木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法技术

本发明专利技术提出了一种木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其步骤如下：（1）取木瓜粉末，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，密塞，称定重量；超声处理，自然冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；（2）采用高效液相色谱法测定供试品溶液中齐墩果酸和熊果酸的含量，测定时的色谱条件为：色谱柱为Agilent5 TC‑C18(2)250×4.6mm，可以实现对木瓜中齐墩果酸及熊果酸含量测定，使其分离度达到合格。

Determination of oleanolic acid and ursolic acid in Chaenomeles speciosa

The method for the determination of oleanolic acid and ursolic acid in papaya is proposed. The steps are as follows: (1) taking papaya powder, putting it in a plug cone bottle, adding methanol, compacting and weighing; naturally cooling to room temperature by ultrasonic treatment, weighing and weighing; filling the lost weight with methanol, shaking well, and microporous filter membrane. The content of oleanolic acid and ursolic acid in the sample solution was determined by high performance liquid chromatography. The chromatographic conditions were as follows: Agilent 5 TC_C18(2) 250 4.6 mm chromatographic column, the content of oleanolic acid and ursolic acid in papaya could be determined and the separation could be reached. Qualified.

【技术实现步骤摘要】
木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法
本专利技术涉及一种测定方法，特别涉及一种木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法。
技术介绍
齐墩果酸和熊果酸为同分异构体，结构与性质均极其相似，在天然植物中往往共生互存，分离测定较为困难。2005年版的《中国药典》(一部)采用薄层扫描色谱法测定马鞭草中熊果酸含量，此法受薄层板、温度、点样、显色等诸多因素影响，易导致定量分析结果偏差，且无法准确测定出另外一种有效成分—齐墩果酸的含量。中药材木瓜在检验过程中，发现在含量测定检验时，依据中国药典一部的检测方法齐墩果酸和熊果酸的分离度根本达不到1.5以上，使含量测定无法进行，使木瓜的质量控制无法从根本解决；鉴于对药品质量安全的考虑，必须专利技术新的方法。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提出了一种木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，可以实现对木瓜中齐墩果酸及熊果酸含量测定，使其分离度达到合格。具体的技术方案如下：木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其步骤如下：（1）取木瓜粉末，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，密塞，称定重量；超声处理，自然冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；（2）采用高效液相色谱法测定供试品溶液中齐墩果酸和熊果酸的含量，测定时的色谱条件为：色谱柱为Agilent5TC-C18(2)250×4.6mm。进一步的，测定时，流动相为〔甲醇：水：磷酸(90:10:0.05)〕:水(90:10)溶液，柱温17℃，检测波长210mm，流速0.8ml/min。进一步的，步骤（1）中的木瓜粉末在称定前过四号筛。进一步的，含量测定的具体实验方法如下：（1）对照品贮备液的制备：分别精密称取齐墩果酸对照品5.53mg，熊果酸对照品6.24mg置50ml量瓶中，分别加甲醇溶解并稀释至50ml，作为对照品贮备液；（2）供试品溶液的制备：取木瓜粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量；超声处理30分钟后，自然冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；（3）线性关系考察：精密吸取齐墩果酸及熊果酸的对照品贮备液各0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的对照品溶液；精密吸取上述5种对照品溶液各10ul按色谱条件分别进样，测定；以对照品浓度X（ug/ml）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程；齐墩果酸:Y=37.51X-19.72(r=0.9997)，线性范围为5.23691-40.56808ug/ml；熊果酸:Y=12.38X-24.52(r=0.9999)，线性范围为5.90928-47.27424ug/ml；结果表明，齐墩果酸和熊果酸分别在相应进样量范围内具有良好的线性关系；（4）重复性实验：取与步骤（2）同一批的样品按步骤（2）制备并进样测定，齐墩果酸和熊果酸含量的RSD分别为1.02%和1.05%，表明本方法重复性好；（5）稳定性实验：取步骤（4）制备的同一批样品在4小时、8小时、12小时分别进样测定，结果12小时内齐墩果酸和熊果酸的色谱峰面积无明显变化，RSD分别为0.35%和0.42%，表明被测样品在12小时内稳定性良好；（6）精密度实验：精密吸取对照品溶液在连续进样6次，结果齐墩果酸和熊果酸浓色谱峰面积RSD分别为0.32%和0.30%，表明本方法精密度良好；（7）加样回收率实验：取齐墩果酸和熊果酸含量分别为0.909%和0.161%的样品0.50g共6份，分别加入对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml，方法制备供试品溶液，进行测定，计算回收率；（8）分别取不同批次的木瓜样品按供试品溶液制备法制备，并进行进样、测定，理论板数和分离度均能达到中国药典的标准。进一步的，步骤（1）中的齐墩果酸对照品购自：中国药品生物制品检定所、批号:110709-201607、纯度91.7%；熊果酸对照品购自：中国药品生物制品检定所、批号:110742-201622、纯度94.7%；甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。进一步的，步骤（2）中的超声处理的功率为250W，频率为40KHZ。本专利技术的有益效果为：木瓜中含有的齐墩果酸和熊果酸具有抗癌、提高免疫力、降血脂和降血糖等功效，木瓜药材中齐墩果酸和熊果酸含量的方法，为木瓜的质量控制提供依据。本方法可以实现对木瓜中齐墩果酸及熊果酸含量测定，它能使二者的色谱峰分离度达到1.5以上，理论板数按齐墩果酸峰计不低于5000，本专利技术方法简单，便于操作，安全可靠。具体实施方式为使本专利技术的技术方案更加清晰明确，下面对本专利技术进行进一步描述，任何对本专利技术技术方案的技术特征进行等价替换和常规推理得出的方案均落入本专利技术保护范围。木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其步骤如下：（1）取木瓜粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量；超声处理30分钟后，自然冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；（2）采用高效液相色谱法测定供试品溶液中齐墩果酸和熊果酸的含量，测定时的色谱条件为：色谱柱为Agilent5TC-C18(2)250×4.6mm。进一步的，测定时，流动相为〔甲醇：水：磷酸(90:10:0.05)〕:水(90:10)溶液，柱温17℃，检测波长210mm，流速0.8ml/min。进一步的，步骤（1）中的木瓜粉末在称定前过四号筛。进一步的，含量测定的具体实验方法如下：（1）对照品贮备液的制备：分别精密称取齐墩果酸对照品5.53mg，熊果酸对照品6.24mg置50ml量瓶中，分别加甲醇溶解并稀释至50ml，作为对照品贮备液；（2）供试品溶液的制备：取木瓜粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量；超声处理30分钟后，自然冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；（3）线性关系考察：精密吸取齐墩果酸及熊果酸的对照品贮备液各0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的对照品溶液；精密吸取上述5种对照品溶液各10ul按色谱条件分别进样，测定；以对照品浓度X（ug/ml）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程；齐墩果酸:Y=37.51X-19.72(r=0.9997)，线性范围为5.23691-40.56808ug/ml；熊果酸:Y=12.38X-24.52(r=0.9999)，线性范围为5.90928-47.27424ug/ml；结果表明，齐墩果酸和熊果酸分别在相应进样量范围内具有良好的线性关系；（4）重复性实验：取与步骤（2）同一批的样品按步骤（2）制备并进样测定，齐墩果酸和熊果酸含量的RSD分别为1.02%和1.05%，表明本方法重复性好；（5）稳定性实验：取步骤（4）制备的同一批样品在4小时、8小时、12小时分别进样测定，结果12小时内齐墩果酸和熊果酸的色谱峰面积无明显变化，RSD分别为0.35%和0.42%，表明被测样品在12小时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其特征为，其步骤如下：（1）取木瓜粉末，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，密塞，称定重量；超声处理，自然冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；（2）采用高效液相色谱法测定供试品溶液中齐墩果酸和熊果酸的含量，测定时的色谱条件为：色谱柱为Agilent5 TC‑C18(2)250×4.6mm。

【技术特征摘要】
1.木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其特征为，其步骤如下：（1）取木瓜粉末，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，密塞，称定重量；超声处理，自然冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；（2）采用高效液相色谱法测定供试品溶液中齐墩果酸和熊果酸的含量，测定时的色谱条件为：色谱柱为Agilent5TC-C18(2)250×4.6mm。2.如权利要求1所述的木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其特征为，测定时，流动相为〔甲醇：水：磷酸(90:10:0.05)〕:水(90:10)溶液，柱温17℃，检测波长210mm，流速0.8ml/min。3.如权利要求1所述的木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其特征为，步骤（1）中的木瓜粉末在称定前过四号筛。4.如权利要求1所述的木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其特征为，含量测定的具体实验方法如下：（1）对照品贮备液的制备：分别精密称取齐墩果酸对照品5.53mg，熊果酸对照品6.24mg置50ml量瓶中，分别加甲醇溶解并稀释至50ml，作为对照品贮备液；（2）供试品溶液的制备：取木瓜粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量；超声处理30分钟后，自然冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；（3）线性关系考察：精密吸取齐墩果酸及熊果酸的对照品贮备液各0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的对照品溶液；精密吸取上述5种对照品溶液各10ul按色谱条件分别进样，测定；以对照品浓度X（ug/ml）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程；齐墩果酸:Y=37.51X-...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴洪玲，王莹，韩春霞，孙玲玲，
申请(专利权)人：吉林省白山本苜药业有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22