本发明专利技术属于生物基因治疗领域，具体涉及一种抑制人恶性脑胶质瘤的靶向AUF1基因的抑制剂及其应用。该靶向抑制剂的核苷酸序列为：5’‑TGGATCAAAAAGAACATAAATTG‑3’（SEQ ID No.1）。本发明专利技术为了解决恶性胶质瘤的抗血管生成基因治疗问题，以RNA干扰技术为基础，通过人工合成AUF1靶向shRNA可以靶向作用于AUF1基因的mRNA，从而阻断其翻译过程，达到使AUF1基因表达降低的结果，为临床上治疗人恶性脑胶质瘤提供了新的思路。
Targeting AUF1 gene inhibitor inhibiting human malignant glioma and its application
The invention belongs to the field of biological gene therapy, in particular relates to an inhibitor targeting AUF1 gene for inhibiting human malignant glioma and its application. The nucleotide sequence of the targeting inhibitor was 5'820 In order to solve the problem of anti-angiogenesis gene therapy for malignant gliomas, the invention, based on RNA interference technology, can target the mRNA of AUF1 gene by synthesizing AUF1 targeting shRNA, thereby blocking its translation process, thus achieving the result of reducing the expression of AUF1 gene, and providing a basis for clinical treatment of human malignant gliomas. New ideas.
【技术实现步骤摘要】
抑制人恶性脑胶质瘤的靶向AUF1基因抑制剂及其应用
本专利技术属于生物基因治疗领域，具体涉及一种抑制人恶性脑胶质瘤的靶向AUF1基因的抑制剂及其应用。
技术介绍
恶性胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤之一。尽管以外科手术治疗为基础，结合术后放化疗的综合性治疗广泛应用，但是恶性胶质瘤患者中位生存期仍不超过15个月，肿瘤易复发，患者死亡率极高(Phillipsetal.,Molecularsubclassesofhigh-gradegliomapredictprognosis,delineateapatternofdiseaseprogression,andresemblestagesinneurogenesis.9(3):157-173.2006)。胶质瘤是一种典型的血管依赖性实体肿瘤(VanMeiretal.Excitingnewadvancesinneuro-oncology:theavenuetoacureformalignantglioma.60(3):166-193.2010)，丰富的肿瘤血管生成和难以抑制的肿瘤血液供应一直是临床治疗的难点之一(ReardonandWen,Gliomain2014:unravellingtumourheterogeneity-implicationsfortherapy.12(2):69-70.2015)。体内血管生成由血管形成及血管新生两种方式构成：前者由内皮祖细胞或者血管母细胞形成新血管；后者由组织中既存的成熟血管内皮细胞发生增殖和游走形成小血管。与其他实体性肿瘤血管发生一样，血管新生是胶质瘤血管生成的主要形式(VanMeiretal.,Excitingnewadvancesinneuro-oncology:theavenuetoacureformalignantglioma.60(3):166-193.2010)。胶质瘤的血管新生是一个涉及既存血管内皮细胞激活、增殖、迁移、基底膜与细胞外基质降解、内皮细胞重塑形成管腔样结构的复杂过程。随着“精准医疗计划”的推进和基因研究的发展，肿瘤的靶向治疗已成为肿瘤治疗领域的新热点。而抗血管新生的靶向治疗成为胶质瘤研究的新方向(Fineetal.,PhaseIItrialofthalidomideandcarmustineforpatientswithrecurrenthigh-gradegliomas.21(12):2299-2304.2003)。特异性的靶向药物通过结合递药载体，靶向性传递到肿瘤组织内部，能够有效提高药物在肿瘤组织中的药物浓度，降低药物在其他组织器官内的分布，提高靶向药物的疗效、降低药物毒副作用。AUF1隶属于异源核核糖核蛋白（hnRNPs）亚家族，编码基因定位于人染色体4q21.22，主要表达于细胞核，并在细胞核和细胞质中穿梭。近年来发现AUF1在肝癌、乳腺癌中高表达，发挥促肿瘤作用。例如AUF1通过结合细胞周期蛋白依赖激酶抑制蛋白p16INK4a，刺激乳腺癌细胞增殖和上皮间质转化(Al-KhalafandAboussekhra,p16(INK4A)inducessenescenceandinhibitsEMTthroughmicroRNA-141/microRNA-146b-5p-dependentrepressionofAUF1.56(3):985-999.2017)。AUF1高表达与肝癌患者甲胎蛋白表达相关，提示肝癌患者预后不良(Yangetal.,AU-bindingfactor1expressionwascorrelatedwithmetadherinexpressionandprogressionofhepatocellularcarcinoma.35(3):2747-2751.2014)。作为一种RNA结合蛋白，AUF1结合于靶基因信使RNA（mRNA）的AU碱基富集区（AREs），参与靶基因mRNA稳定性调控。AREs位于靶基因3′非翻译区(3′UTR)，长度约40-120个碱基，常包括AUUUA或者UUAUUUAUU重复序列。AUF1募集并结合富含AREs的mRNA，形成反式作用复合体，并降解靶基因mRNA。经检索，关于AUF1在胶质瘤中的作用和相关机制，目前国内外尚未见报道。RNA干扰技术的原理是利用Dicer酶切割RNA分子，形成RNA沉默复合体，靶向结合目标RNA分子进而降解RNA分子的过程，主要是通过小双链RNA(siRNA)或者小发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）发挥作用。shRNA是一种特异性茎环结构的RNA序列，通过RNA干扰机制发挥作用，导致靶基因沉默。本专利技术希望利用RNA干扰技术研制AUF1基因的抑制剂，为胶质瘤抗血管新生治疗寻找新的作用靶点，在胶质瘤基因治疗领域发挥作用。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了解决恶性胶质瘤的抗血管生成基因治疗问题，以RNA干扰技术为基础，通过人工合成AUF1靶向shRNA可以靶向作用于AUF1基因的mRNA，从而阻断其翻译过程，达到使AUF1基因表达降低的结果，而提供一种抑制人恶性脑胶质瘤血管新生的靶向AUF1基因的抑制剂和应用。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供了一种AUF1基因的靶向抑制剂，针对AUF基因的mRNA版本号为NM_001003810.1转录本，经过Blast特异性比对，该靶向抑制剂的核苷酸序列为：5’-TGGATCAAAAAGAACATAAATTG-3’（SEQIDNo.1）。所述靶向抑制剂能够抑制AUF1基因表达的shRNA序列，所述shRNA模板序列包括正义链和反义链，所述正义链和反义链分别为：正义链：5’-CACCAUUUAUGUUCUUUUUGAUCUCCATTCAAGAGAGAUCAAAAAGAACAUAAAUUGTTTTTTG-3’（SEQIDNo.2）；反义链：5’-GATCCAAAAAAAUUUAUGUUCUUUUUGAUCUCCATCTCTTGAAGAUCAAAAAGAACAUAAAUUG-3’（SEQIDNo.3）。所述转录shRNA序列的转录产物，序列为：5’-AUUUAUGUUCUUUUUGAUCUCCATTCAAGAGAAUCAAAAAGAACAUAAAUUG-3’（SEQIDNo.4）。所述AUF1基因抑制剂能够抑制人恶性脑胶质瘤血管新生。一种AUF1基因抑制剂作为制备用于治疗人脑胶质瘤药物中的应用，该抑制剂为任何药物治疗学上可接受的的剂型。优选的，该抑制剂的剂型为注射制剂。优选的，该抑制剂为任何药物治疗学上可接受的的剂量。与现有技术相比，本专利技术具有如下技术效果：1.本专利技术靶向抑制剂特异性强，序列高度保守，显著抑制AUF1基因的表达，从而能够抑制人恶性脑胶质瘤血管新生。2.该抑制剂制备技术可实现，AUF1基因抑制剂靶向治疗，针对性强，能显著降低传统治疗药物的耐药问题。3.实验已证明在体外细胞学和实验动物两个水平上应用，治疗效果确切，无不良反应发生。附图说明图1为应用Real-timePCR检测AUF1基因mRNA表达水平显著增高的柱状图。图2为应用westernblot检测AUF1基因蛋白表达水平显著增高的条带和统计图。图3为应用Rea本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制人恶性脑胶质瘤的靶向AUF1基因抑制剂，其特征在于，该靶向抑制剂的核苷酸序列为：5’‑TGGATCAAAAAGAACATAAATTG‑3’（SEQ ID No.1）。
【技术特征摘要】
1.一种抑制人恶性脑胶质瘤的靶向AUF1基因抑制剂，其特征在于，该靶向抑制剂的核苷酸序列为：5’-TGGATCAAAAAGAACATAAATTG-3’（SEQIDNo.1）。2.根据权利要求1所述的抑制人恶性脑胶质瘤的靶向AUF1基因抑制剂，其特征在于，所述靶向抑制剂能够抑制AUF1基因表达的shRNA序列，所述shRNA模板序列包括正义链和反义链，所述正义链和反义链分别为：正义链：5’-CACCAUUUAUGUUCUUUUUGAUCUCCATTCAAGAGAGAUCAAAAAGAACAUAAAUUGTTTTTTG-3’（SEQIDNo.2）；反义链：5’-GATCCAAAAAAAUUUAUGUUCUUUUUGAUCUCCATCTCTTGAAGAUCAAAAAGAACAUAAAUUG-3’（SEQIDNo.3）。3.根据权利要求1所述的抑制人恶性脑胶质瘤的靶向AUF1...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡恒，刘文静，刘云会，薛一雪，
申请(专利权)人：中国医科大学附属盛京医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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