一种枸杞活性成分的提取方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种枸杞活性成分的提取方法，将冷冻干燥后的枸杞经超声波水提，过滤得到水提滤液和水提滤渣；水提滤渣微波超声提取，得到乙醇提取混合物Ⅰ；水提滤液经超声波醇提，得到乙醇提取混合物Ⅱ；乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ过滤，得到滤液混合浓缩后浓缩液用乙酸乙酯萃取，通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮；得到的滤渣混合后DEAE‑纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；浓缩渣回流、浓缩、大孔树脂层析、干燥得到枸杞色素。本发明专利技术最终的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的提取率较高，极大的提高了枸杞的利用率，同时缩短了提取时间，大幅度降低了生产成本。

Extraction method and application of active ingredient from Lycium barbarum L.

The invention discloses an extraction method for the active ingredients of Lycium barbarum. The Lycium barbarum after freeze-drying is extracted by ultrasonic water and filtered to obtain the water-extracting filtrate and the water-extracting filtrate residue; the water-extracting filtrate residue is extracted by microwave ultrasonic wave to obtain the ethanol-extracting mixture I; the water-extracting filtrate is extracted by ultrasonic alcohol to obtain the ethanol-extracting mixture II; the ethanol-extracting mixture II Compound I and Ethanol Extraction Mixture II were filtered, then the concentrated liquid was extracted by ethyl acetate, then Lycium barbarum flavonoids were dried by silica gel column chromatography, and Lycium barbarum polysaccharides were obtained by DEAE_cellulose column chromatography after the filtrate was mixed and purified, and Lycium barbarum polysaccharides were dried. To Lycium barbarum pigment. The extraction rate of the final Lycium barbarum flavonoids, Lycium barbarum polysaccharides and Lycium barbarum pigment is higher, the utilization rate of Lycium barbarum is greatly improved, the extraction time is shortened, and the production cost is greatly reduced.

【技术实现步骤摘要】
一种枸杞活性成分的提取方法及用途
本专利技术属于食品及药品
，具体涉及一种枸杞活性成分的提取方法及用途。
技术介绍
枸杞隶属于茄科(Solanaceae)，20世纪70年代路安民等对我国的枸杞属植物进行了调查，确定了中国枸杞属种质资源7种，其中包含了宁夏枸杞和黑果枸杞。枸杞是历史悠久、药食同源、驰名中外的名贵中药材。早在《神农本草经》中就被列为上品，称之为“久服，轻身不老，耐寒暑”，中医学认为，枸杞性平、味甘、微苦、无毒，具有滋补肝肺、益精明目、强健筋骨的功效。现代天然产物化学、生物学、药理学研究发现，枸杞子中含有枸杞多糖、枸杞黄酮、枸杞色素、氨基酸、维生素、微量元素等，被广泛用于抗衰老、抗肿瘤、及抗心血管疾病等，具有极高的药用价值和营养价值。目前，枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的提取分离方法都有报道，其中以枸杞多糖和枸杞黄酮的提取方法报道居多。但是单纯的从枸杞中提取一种或者两种活性成分，无疑造成很大的资源浪费，并且提取活性成分后剩余的废渣量大，不易处理，会对生态环境造成巨大的压力。专利申请号CN201310526665.1公开了一种枸杞多维效速粉及其生产方法，首先将枸杞干果经清洗、软化、破碎、超声波提取(水)，离心分离后，分别提取黄酮、甜菜碱和枸杞多糖，然后与酶解后的枸杞果汁混合并调配，加入助干剂，搅拌均匀，均质、浓缩、灭菌、喷雾干燥、过筛、检测、包装，即得到枸杞多维效速粉成品。此专利技术水提后的滤液直接纯化分离出枸杞多糖，使得多糖和黄酮的提取率降低，提取出枸杞黄酮和枸杞多糖后的剩余废渣量大，不易处理，容易造成资源的浪费，并且对环境造成压力。专利技术内容本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种枸杞活性成分的提取方法及用途。本专利技术提供了一种枸杞活性成分的提取方法，包括以下步骤：1)将-10～-20℃冷冻干燥后的枸杞粉碎成粉末，枸杞粉末加入蒸馏水进行超声波提取，提取温度为70-80℃，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10-15g/ml混合后在室温下微波提取，得到乙醇提取混合物Ⅰ；3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:5-10g/ml混合，在70-80℃下超声波提取，得到乙醇提取混合物Ⅱ；4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；5)浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在70-80℃下回流，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。优选的，步骤1)中所述枸杞为黑果枸杞。优选的，步骤1)中所述枸杞粉末的粒径为30-50目。优选的，步骤1)中所述枸杞粉末与蒸馏水的质量体积比为1:10-20g/ml。优选的，步骤1)中所述超声波提取时间为1.5-3h。优选的，步骤2)中所述微波超声提取时间为1.5-2.5h。优选的，步骤3)中所述超声波提取时间为0.5-1.2h。优选的，步骤5)中所述浓缩液用乙酸乙酯萃取3次。优选的，步骤6)中所述回流时间为2-4h。本专利技术还提供了一种依据上述提取方法得到的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素在非酒精性脂肪肝防治方面的用途。本专利技术所述枸杞活性成分包括枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素。枸杞黄酮是枸杞中一类重要的活性物质，在枸杞中的含量为千分之五。是枸杞子抗氧化、延缓衰老的主要物质基础。枸杞多糖是枸杞子的主要活性成分之一，占干果的5％～8％。现代科学研究表明，枸杞多糖是枸杞子保护肝脏的主要成分，能够通过缓解细胞炎症和氧化应激损伤发挥作用。枸杞色素是由玉米黄质、叶黄素和玉米黄素二棕榈酸酯类化合物组成的混合物，对缓解视疲劳、预防老年性视网膜病变有良好的效果。超声波提取方法的提取温度低，提取时间短，能够大大提高提取效率，并且提取液的杂质少，有效成分易于分离、纯化；提取工艺运行成本低，综合效应显著；因此超声波提取方法广泛运用在枸杞活性成分提取。现有技术中运用超声波提取枸杞中的活性成分，主要是提取枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素中的一种或者两种，尚未出现运用水提和醇提相结合的超声波提取方法同步分离得到枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素。但是单纯的从枸杞中提取一种或者两种活性成分，无疑造成很大的资源浪费，并且提取活性成分后剩余的废渣量大，不易处理，会对生态环境造成巨大的压力。与专利申请号CN201310526665.1中直接将超声波水提后的滤液纯化分离出枸杞多糖相比，本专利技术以冷冻干燥后的枸杞为原料，将超声波水提后的浓缩滤液和滤渣分别进行超声波和微波醇提，然后分别混合两种过滤后得到的乙醇滤液和滤渣，进行后续的分离提纯得到枸杞黄酮和枸杞多糖，再从提取黄酮后的固体残渣中分离提纯出枸杞色素，结合本专利技术的超声波温度、超声波时间以及乙醇和水的用量，本专利技术最终的枸杞黄酮和枸杞多糖的提取率较高，极大的提高了枸杞的利用率，同时缩短了提取时间，大幅度降低了生产成本；并且本专利技术的方法得到的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的纯度高，结构完整，理化性质稳定。本专利技术以冷冻干燥后的枸杞为原料，现有技术中常用的干燥方法是在较高的温度下恒温干燥或者是风干，恒温干燥中高温会使得活性成分流失及活性物质失活，风干会使得活性成分流失及引入细菌。而本专利技术通过在-10～-20℃下冷冻干燥，将各种营养物质和活性成分的损失降低到最低限度，比普通冷冻保存的好；在真空和低温下操作，微生物的生长和酶作用受到抑制；排除95％～99％以上的水分，脱水彻底，得到的干制品重量轻，体积小，贮藏时占地面积少，携带方便，能长期保存而不变质，且便于运输，对于营养成分的保存达到90％以上。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术首次将超声波水提、微波醇提、DEAE-纤维素柱层析、硅胶柱层析和大孔树脂柱层析的现代生产工艺结合，同步提取分离出枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素，极大地提高了枸杞利用率，同时明显缩短了提取时间，大幅度节约成本。2、本专利技术以冷冻干燥后的枸杞为原料，将超声波水提后的浓缩滤液和滤渣分别进行超声波和微波醇提，然后分别混合两种过滤后得到的乙醇滤液和滤渣，进行后续的分离提纯得到枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素，结合本专利技术的超声波温度和超声波时间，本专利技术最终的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素的提取率较高，极大的提高了枸杞的利用率，同时缩短了提取时间，大幅度降低了生产成本。3、本专利技术的提取方法提取的枸杞黄酮、枸杞多糖和枸杞色素纯度高，活性结构完整，理化性质稳定，可以用于食品、保健食品、特殊医学用途食品和药品的原料。4、本专利技术以冷冻干燥后的枸杞为原料，通过在-10～-20℃下冷冻干燥，将各种营养物质和活性成分的损失降低到最低限度，比普通干燥保存的好；在真空和低温下操作，微生物的生长和酶作用受到抑制；排除95％～99％以上的水分，脱水彻底，得到的干制品重量轻，体积小，贮藏时占地面积少，携带方便，能长期保存而不变质，且便于运输，对于营养成分的保存达到90％以上。附图说明图1为经本专利技术提取的枸杞活性成分干预后NAFLD小鼠肝脏HE染色示意图。其中，MX：高糖高脂模型组；P：枸杞多糖组；F：枸杞黄酮组；C：枸杞色素组。具体实施方式为使本专利技术的目的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将在‑10～‑20℃下冷冻干燥后的枸杞粉碎成粉末，枸杞粉末加入蒸馏水进行超声波提取，提取温度为70‑80℃，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10‑15g/ml混合后在室温下微波提取，得到乙醇提取混合物Ⅰ；3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:5‑10g/ml混合，在70‑80℃下超声波提取，得到乙醇提取混合物Ⅱ；4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；5)浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用DEAE‑纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在70‑80℃下回流，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。

【技术特征摘要】
1.一种枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将在-10～-20℃下冷冻干燥后的枸杞粉碎成粉末，枸杞粉末加入蒸馏水进行超声波提取，提取温度为70-80℃，然后过滤得到水提滤液和水提滤渣；2)水提滤渣与无水乙醇以质量体积比1:10-15g/ml混合后在室温下微波提取，得到乙醇提取混合物Ⅰ；3)水提滤液浓缩干燥后与无水乙醇以质量体积比1:5-10g/ml混合，在70-80℃下超声波提取，得到乙醇提取混合物Ⅱ；4)将乙醇提取混合物Ⅰ和乙醇提取混合物Ⅱ分别过滤，将得到的两种滤液混合浓缩得到浓缩液和浓缩渣，将得到的两种滤渣混合得到多糖浸膏；5)浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取液通过硅胶柱层析，干燥得到枸杞黄酮，多糖浸膏用DEAE-纤维素柱层析纯化，干燥得到枸杞多糖；6)浓缩渣干燥后以氯仿为溶剂在70-80℃下回流，回流后的氯仿溶液经浓缩、大孔树脂层析、冷冻干燥得到枸杞色素。2.如权利要求1所述枸杞活性成分的提取方法，其特征在于，步骤1)中所述枸杞为黑果...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈嘉勤，陈伊琳，李娣，朱彦，彭琪，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43