一种浓缩纳米脂肪及其制备方法、应用技术

本发明专利技术公开一种浓缩纳米脂肪，以及制备这种浓缩纳米脂肪的方法。这种方法的步骤包括(1)离心去水、(2)纳米脂肪的制作、(3)负压离心、(4)第二次离心。本发明专利技术又公开浓缩纳米脂肪制备基质血管成分的应用。本发明专利技术再公开浓缩纳米脂肪在制备富血小板血浆应用。本发明专利技术还公开一种浓缩纳米脂肪复合富血小板血浆的移植材料。

Concentrated nano fat, preparation method and application thereof

The present invention discloses a method for concentrating nano fat and preparing such concentrated nano fat. The steps of this method include (1) centrifugal water removal, (2) preparation of nano fat, (3) negative pressure centrifugation, and (4) second times centrifugation. The invention also discloses the application of nano fat to prepare matrix vascular components. The invention further discloses the application of concentrated nano fat in the preparation of platelet rich plasma. The invention also discloses a transplantation material for concentrating nano fat compound platelet rich plasma.

【技术实现步骤摘要】
一种浓缩纳米脂肪及其制备方法、应用
本专利技术属于组织工程和生物材料领域，具体涉及一种浓缩纳米脂肪。
技术介绍
脂肪由于含有干细胞和外基质等活性物质，已经在临床再生与修复领域被广泛应用。在脂肪的作用体系里面，SVF、外基质各自发挥各自的作用，SVF/脂肪干细胞治疗在临床开展受限，很大程度上由于其胶原酶应用的因素，单独用脂肪代替细胞治疗，存在许多由于油脂含量高导致的并发症的问题。2013年Tonnard等人提出大颗粒脂肪，小颗粒脂肪和纳米脂肪这一新概念，其中纳米脂肪由于具有良好的再生功能被广泛采用，但是脂肪存活率和并发症仍然是有待解决的问题。2017年鲁峰等人采用特殊的装置将脂肪进行去油去水处理，并将获得的脂肪命名为SVF-Gel，实验结果发现SVF-Gel更够加快创面愈合。但是他们在操作过程中，事先将上层的油分离出来，最后再混合，这些繁琐的步骤不仅延长了手术时间，还增加了污染的风险。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是提供一种浓缩纳米脂肪及其制备方法，本专利技术的次要目的是提供一种基质血管及其制备方法，本专利技术的再一目的是提供一种富血小板血浆及其制备方法，本专利技术的第四目的是提供一种浓缩纳米脂肪复合富血小板血浆的移植材料。为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一种浓缩纳米脂肪的制备方法，包括以下步骤：(1)离心去水：提取和离心小颗粒脂肪，去除下层液体层；(2)纳米脂肪的制作：将步骤(1)获取的脂肪切割，再过滤；(3)负压离心：将步骤(2)获得的脂肪负压离心，所述负压范围是0-18kPa；(4)第二次离心：将步骤(3)获得的脂肪离心，中层即是浓缩的纳米脂肪。优选的，步骤(3)中，所述负压离心是将两个螺旋注射器通过注射器转换器连接，每个注射器里面平均放置所述步骤(2)获得的脂肪，然后同时将两个注射器拉至最大刻度，然后恢复原脂肪所在刻度。优选的，所述的螺旋注射器的型号为10ml。优选的，步骤(1)中，所述的小颗粒脂肪的温度保持在3-5℃；步骤(2)中，将步骤(1)获取的脂肪先用2.4mm的双螺母连接器各切割30次，再用1.2mm的双螺母连接器切割30次，再用500目筛网过滤。一种浓缩纳米脂肪，根据上项所述的制备方法获得的。所述的浓缩纳米脂肪在制备基质血管成分应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)首先用生理盐水配置胶原酶；(2)在离心管里加入所述浓缩纳米脂肪与步骤(1)获得的胶原酶，所述浓缩纳米脂肪与步骤(1)获得的胶原酶的体积比是1:1；(3)将步骤(2)获得的玻璃容器放在恒温摇床中消化；(4)将步骤(3)获得的玻璃容器离心后，去除上层和中层的液体，留取下层混合物；(5)向步骤(4)获得的玻璃容器加入生理盐水，重悬细胞，过滤去除条索脂肪结构，离心；(6)用生理盐水冲洗步骤(5)获得的细胞，离心，获得基质血管成分。所述的浓缩纳米脂肪在制备基质血管成分应用，其特征在于，所述步骤(1)中的胶原酶的浓度是0.1％-0.2％；所述步骤(3)中恒温摇床的温度是37℃，恒温摇床的的转速是200-300次/分钟，消化时间是30-45min；所述步骤(6)中用生理盐水冲洗步骤(5)获得的细胞的次数是三次，所述离心是以300-500g离心3-5min。所述的浓缩纳米脂肪在制备富血小板血浆应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)取所述浓缩纳米脂肪和抗凝血，所述浓缩纳米脂肪和抗凝血来自同一个体；(2)将步骤(1)获得的抗凝血离心，留下中间白膜层和上清液；(3)将步骤(2)获得的混合物离心，留下上清液和下层血小板沉淀，重悬沉淀，留下下层血小板；(4)取下层血小板检测血小板浓度，当下层血小板浓度倍数保持全血的血小板浓度在4-6倍之间，即为富血小板血浆。所述的浓缩纳米脂肪在制备富血小板血浆应用，步骤(1)中所述纳米脂肪和抗凝血的体积比是50ml：20ml；步骤(3)中留下上清液的体积是2-3ml。浓缩纳米脂肪在制备浓缩纳米脂肪复合富血小板血浆的移植材料的应用，所述浓缩纳米脂肪与所述的富血小板血浆的体积比是1-3:1，所述浓缩纳米脂肪与富血小板血浆来自同一个体。本专利技术的有益效果与优点(1)刚抽吸出来的微颗粒脂肪呈现淡橘黄色外观颗粒明显，与水分界清析，纳米脂肪则颜色偏白，呈现均质乳糜状外观，浓缩后的纳米脂肪，相比于纳米脂肪而言变得整体形态更加稳定。(2)与现有的脂肪浓缩方法相比，本专利技术的方法操作更加简单，用时较少，10ml脂肪经整个过程大概只需要10分钟。本专利技术的方法使用的都是物理方法，不添加任何有争议的化学试剂，更安全可靠。获取浓缩纳米脂肪的机械操作，对于脂肪的细胞增殖能力和迁移能力没有明显损伤。(3)相对于传统的纳米脂肪而言，浓缩纳米脂肪含水量和脂肪细胞含量更低，10ml的纳米脂肪，可去除大约5.6ml油脂，3.17ml液体，大概10ml微颗粒脂肪能收获大约1.23ml浓缩后的纳米脂肪。浓缩倍数为8.02倍，细胞倍数增加了5.03倍，去除了大量的油滴和水分，油滴和水分在脂肪作用过程中可能会起到相反的作用。(4)本专利技术方法提取的浓缩纳米脂肪的SVF含量达到传统纳米脂肪的5.03倍。用浓缩纳米脂肪提取SVF，使用的胶原酶含量明显降低，提高SVF的提取效率，脂肪移植的并发症也明显降低，脂肪存活率提高，提高脂肪移植治疗的作用效果，降低移植脂肪中的油脂含量从而降低术后钙化、囊肿形成等并发症。(5)本方法制备的浓缩纳米脂肪来自完全来源于自体，具有生物活性，并且没有免疫排斥反应，不存在伦理问题。无需体外培养，减少动物血清等成分污染，可以即时移植应用。(6)本方法所使用的负压方法对脂肪里面脂肪干细胞的活性无明显影响，细胞划痕实验显示纳米脂肪和浓缩纳米脂肪都能在24小时内长满。附图说明图1是获取微颗粒脂肪的抽脂针实物图：抽脂针的侧孔直径为1mm。图2是纳米脂肪制备的流程图：左上图是脂肪经2.4mm的连接器切割的模式图，右上图是脂肪经1.2mm的连接器切割的模式图，左下图是经过2.4mm和1.2mm两种螺母连接器切割后脂肪形态图，右下图是脂肪经500目筛网过滤的示意图。图3是微颗粒脂肪、纳米脂肪与浓缩纳米脂肪图：图(a)是微颗粒脂肪与纳米脂肪对比图，图(b)是纳米脂肪与浓缩纳米脂肪对比图。图4是纳米脂肪浓缩后水油分层图：其中上层是油滴层，中层是浓缩纳米脂肪层，下层是液体层。图5是两种脂肪提取的SVF生长图：图(a)是普通纳米脂肪，图(b)是浓缩纳米脂肪。图6是细胞划痕实验结果图。图7是纳米脂肪和浓缩纳米脂肪在新西兰兔体内的脂肪吸收率比较图。具体实施方式实施例1提取新西兰兔腹部脂肪(1)离心去水：对新西兰兔进行常规消毒后用10ml注射器获取该兔背部小颗粒脂肪50ml，用1000g的离心力离心3min小颗粒脂肪，去除下层液体层，将脂肪放置在放有冰块的冰桶内静置，小颗粒脂肪的温度保持在4℃，静置大约十分钟后可见脂肪和肿胀液液体层明显分层，去除液体层。去除下层液体层。(2)纳米脂肪的制作：将步骤(1)获取的脂肪先用2.4mm的双螺母连接器各切割30次，再用1.2mm的双螺母连接器切割30次，再用500目筛网过滤。(3)负压离心：将两个10ml螺旋注射器通过注射器转换器连接，每个注射器里面放置5ml所述步骤(2)获得的脂肪，然后同时将两个注射器拉至最大刻度，然后恢复原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种浓缩纳米脂肪的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)离心去水：提取和离心小颗粒脂肪，去除下层液体层；(2)纳米脂肪的制作：将步骤(1)获取的脂肪切割，再过滤；(3)负压离心：将步骤(2)获得的脂肪负压离心，所述负压范围是0‑18kPa；(4)第二次离心：将步骤(3)获得的脂肪离心，中层即是浓缩的纳米脂肪。

【技术特征摘要】
1.一种浓缩纳米脂肪的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)离心去水：提取和离心小颗粒脂肪，去除下层液体层；(2)纳米脂肪的制作：将步骤(1)获取的脂肪切割，再过滤；(3)负压离心：将步骤(2)获得的脂肪负压离心，所述负压范围是0-18kPa；(4)第二次离心：将步骤(3)获得的脂肪离心，中层即是浓缩的纳米脂肪。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述负压离心是将两个螺旋注射器通过注射器转换器连接，每个注射器里面平均放置所述步骤(2)获得的脂肪，然后同时将两个注射器拉至最大刻度，然后恢复原脂肪所在刻度。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的螺旋注射器的型号为10ml。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的小颗粒脂肪的温度保持在3-5℃；步骤(2)中，将步骤(1)获取的脂肪先用2.4mm的双螺母连接器各切割30次，再用1.2mm的双螺母连接器切割30次，再用500目筛网过滤。5.一种浓缩纳米脂肪，其特征在于，根据权利要求1-4任一项所述的制备方法获得的。6.根据权利要求5所述的浓缩纳米脂肪在制备基质血管成分应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)首先用生理盐水配置胶原酶；(2)在离心管里加入所述浓缩纳米脂肪与步骤(1)获得的胶原酶，所述浓缩纳米脂肪与步骤(1)获得的胶原酶的体积比是1:1；(3)将步骤(2)获得的玻璃容器放在恒温摇床中消化；(4)将步骤(3)获得的玻璃容器离心后，去除上层和中层的液体，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宏伟，吴引弟，廖选，蒋笑，李泽华，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44