液在40～50℃下真空干燥，得蛴螬抗菌肽。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中提取液为...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：佛山市聚成生化技术研发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44