布鲁氏菌单链抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及生物制品检测技术领域，公开了一种布鲁氏菌单链抗体及其用途，该单链抗体包括轻链可变区、重链可变区以及连接所述轻链可变区与所述重链可变区的接头，其中，所述轻链可变区的序列如SEQ ID NO：1的第1‑114位氨基酸所示，所述重链可变区的序列如SEQ ID NO：1的第130‑252位氨基酸所示。本发明专利技术制备了能和布鲁氏菌抗原特异性结合的单链抗体。

Brucella single chain antibody and its use

The invention relates to the field of biological product detection technology, and discloses a Brucella single chain antibody and its use. The single chain antibody includes a light chain variable region, a heavy chain variable region, and a connection between the light chain variable region and the variable region of the heavy chain, in which the sequence of the light chain variable region is such as the first of the SEQ ID NO:1. The sequence of the heavy chain variable region is shown by amino acids, as shown by the 130th amino acid 252 amino acid of SEQ ID NO:1. A single chain antibody specific to Brucella antigen is prepared.

【技术实现步骤摘要】
布鲁氏菌单链抗体及其用途
本专利技术涉及生物制品检测
，具体涉及布鲁氏菌单链抗体及其用途。
技术介绍
布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌感染导致的一种人兽共患病，其基本特征是患病个体的发热和流产，给人和猪、牛、羊等多种动物的生命健康造成严重的威胁。因此，快速准确诊断布病并治疗消除布病，一直是布鲁氏菌流行国家和地区最为重要的公共卫生目标之一。布病诊断相关研究历时已久，在诊断的技术方法，特别是血清学诊断方面取得了重要的进展，从早期的凝集试验、补体结合试验到后来的酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)，以及近年来报道的荧光偏振试验(fluorescencepolarizationassay，FPA)均有较好的应用。凝集试验是早期常用的一种血清学诊断方法，其中较为经典的是标准试管凝集试验(standardtubeagglutinationtest，STAT或SAT)和平板凝集试验(plateagglutinationtest)。这两种试验后来逐渐被灵敏度高、成本低廉、检测快速、操作简便和适合高通量筛选的虎红平板凝集试验(rose-bengalpalteagglutinationtest，RPBT)取代。由于RPBT特异性相对较低，只能用作初筛试验。补体结合试验(complementfixationtest，CFT)特异性较高，但操作步骤繁琐、耗时，应用较少。近年来发展成熟的ELISA方法逐渐得到业内人员的认可。具体而言，用于布病抗体检测的ELISA有间接ELISA(indirectenzyme-linkedimmunosorbentassay，iELISA)和竞争ELISA(competitiveenzyme-linkedimmunosorbentassay，cELISA)之分。这两种方法都是世界动物卫生组织(WorldOrganizationforAnimalHealth，OIE)标准规定的试验方法，后者也是国际贸易中动物布病检验的指定试验方法。iELISA法通过布鲁氏菌LPS包被-血清样本中抗体特异性结合-HRP标记二抗结合-显色步骤完成检测，操作简单，灵敏度高，便于高通量检测，是筛选方法。cELISA同样具备高通量的特点，通过标准化的布鲁氏菌抗原特异性抗体与血清样本中可能存在的抗体竞争与包被抗原的结合，根据显色反应来判断结果，能有效避免交叉反应导致的假阳性结果，具有更高的检测特异性，一般用作确诊性方法。用于布病抗体检测的cELISA试剂和研发越来越受到业内人士的关注和重视。用于布病检测的cELISA试剂中，最为核心的成分是布鲁氏菌抗原特异性抗体(竞争抗体)。该抗体需要与布鲁氏菌抗原特异性地以高亲和力结合，以便在检测体系中与血清样本中的相应抗体形成竞争。目前商品化试剂盒和文献报道的都是针对布鲁氏菌抗原的单克隆抗体。相比多克隆抗体，单克隆抗体在特异性、稳定性等性能参数上有明显的提升，也就导致了相应的cELISA试剂盒的检测性能有了一定程度的保障。但是在单克隆抗体的制备过程中，存在杂交瘤筛选比较复杂、杂交瘤细胞保存成本较高、需要喂养实验小鼠等情况。目前应用较多的小鼠腹水诱生法制备单克隆抗体存在不同程度的批间差异，从而给产品的质量控制带来更大的工作量。就此而言，基于基因工程技术制备的单链抗体相比于单克隆抗体更具优势，一旦获得相应的DNA序列和表达质粒，就可以通过原核生物—大肠杆菌来进行大批量生产，从而实现抗体的低成本、高效率、高质量的大量制备，因此，制备单链抗体具有更为重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的不足，提供一种布鲁氏菌单链抗体及其用途。为了实现上述目的，本专利技术第一方面提供了一种单链抗体，该单链抗体包括轻链可变区、重链可变区以及连接所述轻链可变区与所述重链可变区的接头，其中，所述轻链可变区的序列如SEQIDNO：1的第1-114位氨基酸所示，所述重链可变区的序列如SEQIDNO：1的第130-252位氨基酸所示。本专利技术第二方面提供了编码第一方面所述的单链抗体的基因。本专利技术第三方面提供了一种表达载体，该表达载体包括第二方面所述的基因。本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，该宿主细胞转化有第三方面所述的表达载体。本专利技术第五方面提供了一种布鲁氏菌抗体检测用试剂盒，该试剂盒包括：第一方面所述的单链抗体。本专利技术第六方面提供了一种(非诊断目的)的检测样本中布鲁氏菌抗体的方法，该方法包括使用第一方面所述的单链抗体对样本进行竞争ELISA检测。本专利技术中，应用布鲁氏菌抗原免疫小鼠，收集小鼠脾细胞，提取RNA，构建免疫抗体库，通过噬菌体展示和淘选技术，制备了能和布鲁氏菌抗原特异性结合的单链抗体。应用制备的原核表达质粒转化大肠杆菌，就可以实现抗体的低成本、高效率、高质量的大量制备，为制备更加质优价廉的布病cELISA试剂盒奠定核心原料基础。附图说明图1为竞争ELISA法检测布鲁氏菌抗体的结果(抗体相对含量与405nm处的吸光度)；图2为竞争ELISA法检测布鲁氏菌抗体的结果(抗体相对含量与405nm处吸光度的抑制率)。具体实施方式在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。本专利技术提供的单链抗体包括轻链可变区、重链可变区以及连接所述轻链可变区与所述重链可变区的接头，其特征在于，所述轻链可变区的序列如SEQIDNO：1的第1-114位氨基酸所示，所述重链可变区的序列如SEQIDNO：1的第130-252位氨基酸所示。本专利技术的优选实施方式中，所述接头序列如SEQIDNO：1的第115-129位氨基酸所示。本专利技术提供的单链抗体的序列如SEQIDNO：1所示：EIVLTQSPVTLSVSPGERATLSCRASQSVIGNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASARAAGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLKSEDFAVYYCQQYNNWPPYTFGQGTKVEIKRSGGSTGGGGSGGGGSGGGGSVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLNLRRYAMSWVRQAPGKGLEWVSVIGASDGNVYYADSVKGRFIISRDNSKDTLDLQMNSLRVEDTAVYYCTKDHWLASWTDEMDVWGQGTLVTVSSAS(SEQIDNO：1)。根据本专利技术的一种优选实施方式，所述单链抗体的序列由SEQIDNO：1以及依次连接于SEQIDNO：1的C段的V5标签和His标签组成(如SEQIDNO：3所示)。本专利技术还提供了编码上述单链抗体的基因。根据本专利技术的一种优选实施方式，所述基因的序列可以如SEQIDNO：2的第1-756位碱基所示，也可以如SEQIDNO：2(含V5标签编码序列和His标签编码序列)所示。该优选实施方式中，SEQIDNO：2的第1-342位示出的是轻链可变区编码序列，SEQIDNO：2第343-387位(或SEQIDNO：5)示出的是接头编码序列，SEQIDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单链抗体，该单链抗体包括轻链可变区、重链可变区以及连接所述轻链可变区与所述重链可变区的接头，其特征在于，所述轻链可变区的序列如SEQ ID NO：1的第1‑114位氨基酸所示，所述重链可变区的序列如SEQ ID NO：1的第130‑252位氨基酸所示。

【技术特征摘要】
1.一种单链抗体，该单链抗体包括轻链可变区、重链可变区以及连接所述轻链可变区与所述重链可变区的接头，其特征在于，所述轻链可变区的序列如SEQIDNO：1的第1-114位氨基酸所示，所述重链可变区的序列如SEQIDNO：1的第130-252位氨基酸所示。2.根据权利要求1所述的单链抗体，其中，该单链抗体的序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求1或2所述的单链抗体，其中，所述单链抗体的序列由SEQIDNO：1以及依次连接于SEQIDNO：1的C段的V5标签和His标签组成。4.编码权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡建辉，李艳，王会岩，方芳，郝峰，刘静，徐淞，秦意力，
申请(专利权)人：吉林医药学院，重庆探生科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22