一种太湖白鱼宿主防御肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种太湖白鱼宿主防御肽及其应用，属于生物医学技术领域。本发明专利技术的太湖白鱼宿主防御肽易获得，且成本低；分子量小，可通过化学合成获得，同时也克隆到了其编码基因，也可以通过构建原核或真核表达载体，通过大规模发酵获得。此外，太湖白鱼宿主防御肽对水产养殖病原菌，特别是耐药性水产养殖病原菌具有杀灭作用，且为太湖白鱼自身免疫系统的组成部分，可制备新型免疫制剂，应用到太湖白鱼的水产养殖中。

Taihu white fish host defense peptide and its application

The invention discloses a Taihu white fish host defense peptide and its application, belonging to the field of biomedicine technology. The host defense peptide of Taihu White Fish is easy to obtain and has low cost; the molecular weight is small and can be obtained by chemical synthesis; the coding gene can also be cloned; and the prokaryotic or eukaryotic expression vector can also be constructed and obtained by large-scale fermentation. In addition, host defense peptides of Taihu White Fish can kill pathogenic bacteria in aquaculture, especially those in drug-resistant aquaculture. They are part of the autoimmune system of Taihu White Fish, and can be used to prepare new immune agents for aquaculture of Taihu White Fish.

【技术实现步骤摘要】
一种太湖白鱼宿主防御肽及其应用
本专利技术涉及一种太湖白鱼宿主防御肽及其应用，属于生物医学

技术介绍
太湖白鱼学名翘嘴红鲌(topmouthculter：Erythroculterilishaeformis)，有多种俗名：大白鱼、翘嘴巴、翘壳、白丝、兴凯大白鱼、翘鲌子、鲌刺鱼、翘白、白鱼、噘嘴子浮鲢等，广东地区俗称长江和顺，长江中游俗称翘白、白鱼，长江下游俗称太湖白鱼。隶属鲤科、鲌亚科、鲌属，是鲌属鱼类中个体最大、生长速度最快的种类。太湖白鱼肉质洁白细嫩，味道鲜美，为江河优质重要经济鱼类之一，亦是太湖名贵鱼类，其与银鱼、白虾并称“太湖三白”而名闻天下。但由于其肌肉营养价值高、肉美味鲜，备受人们的青睐，市场需求却越来越大，导致过度捕捞，天然资源日趋减少，因此，养殖太湖白鱼有着良好前景。自2000年起，我国才开始对太湖白鱼的育苗和养殖。作为太湖流域重要的特种水产品种，太湖白鱼的养殖发展前景十分广阔。太湖白鱼养殖业的高速发展的同时，养殖环境也在不断的恶化，高密度的养殖模式导致太湖白鱼养殖中的病害频繁爆发，目前主要采用“药物防治”为主，辅以“生物防治”。“药物治疗”虽然见效快，但药物残留现象严重，影响太湖白鱼食用的安全性，还会造成环境污染，限制了养殖业的发展。同时，反复的使用“药物治疗”，特别是抗生素，会加剧细菌耐药性的发生，存在巨大的潜在危害。“生物防治”虽有一定效果，但目前还不能做到集约化养殖所要求的水准。因此，“免疫治疗”，特别是基于太湖白鱼自身免疫分子开发的“免疫治疗”必将成为新兴鱼药产业。鱼类的固有免疫在抵抗病原体感染的免疫应答中作用更为重要。然而，针对太湖白鱼的免疫系统研究是个空白。太湖白鱼属于硬骨鱼，属于已知的最低等的兼具固有与适应性免疫系统的脊椎动物。硬骨鱼类也具有完全的体液和细胞免疫应答，但与哺乳类不同，鱼类的固有免疫系统在抵抗病原体感染的免疫应答中作用更为重要，主要是因为鱼类属于变温动物，淋巴细胞的增殖较为缓慢，获得性免疫应答的发生相对滞后(可长达12周)，其次，在进化上鱼类的免疫系统也不如高等动物完善，抗体的亲和力、抗体库的大小均明显低于哺乳类。鱼类的固有免疫系统也具有天然的物理、化学屏障，如鱼鳞、皮肤、鳃粘膜(含凝集素、正五聚蛋白、溶菌酶、补体蛋白、抗菌肽、天然抗体IgM)、上皮组织等。体液中存在的诸多化学因子也有重要的抗感染作用，如转铁蛋白(也可在诱导后发挥急性期蛋白作用并活化巨噬细胞)、溶菌酶(也具有调理作用，可活化补体系统和吞噬细胞)、抗菌肽等，无须诱导即产生抗感染作用。与哺乳类相同，鱼类诱导产生的固有免疫应答主要也依赖于细胞因子和趋化因子。现在已经分离出具有生物学活性的鱼类细胞因子和趋化因子包括TNF-α、IL-6、I型和II型干扰素及其诱导表达的的基因(ISG)Mx、OAS、ISG15、IL-8、CXC以及I、II类细胞因子受体等。在功能上，这些细胞与趋化因子的作用机理也类似于高等动物，将吞噬细胞招募至感染部位，引发炎症反应、活化补体系统，进而吞噬或裂解侵入的病原体。因此，亟待深入研究太湖白鱼的固有免疫系统组成，为日趋严重的养殖病害防治提供必要的免疫理论与应用基础。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术从太湖白鱼中识别固有免疫分子(宿主防御肽)，推进对太湖白鱼的免疫系统组成与特点的认识，拟进一步为基于太湖白鱼自身免疫系统开发的“免疫治疗”在其养殖业病害防治中的应用提供理论与应用基础。本专利技术的第一个目的是提供一种来源于太湖白鱼(Erythroculterilishaeformis)的宿主防御肽，所述宿主防御肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术的第二个目的是提供一种编码上述宿主防御肽的基因。在本专利技术的一种实施方式中，核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术的第三个目的是提供一种表达质粒，包含编码上述宿主防御肽的基因。本专利技术的第四个目的是提供一种宿主细胞，包含上述表达质粒。本专利技术的第五个目的是提供上述宿主防御肽在制备水产养殖动物的水产养殖病原菌防治药物中的应用。在本专利技术的一种实施方式中，水产养殖动物为太湖白鱼。在本专利技术的一种实施方式中，水产养殖病原菌为温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌中的一种或几种。在本专利技术的实施例中，药物中宿主防御肽对以上病原菌的最小抑菌浓度为4.69-37.5μg/mL。本专利技术的第六个目的是提供一种所述的宿主防御肽在制备水产养殖病原菌的药物中的应用。在本专利技术的一种实施方式中，水产养殖病原菌为温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌中的一种或几种。本专利技术的第七个目的是提供一种水产养殖动物饲料，包含所述的宿主防御肽。在本专利技术的一种实施方式中，水产养殖动物为太湖白鱼。本专利技术的有益效果在于：本专利技术中的太湖白鱼宿主防御肽易获得，且成本低：分子量小，可通过化学合成获得，同时也克隆到了其编码基因，也可以通过构建原核或真核表达载体，通过大规模发酵获得。此外，太湖白鱼宿主防御肽对水产养殖病原菌，特别是耐药性水产养殖病原菌具有杀灭作用，且为太湖白鱼自身免疫系统的组成部分，可制备新型免疫制剂，应用到太湖白鱼的水产养殖中。附图说明图1为太湖白鱼头肾匀浆上清SephadexG-50葡聚糖凝胶过滤层析；图2为滤纸片法检测抗菌活性：1.氨苄青霉素(阳性对照)，2～6：分别为葡聚糖凝胶过滤层析的洗脱峰峰Ⅰ～Ⅴ，CK：生理盐水(阴性对照)，bacteria1：哈维氏弧菌，bacteria2：副溶血弧菌；图3为葡聚糖凝胶过滤层析后的第三洗脱峰经反相高效液相色谱层析；图4为太湖白鱼hepcidin的编码基因和氨基酸序列；图5为hepcidin-EI在副溶血弧菌感染后的太湖白鱼头肾中的诱导表达分析。具体实施方式下面结合附图和实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1：太湖白鱼头肾中宿主防御肽的葡聚糖凝胶层析太湖白鱼购自太湖水产养殖中心，体长15～20cm，解剖太湖白鱼，采集免疫器官头肾，加入含有1％(v/v)蛋白酶抑制剂的20mM的PBS(1mL/100mg组织)，并冰上匀浆，加入液氮，反复研磨三次，5000g离心30min，收集上清，冷冻浓缩备用。用SephadexG-50葡聚糖凝胶进行过滤层析。将约1g冻干粉溶解于10mL的0.1MNa2HPO4-NaH2PO4pH6.0的磷酸盐缓冲液中，上样于已平衡好的SephadexG-50(Superfine，GEhealthcare)葡聚糖凝胶过滤柱(100cm×2.6cm)，用同样的缓冲液洗脱，并用自动部分收集器进行收集，流速为3mL/管/10分钟，监测收集液280nm处的光吸收，收集各洗脱峰真空冷冻干燥，进行抗水产养殖病原菌活性的检测。结果如图1所示，头肾匀浆液上清经过葡聚糖凝胶过滤层析，共分为5个洗脱峰，收集各洗脱峰真空冷冻干燥后，进行下一步的抗水产养殖病原菌活性的检测。实施例2：抑菌圈法检测SephadexG-50葡聚糖凝胶过滤层析各洗脱峰的抗水产活性首先采用了抑菌圈法，检测了太湖白鱼免疫器官头肾经过SephadexG-50葡聚糖凝胶过滤层析的5个洗脱峰对副溶血弧菌和哈维氏弧菌的抑菌活性。将这两株水产养殖病原菌接种于营养肉汤固体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种来源于太湖白鱼的宿主防御肽，其特征在于：所述宿主防御肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种来源于太湖白鱼的宿主防御肽，其特征在于：所述宿主防御肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种编码权利要求1所述宿主防御肽的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。4.一种权利要求1所述的宿主防御肽在制备水产养殖动物的水产养殖病原菌防治药物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述水产养殖动物为太湖白鱼。6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：卫林，徐薇，冯婷婷，刘天翌，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32