一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法技术

本发明专利技术提供了一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法，属于兽药残留检测技术领域，包括：将进样样品进行液相色谱‑串联质谱检测，根据氨基糖苷类药物含量的标准曲线与进样样品的液相色谱图，得到进样样品中氨基糖苷类药物的含量；所述液相色谱的色谱柱为SIELC Obelisc R。本发明专利技术提供的方法在不使用离子对试剂的条件下，同样能够增强色谱保留，能够检测动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的含量，药物的检测限和定量限分别在1～10μg/kg和2～20μg/kg范围内；批内和批间精密度分别在2～14.4％和3.7～19.8％之间。

A method for determination of aminoglycosides in animal muscle tissue without using ion pair reagent

The invention provides a method for the determination of aminoglycosides in animal muscle tissues without using ion pair reagents, which belongs to the technical field of veterinary drug residue detection. The method comprises the following steps: the determination of aminoglycosides in samples by liquid chromatography-tandem mass spectrometry, the determination of aminoglycosides according to the standard curve of aminoglycosides content and the liquid chromatogram of the sample. The content of aminoglycoside drugs in the sample is obtained, and the liquid chromatographic column is SIELC Obelisc R. The method can also enhance chromatographic retention without using ion-pair reagents, and can detect the content of aminoglycosides in animal muscle tissues. The detection limit and the quantitative limit of the drugs are in the range of 1-10 ug/kg and 2-20 ug/kg respectively, and the intra-and inter-batch precision are 2-14.4% and 3.7-19%, respectively. 8% between.

【技术实现步骤摘要】
一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法
本专利技术属于兽药残留检测
，尤其涉及一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法。
技术介绍
氨基糖苷类抗生素是一类广谱抗生素，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有显著的抑杀作用，广泛应用于治疗各种动物性疾病，也常添加到饲料中，用于促进动物生长发育。然而，此类药物具有耳毒性、肾毒性等副作用，持续用药以及不合理使用会导致氨基糖苷类药物在食用动物中过量残留，通过食物链对人类造成潜在的危害。目前国内外报道关于动物源性食品中氨基糖苷类药物的检测方法，主要有液相色谱-串联谱法等，但是由于氨基糖苷类药物具有高的极性，很难在传统的反相色谱柱上保留，因此需要在流动相中添加离子对试剂，以增强色谱保留。但离子对试剂的使用不但会对色谱柱造成不可逆的损害，而且还会产生严重的离子抑制以及腐蚀离子源。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法，在不使用离子对试剂的条件下，同样能够增强色谱保留，能够检测动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的含量。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法，包括：将进样样品进行液相色谱-串联质谱检测，根据氨基糖苷类药物含量的标准曲线与进样样品的液相色谱图，得到进样样品中氨基糖苷类药物的含量；所述液相色谱的色谱柱为SIELCObeliscR；所述液相色谱的流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为甲酸溶液或乙酸溶液；所述甲酸溶液的体积百分含量为0.5～1.5％，所述乙酸溶液的体积百分含量为1.5～2.5％；所述液相色谱的梯度洗脱程序：0～0.5min，流动相A的体积含量为流动相体积的85％；0.5～3.8min，流动相A的体积含量由85％降低至65％；3.8～4.3min，流动相A的体积含量由65％降低至55％；4.3～4.5min，流动相A的体积含量为55％；4.5～6.5min，流动相A的体积含量由55％降低至0％；6.5～11min，流动相A的体积含量为0％；11～12min，流动相A的体积含量由0％增加至85％；12～21min，流动相A的体积含量为85％。优选的，所述液相色谱的条件包括：所述流动相的流速为0.4～0.8ml/min；所述液相色谱的柱温为25～40℃；所述液相色谱的进样体积为5～20μl。优选的，所述串联质谱的条件包括：所述串联质谱的离子源为电喷雾电离离子源；所述串联质谱的电喷雾电压为4000～5500V；所述串联质谱的离子源温度为450～650℃；所述串联质谱的气帘气压力为20～35psi；所述串联质谱的雾化气压力为45～65psi；所述串联质谱的辅助气压力为45～65psi；所述串联质谱的滞留时间为20～100s。优选的，所述氨基糖苷类药物包括新霉素B、安普霉素、卡那霉素B、妥布霉素、威他霉素、潮霉素B、庆大霉素、阿米卡星和大观霉素中的一种或几种。优选的，所述进样样品的制备方法包括：1)将动物肌肉组织与磷酸盐提取液混合，进行第一超声处理8～12min，得到第一超声处理物，将所述第一超声处理物离心分离后，得到第一沉淀和第一清液；2)将所述步骤1)得到的第一沉淀与磷酸盐提取液混合，进行第二超声处理8～12min，得到第二超声处理物，将所述第二超声处理物离心分离后，得到第二沉淀和第二清液；3)将所述步骤1)得到的第一清液与所述步骤2)得到的第二清液混合，得到混合清液；4)将所述步骤3)得到的混合清液加入MCX柱中，依次用乙酸溶液和水淋洗，再用氨甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；5)将所述步骤4)得到的洗脱液经氮气吹干，得到干燥物，将所述干燥物与乙酸溶液混合，得到第三混合物，将所述第三混合物过滤后，得到的液相组分作为进样样品。优选的，所述磷酸盐提取液每1L包括：磷酸二氢钾1.0～2.0g，乙二胺四乙酸二钠0.1～0.2g，三氯乙酸10～50g。优选的，所述步骤1)动物肌肉组织的质量与磷酸盐提取液的体积比为(1～3)g:(4～6)ml。优选的，所述步骤1)和步骤2)离心分离的条件独立的包括：所述离心分离的转速为8000～10000rpm，所述离心分离的时间为8～12min。优选的，所述步骤5)乙酸溶液的体积百分含量为1～4％。优选的，所述步骤4)氨甲醇溶液中氨气的体积百分含量优选为15～25％。本专利技术提供了一种测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法，在不使用离子对试剂的条件下，同样能够增强色谱保留，能够检测动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的含量。本专利技术实施例的结果显示：在不使用离子对试剂的条件下，同样能够增强色谱保留，能够检测动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的含量，药物的检测限和定量限分别在1～10μg/kg和2～20μg/kg范围内，表明该方法具有很高的灵敏度，能定量准确测定动物组织中痕量水平的抗菌药物残留；批内和批间精密度分别在2～14.4％和3.7～19.8％之间，表明具有较好的准确度和精密度。附图说明图1为空白鸡肉样品的SRM色谱图；图2为空白鸡肉样品中添加10种氨基糖苷类药物的混合标准溶液(50μg/kg)的SRM色谱；图3为空白牛肉样品的SRM色谱图；图4为空白牛肉样品中添加10种氨基糖苷类药物的混合标准溶液(50μg/kg)的SRM色谱；图5为空白猪肉样品的SRM色谱图；图6为空白猪肉样品中添加10种氨基糖苷类药物的混合标准溶液(50μg/kg)的SRM色谱。具体实施方式本专利技术提供了一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法，包括：将进样样品进行液相色谱-串联质谱检测，根据氨基糖苷类药物含量的标准曲线与进样样品的液相色谱图和质谱图，得到进样样品中氨基糖苷类药物的含量；所述液相色谱的色谱柱为SIELCObeliscR；所述液相色谱的流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为甲酸溶液或乙酸溶液；所述甲酸溶液的体积百分含量为0.5～1.5％，所述乙酸溶液的体积百分含量为1.5～2.5％；所述液相色谱的梯度洗脱程序：0～0.5min，流动相A的体积含量为流动相体积的85％；0.5～3.8min，流动相A的体积含量由85％降低至65％；3.8～4.3min，流动相A的体积含量由65％降低至55％；4.3～4.5min，流动相A的体积含量为55％；4.5～6.5min，流动相A的体积含量由55％降低至0％；6.5～11min，流动相A的体积含量为0％；11～12min，流动相A的体积含量由0％增加至85％；12～21min，流动相A的体积含量为85％。在本专利技术中，所述液相色谱的色谱柱为SIELCObeliscR。在本专利技术中，所述色谱柱SIELCObeliscR的规格优选为5μm，150mm×2.1mmi.d.。在本专利技术中，所述色谱柱SIELCObeliscR同时具有反相、离子交换和亲水作用。在本专利技术中，所述氨基糖苷类药物优选包括新霉素B、安普霉素、卡那霉素B、妥布霉素、威他霉素、潮霉素B、庆大霉素、阿米卡星和大观霉素中的一种或几种。在本专利技术中，所述动物肌肉组织优选来自于猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉或鱼肉。在本专利技术中，所述动物肌肉组织优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法，包括：将进样样品进行液相色谱‑串联质谱检测，根据氨基糖苷类药物含量的标准曲线与进样样品的液相色谱图，得到进样样品中氨基糖苷类药物的含量；所述液相色谱的色谱柱为SIELC Obelisc R；所述液相色谱的流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为甲酸溶液或乙酸溶液；所述甲酸溶液的体积百分含量为0.5～1.5％，所述乙酸溶液的体积百分含量为1.5～2.5％；所述液相色谱的梯度洗脱程序：0～0.5min，流动相A的体积含量为流动相体积的85％；0.5～3.8min，流动相A的体积含量由85％降低至65％；3.8～4.3min，流动相A的体积含量由65％降低至55％；4.3～4.5min，流动相A的体积含量为55％；4.5～6.5min，流动相A的体积含量由55％降低至0％；6.5～11min，流动相A的体积含量为0％；11～12min，流动相A的体积含量由0％增加至85％；12～21min，流动相A的体积含量为85％。

【技术特征摘要】
1.一种未使用离子对试剂测定动物肌肉组织中氨基糖苷类药物的方法，包括：将进样样品进行液相色谱-串联质谱检测，根据氨基糖苷类药物含量的标准曲线与进样样品的液相色谱图，得到进样样品中氨基糖苷类药物的含量；所述液相色谱的色谱柱为SIELCObeliscR；所述液相色谱的流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为甲酸溶液或乙酸溶液；所述甲酸溶液的体积百分含量为0.5～1.5％，所述乙酸溶液的体积百分含量为1.5～2.5％；所述液相色谱的梯度洗脱程序：0～0.5min，流动相A的体积含量为流动相体积的85％；0.5～3.8min，流动相A的体积含量由85％降低至65％；3.8～4.3min，流动相A的体积含量由65％降低至55％；4.3～4.5min，流动相A的体积含量为55％；4.5～6.5min，流动相A的体积含量由55％降低至0％；6.5～11min，流动相A的体积含量为0％；11～12min，流动相A的体积含量由0％增加至85％；12～21min，流动相A的体积含量为85％。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的条件包括：所述流动相的流速为0.4～0.8ml/min；所述液相色谱的柱温为25～40℃；所述液相色谱的进样体积为5～20μl。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述串联质谱的条件包括：所述串联质谱的离子源为电喷雾电离离子源；所述串联质谱的电喷雾电压为4000～5500V；所述串联质谱的离子源温度为450～650℃；所述串联质谱的气帘气压力为20～35psi；所述串联质谱的雾化气压力为45～65psi；所述串联质谱的辅助气压力为45～65psi；所述串联质谱的滞留时间为20～100s。4.根据权利要求1所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺利民，李玖锋，曾振灵，刘戎，苏贻娟，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44