一种检测五氯酚钠残留的胶体金试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种检测五氯酚钠残留的胶体金试剂盒，可用于检测水产品中五氯酚钠残留。本实用新型专利技术试剂盒由试剂板、前处理试剂、离心管、滴管和使用说明书组成。试剂板由塑料壳、背衬、依次粘贴在背衬上的样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸收垫构成，前处理试剂由复溶液、提取剂和净化剂组成。试剂盒可进行半定量检测，操作简单，所需检测时间短，且无需昂贵仪器和专业人员辅助，适合市场监督管理部门和水产养殖户对五氯酚钠残留的大规模检测。

A colloidal gold kit for detecting residual sodium pentachlorophenol

The utility model relates to a colloidal gold reagent kit for detecting sodium pentachlorophenol residues, which can be used for detecting sodium pentachlorophenol residues in aquatic products. The kit is composed of reagent plate, pretreatment reagent, centrifuge tube, dropper and instruction manual. The reagent plate is made up of a plastic shell, a back lining, and a sample pad, a colloidal gold binding pad, a chromatography film and an absorbing pad, which are pasted on the back lining. The pretreatment reagent is composed of a complex solution, an extractor and a purifier. The kit can be semi quantitative, easy to operate, short time for detection, and without the assistance of expensive instruments and professionals. It is suitable for market supervision and management departments and aquaculture households to detect the residue of sodium pentachlorophenol in a large scale.

【技术实现步骤摘要】
一种检测五氯酚钠残留的胶体金试剂盒
本技术涉及食品安全快速检测领域，具体涉及一种检测水产品中五氯酚钠残留的胶体金试剂盒。
技术介绍
五氯酚钠（PCP-Na）是五氯酚的钠盐，属于有机氯农药，曾作为杀虫剂、抗菌剂、防腐剂和除草剂被广泛使用，特别是渔业方面，常常将它作为清塘药物，效果显著。但是，五氯酚钠的水溶性好且难以降解，易在动物体内富集，并通过食物链进入人体，从而危害人体健康。五氯酚钠在人和动物体内会分解成五氯酚，而五氯酚具有很强的解偶联作用，可引起急性或慢性中毒，同时会导致内分泌紊乱，甚至还有致癌、致畸、致突变作用，危害性极大。美国环保署(EPA)和世界野生动物基金会(WFF)已将五氯酚钠列入环境主要持久性有机污染物及优先监测污染物，并且禁止使用。我国农业部也于2002年发布了《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》的通知，通知中明确指出，在水生动物食品生产中严禁使用五氯酚钠。为了更好地监测水产品中五氯酚钠的残留，保障人们的身体健康，一种有效的检测方法十分必要。目前，五氯酚钠检测方法主要有分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法、气质连用法和酶联免疫吸附法等。分光光度法和薄层色谱法操作简单，不需要昂贵的仪器，但检测结果准确度差，灵敏度低。仪器法较其他方法来讲，灵敏度高，结果准确，但需要昂贵的仪器和专业人员操作，成本投入高，不适合用于大规模快速筛检。酶联免疫吸附法是当前较为普遍的方法，其操作简便、灵敏度高、特异性强、成本低，但是该法中酶的活性易受影响，重复性较差，且保质期短，保存环境要求高。免疫胶体金快速检测法弥补了现有检测技术的不足，此法灵敏度高，特异性强，操作简便快速，生产成本低，无需昂贵仪器和专业人员辅助，适合用于养殖企业、市场监管部门等开展大规模检测工作。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种灵敏度高、特异性好、能够快速检测五氯酚钠残留的胶体金试剂盒。本技术所采用的技术方案是：一种检测五氯酚钠残留的胶体金试剂盒，包含试剂板、前处理试剂、离心管、滴管和使用说明书，所述试剂板由塑料壳、背衬、依次粘贴在背衬上的样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸收垫构成，所述前处理试剂由复溶液、提取剂和净化剂组成。所述背衬由塑料薄板构成，样品垫和胶体金结合垫由玻璃纤维构成，层析膜由硝酸纤维素膜构成，吸收垫由滤纸构成。所述样品垫和吸收垫宽18mm，胶体金结合垫宽8mm。所述胶体金结合垫上包被着胶体金标记的五氯酚钠单克隆抗体，层析膜上有包被五氯酚钠-牛血清白蛋白的检测线和包被羊抗鼠IgG的质控线。所述前处理试剂装在固定在泡沫中的玻璃瓶里。所述净化剂为正己烷。本技术试剂盒具有以下有益效果：（1）本技术试剂盒的灵敏度高，对水产品中五氯酚钠的检出限为2.0μg/kg。（2）本技术试剂盒的特异性好，与五氯酚钠的交叉反应率为100%，与氯霉素、四环素、磺胺类等药物无交叉反应。（3）本技术试剂盒配备有前处理试剂耗材，操作简单方便，按照使用说明书步骤就能完成检测，无需专业人员和昂贵仪器，同时检测所需时间短，3-5分钟就能读取结果，节省了时间。（4）本技术试剂盒的生产成本低，工艺简单，为实现产业化提供了便利，效益前景十分好。附图说明图1为本技术试剂盒中试纸板的侧面结构示意图，其中1为样品垫，2为胶体金结合垫，3为层析膜，4为检测线，5为质控线，6为吸收垫，7为背衬。图2为本技术试剂盒中试剂板的操作示意图，其中S为加样孔，T为检测线，C为质控线。图3a-c为本技术试剂盒的检测结果示意图，其中T为检测线，C为质控线；图3-a为阴性结果示意图；图3-b为阳性结果示意图；图3-c为无效结果示意图。具体实施方式【实施例1】本技术试剂盒中试剂板的制备方法1、五氯酚钠-牛血清白蛋白的制备取五氯酚钠和4溴丁酸乙酯溶于二甲基甲酰胺（DMF）中，将反应生成的中间产物加入氢氧化钾水溶液中，水解生成半抗原。再将半抗原溶解于DMF中，加入氯甲酸异丁酯，4℃下搅拌5min后，逐滴滴入溶于PH7.4PBS的BSA中，4℃下搅拌4h。用蒸馏水透析2d，再用0.9%生理盐水透析3d，得到五氯酚钠-BSA。2、五氯酚钠单克隆抗体的制备将五氯酚钠-BSA与等量的弗氏完全佐剂乳化，腹腔注射免疫BALB/c小鼠，取效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。对小鼠腹腔注射杂交瘤细胞制备腹水，纯化后得到五氯酚钠单克隆抗体。3、胶体金溶液的制备在100mL去离子水中加入1mL1%柠檬酸三钠，煮沸后迅速加入1mL1%氯金酸，继续煮沸，待溶液变红后，冷却得到胶体金溶液。4、胶体金标记的五氯酚钠单克隆抗体的制备取已制备好的胶体金溶液100mL，边搅拌边加入五氯酚钠单克隆抗体，25℃下孵育15min后，调节胶体金溶液的PH为7.4，加入10%的BSA，离心后弃上清液，加入pH8.0的PBS缓冲液（含1%BSA），再次离心后弃上清液，如此洗涤2~4次后，用含1%BSA的PBS缓冲液（pH7.4）溶解，再用0.22µm无菌过滤器过滤，得到胶体金标记的五氯酚钠单克隆抗体。5、试剂板的组装（1）用点膜仪把适当浓度的五氯酚钠-牛血清白蛋白及羊抗鼠IgG喷在层析膜上，分别作为检测线和质控线，同时将制备好的胶体金标记的五氯酚钠单克隆抗体包被到胶体金结合垫上，37℃烘箱干燥8h。（2）将样品垫和吸收垫剪切成18mm宽，将胶体金结合垫剪切成8mm宽；将剪切好的样品垫、胶体金结合垫、层析膜、吸收垫依次粘贴在背衬上，组成宽60mm的大卡；用切割机将大卡切成3-4mm宽的试纸条，装入塑料壳中，然后放进带有干燥剂的铝箔袋中储存。【实施例2】本技术试剂盒的使用方法1、样品处理取一定量的组织样本，用均质机搅碎均匀；称取2g匀质样本于5mL离心管中；加入一瓶PCP提取剂；剧烈振荡3min后，室温下4000rpm，离心5min；用短移液滴管移取上层溶液2mL到新5mL离心管中，65℃下空气吹干；分别用PCP净化剂专用滴管和PCP复溶液专用滴管；向吹干的离心管中加入0.3mLPCP净化剂和0.3mLPCP复溶液，缓慢上下颠倒混匀20次；静置分层后吸取下层溶液，待检。2、使用方法从铝箔袋中取出试剂板，水平放置于观察者正面，用滴管吸取待检溶液，于加样孔中垂直滴加3滴（约100μL），结果应在3-5min读取，其他时间判读无效。3、结果判断T线显色比C线深或一样深为阴性，表示样品中五氯酚钠含量低于检出限或不含五氯酚钠，如图3-a所示。T线显色比C线浅或T线无显色为阳性，表示样品中五氯酚钠含量等于或高于检出限，如图3-b所示。未出现C线，可能是操作不当或试剂板已失效，如图3-c所示。【实施例3】本技术试剂盒的灵敏度试验1、样本准备在空白鱼肉样本中添加五氯酚钠标准品，分别制成浓度为0.5μg/kg、1.0μg/kg、2.0μg/kg、4.0μg/kg、8.0μg/kg的鱼肉样本各3份。2、检测步骤按照实施例2的方法处理阴性空白样本、五氯酚钠浓度为0.5μg/kg、1.0μg/kg、2.0μg/kg、4.0μg/kg、8.0μg/kg的加标样本后，取实施例1制备的试剂板进行检测，每个浓度重复3次，观察检测结果。3、试验结果表1试剂盒的灵敏度试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测五氯酚钠残留的胶体金试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含试剂板、前处理试剂、离心管、滴管和使用说明书，所述试剂板由塑料壳、背衬、依次粘贴在背衬上的样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸收垫构成，所述前处理试剂由复溶液、提取剂和净化剂组成。

【技术特征摘要】
1.一种检测五氯酚钠残留的胶体金试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含试剂板、前处理试剂、离心管、滴管和使用说明书，所述试剂板由塑料壳、背衬、依次粘贴在背衬上的样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸收垫构成，所述前处理试剂由复溶液、提取剂和净化剂组成。2.如权利要求1所述的检测五氯酚钠残留的胶体金试剂盒，其特征在于所述背衬由塑料薄板构成，样品垫和胶体金结合垫由玻璃纤维构成，层析膜由硝酸纤维素膜构成，吸收垫由滤纸构成。3.如权利要求1所述的检测五氯酚钠残留的胶体...

【专利技术属性】
技术研发人员：桑丽雅，王伟萍，王振国，陈笑笑，罗南，陈青舟，胡叶军，
申请(专利权)人：杭州南开日新生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：浙江,33