FoF1-ATPaseβ蛋白在促进或降低细胞吸收凋亡小体中的应用制造技术

本申请提供了FoF1‑ATPaseβ蛋白在促进细胞吸收凋亡小体中的应用，其中，所述FoF1‑ATPaseβ蛋白的氨基酸序列中含有WalK A模序和WalK B模序。

Application of FoF1-ATPase beta protein in promoting or reducing cell uptake of apoptotic bodies

This application provides the application of FoF1 ATPase beta protein in promoting cell absorption of apoptotic bodies in which the amino acid sequence of the FoF1 ATPase beta protein contains WalK A and WalK B motifs.

【技术实现步骤摘要】
FoF1-ATPaseβ蛋白在促进或降低细胞吸收凋亡小体中的应用
本申请涉及FoF1-ATPaseβ蛋白在促进细胞吸收凋亡小体中的应用。特别是FoF1-ATPaseβ蛋白在用于控制害虫中的应用，或在制备用于控制动物或人由于凋亡小体积累引起的炎症和/或自身免疫疾病的药物中的应用；此外本申请还涉及一种鉴定候选细胞内源蛋白是否影响细胞吸收凋亡小体的方法。
技术介绍
凋亡小体是最大的一种胞囊，直径为1-5μm，凋亡小体内含有DNA，microRNA和蛋白质。对于昆虫等体型较小的动物来说，一般认为细胞凋亡在10％以下(例如7％)为正常现象，但是当凋亡在生物体内累积在10％以上时，则会影响其生长发育；严重时，例如凋亡在生物体内累积在20％左右时可以导致其死亡。对于人或哺乳动物，凋亡在生物体内累积，虽然不会引起死亡，但也会引发例如炎症或自身免疫疾病等方面的病变，为害生物体的健康状况。然而，到目前为止，一直未能解决控制凋亡小体积累的方法。
技术实现思路
本申请之一提供了FoF1-ATPaseβ蛋白在促进或降低细胞吸收凋亡小体中的应用，其中，所述FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列中含有WalkA模序和WalKB模序。在一个具体实施方式中，所述WalkA模序为如SEQIDNo.1或SEQIDNo.2所示的氨基酸序列，所述WalkB模序为如ArgXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列或如LysXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列；其中如SEQIDNo.1所示的氨基酸序列、SEQIDNo.2所示的氨基酸序列、如ArgXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列或如LysXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列中的Xaa独立地为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸中的任意一种氨基酸，如ArgXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp的氨基酸序列或如LysXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列中的Jaa为疏水性氨基酸。需要强调的是在同一个序列中存在多个Xaa时，该序列中的每个Xaa独立地为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸中的任意一种氨基酸。例如SEQIDNo.1中的四个Xaa，可以彼此相同，也可以彼此不同。同一个序列中存在多个Jaa时，该序列中的每个Jaa独立地为疏水性氨基酸。例如如ArgXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列中的三个Jaa，可以彼此相同，也可以彼此不同。在一个具体实施方式中，所述疏水性氨基酸选自酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、和丙氨酸中的一种。在一个具体实施方式中，所述WalkA模序为如SEQIDNo.3所示的氨基酸序列，所述WalkB模序为如SEQIDNo.4所示的氨基酸序列。在一个具体实施方式中，所述FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列为来源于昆虫纲中的任意一种昆虫的FoF1-ATPaseβ蛋白；优选所述FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列为来源于鳞翅目中的任意一种昆虫的FoF1-ATPaseβ蛋白。在一个具体实施方式中，所述FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.6所示。本申请之二提供了如本申请之一任意一项所述的应用中的所述FoF1-ATPaseβ蛋白在用于控制害虫中的应用。在一个具体实施方式中，优选所述害虫为昆虫纲中的任意一种昆虫。在一个具体实施方式中，更优选所述害虫为来源于鳞翅目中的任意一种昆虫。本申请之三如本申请之一中所述的应用中的所述FoF1-ATPaseβ蛋白在制备用于控制动物或人由于凋亡小体积累引起的炎症和/或自身免疫疾病的药物中的应用。其中，所述FoF1-ATPaseβ蛋白在控制动物或人由于凋亡小体积累引起的炎症时，其最好为来自于该动物或人的FoF1-ATPaseβ蛋白，即用于控制疾病的FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列与其该物种自身的内源FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序相同，或者为其该物种自身的内源FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序的截短序列。在一个具体实施方式中，所述动物可以为宠物、牲畜、禽类等，例如狗、猫、兔、猪、牛、羊、鸡、鸭和鹅等。本申请之四提供了一种鉴定候选细胞内源蛋白是否影响细胞吸收凋亡小体的方法，所述方法选自下列方案之一：方案一：步骤1)、步骤3)、步骤4)和步骤5)；方案二：步骤1)、步骤2)、步骤6)、步骤7)和步骤8)；方案三：步骤1)、步骤2)、步骤3)、步骤4)、步骤5)、步骤6)、步骤7)和步骤8)；其中，1)将定位于细胞表面的第一蛋白与第一标签在第一细胞中融合表达，得到表达有所述第一蛋白与所述第一标签的融合产物的第二细胞；并且所述第一蛋白与所述第一标签在所述第一细胞中融合表达后，使所述第二细胞形成凋亡小体；其中，所述第一标签为所述第一细胞中不能内源表达的蛋白质或多肽；形成凋亡小体后，第一蛋白与第一标签的融合产物会位于凋亡小体的表面，并且所述第一蛋白越稳定越好(即不容易被降解)；2)将所述候选细胞内源蛋白在第三细胞中过表达，得到过表达所述候选细胞内源蛋白的第四细胞；3)对于第一处理组：在用所述候选细胞内源蛋白的抗体处理所述第三细胞后，与步骤1)中形成的凋亡小体混合后进行培养，得到第一处理细胞；对于第一对照组：将步骤1)中形成的凋亡小体与所述第三细胞混合后进行培养，得到第一对照细胞；4)分别提取第一处理细胞和第一对照细胞的总蛋白，依次得到第一处理蛋白和第一对照蛋白；5)将所述第一标签的抗体与所述第一处理蛋白进行定量或半定量抗原/抗体反应；将所述第一标签的抗体与所述第一对照蛋白进行定量或半定量抗原/抗体反应；根据第一处理组和第一对照组分别得到的定量或半定量抗原/抗体反应结果确定所述候选细胞内源蛋白是否影响细胞吸收凋亡小体；6)对于第二处理组：将步骤1)中形成的凋亡小体与步骤2)中的第四细胞混合后进行培养，得到第二处理细胞；对于第二对照组：将步骤1)中形成的凋亡小体与第五细胞与混合后进行培养，得到第二对照细胞；其中所述第五细胞与所述第四细胞的不同之处仅在于，所述第五细胞中不含有外加的编码所述候选细胞内源蛋白的DNA或RNA，也不含有外加的所述候选细胞内源蛋白；例如，当编码候选细胞内源蛋白的核苷酸克隆到pIZT/V5-His质粒载体上后再转染第三细胞得到第四细胞时，那么就利用没有克隆编码候选细胞内源蛋白的核苷酸的pIZT/V5-His空载体转染第三细胞得到第五细胞。7)分别提取第二处理细胞和第二对照细胞的总蛋白，依次得到第二处理蛋白和第二对照蛋白；8)将所述第一标签的抗体与所述第二处理蛋白进行定量或半定量抗原/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.FoF1‑ATPaseβ蛋白在促进或降低细胞吸收凋亡小体中的应用，其中，所述FoF1‑ATPaseβ蛋白的氨基酸序列中含有Walk A模序和Walk B模序。

【技术特征摘要】
1.FoF1-ATPaseβ蛋白在促进或降低细胞吸收凋亡小体中的应用，其中，所述FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列中含有WalkA模序和WalkB模序。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述WalkA模序为如SEQIDNo.1或SEQIDNo.2所示的氨基酸序列，所述WalkB模序为如ArgXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列或如LysXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列；其中如SEQIDNo.1所示的氨基酸序列、SEQIDNo.2所示的氨基酸序列、如ArgXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列或如LysXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列中的Xaa独立地为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸中的任意一种氨基酸，如ArgXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp的氨基酸序列或如LysXaaXaaXaaGlyXaaXaaXaaLeuJaaJaaJaaAsp所示的氨基酸序列中的Jaa独立地为疏水性氨基酸。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述WalkA模序为如SEQIDNo.3所示的氨基酸序列，所述WalkB模序为如SEQIDNo.4所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1-3中任意一项所述的应用，其特征在于，所述FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列为来源于昆虫纲中的任意一种昆虫的FoF1-ATPaseβ蛋白；优选所述FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列为来源于鳞翅目中的任意一种昆虫的FoF1-ATPaseβ蛋白。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述FoF1-ATPaseβ蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.6所示。6.如权利要求1至5中任意一项所述的应用中的所述FoF1-ATPaseβ蛋白在用于控制害虫中的应用，优选所述害虫为昆虫纲中的任意一种昆虫；更优选所述害虫为来源于鳞翅目中的任意一种昆虫；或如权利要求1或2所述的应用中的所述FoF1-ATPaseβ蛋白在制备用于控制动物或人由于凋亡小体积累引起的炎症和/或自身免疫疾病的药物中的应用。7.一种鉴定候选细胞内源蛋白是否影响细胞吸收凋亡小体的方法，所述方法选自下列方案之一：方案一：步骤1)、步骤3)、步骤4)和步骤5)；方案二：步骤1)、步骤2)、步骤6)、步骤7)和步骤8)；方案三：步骤1)、步骤2)、步骤3)、步骤4)、步骤5)、步骤6)、步骤7)和步骤8)；其中，1)将定位于细胞表面的第一蛋白与第一标...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗开珺，寇田超，杨洋，张力丹，何浩娟，蔡秋宸，张玮，崔继辉，张雪雯，董树美，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：云南,53