一株红色红曲霉菌及在制备降脂药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于制药、微生物及其发酵技术领域，提供一株红色红曲霉菌及在制备降脂药物中的应用，所述菌为红色红曲霉菌（M.ruber）FWB13，已于2017年03月06日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为：CGMCC No.13685。本发明专利技术的实验证明，对红曲红曲霉菌FWB13发酵培养，可获取高MK含量的红曲中药材，且桔霉素未检出（检出限16ug/kg），具有很好的市场前景。

A red Monascus and its application in the preparation of lipid-lowering drugs

The present invention belongs to the field of pharmaceutical, microorganism and fermentation technology. It provides a red Monascus fungus and the application in the preparation of lipid lowering drugs. The bacteria is M.ruber FWB13, which has been registered at the general microorganism center of the Chinese microbe preservation Management Committee on 03 2017, and the preservation number is numbered. CGMCC No.13685. The experiment proved that the fermentation of Monascus Monascus FWB13 can obtain the Chinese medicinal herbs with high MK content, and the citrinin is not detected (16ug/kg). It has a good market prospect.

【技术实现步骤摘要】
一株红色红曲霉菌及在制备降脂药物中的应用
本专利技术涉及制药、微生物及其发酵
，具体涉及红曲霉菌属（Monascus）菌种、传统炮制红曲中药工艺、具有降血脂功能的中药材、中药饮片及其胶囊和片剂中药【下称中药（材）】。
技术介绍
红曲是红曲霉菌接种在大米上培养而成的，按功能分为酿酒曲、色曲和功能红曲3种，已有一千多年的历史，是中国的“国曲”，福建古田为红曲的发源地和主产地。红曲中胆固醇合成抑制剂莫纳可林K（MonacolinK，MK）是日本东京农工大学远藤章教授1979年从红曲霉菌属的红色红曲霉菌（M.ruber）No.1005菌株的发酵物中发现的，从此红曲引起了国内外的关注。目前已经开发成了食品、保健食品、药品。血脂康、脂必妥等药物大量的临床研究表明，红曲在较低剂量下即可达到临床常用降脂化药洛伐他汀（及他汀类药物）相同的药效，肝肾毒性低，因此开发红曲作为降三高药物具有广阔前景。随着检测技术的发展，法国学者Blanc于1995发现红曲霉菌发酵过程产生真菌毒素桔霉素（Citrinin），具有致畸、致癌、致突变作用，其毒性类似于黄曲霉毒素B1。研究表明，紫色红曲霉菌产主要功效成分莫纳可林系列物质少或基本不产，而产桔青霉素含量都较高，大都达不到国标或外国标准。但由于历史的原因，目前我国国家药典中的血脂康、各省的红曲中药饮片地方炮制规范都将发酵菌种都限定指定为紫色红曲霉菌（M.purpureus）。中国食品添加剂协会对国内生产的红曲产品，桔霉素含量指标委托江南大学进行普查，发现大部份产品的桔霉素含量超出日本标准最低十几倍，最高达一百多倍，桔霉素已成为我国红曲进入欧美市场的技术瓶颈。有报道红曲霉菌属的其他种具有高产MK，且低桔霉素的优势，如红色红曲霉菌、丛毛红曲霉菌（M.pilosus）等。从我国1000多年红曲的食用历史、以及在全国推广的11株红曲工业化应用菌株鉴定结果和相关的文献研究报道来看，人们食用红曲也不仅仅限于紫色红曲霉菌。本专利技术以一株高产MK且不产桔霉素的红色红曲霉菌为出发菌株，采用传统炮制红曲中药工艺制成降血脂功能的中药（材），开发无桔霉素、且高产MK的中药（材），与常规的紫色红曲霉菌发酵的中药（材）相比，可省去提取工艺，且安全低毒。在地方红曲传统炮制规范和药典基础上，结合现代技术，老药换新颜，获得绿色高效的红曲中药，为人类健康做贡献。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株红色红曲霉菌FWB13。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供的红色红曲霉菌(Monascusruber)FWB13，已于2017年03月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编号为：CGMCCNO.13685，分类命名为红色红曲霉菌（M.ruber）。并委托深圳华大基因科技服务有限公司对该菌株进行鉴定和全基因测序，2017年08月29日报告显示为红色红曲霉菌（M.ruber）。红色红曲霉菌FWB13在制备高MK含量红曲中的应用也是本专利技术保护范围。本专利技术的第二个目的是提供一种生产高MK含量红曲产品的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤：采用固态发酵上述红色红曲霉菌FWB13,收集发酵产物，即可得到富含MK且不含桔霉素的红曲产品。包括如下步骤：以禾本科植物稻OryzasativaL.为主要原料，采用红曲红曲霉菌FWB13，通过固态发酵，烘干即得到富含MK，且不含桔霉素的红曲中药材，以该药材制备成红曲中药饮片、红曲中药胶囊和红曲中药片剂。具体方法为：（1）将红色红曲霉菌种接种于斜面培养基，28-30℃培养5-10d至菌丝长满斜面；（2）用10-20mL无菌水洗涤斜面孢子后所得的斜面培养液，孢子浓度调整为106cfu/mL，接种到种子液体培养基中，接种量2%-10%，在30℃、80-200r/min的旋转式摇床上液态培养3-10d，制得液体种子培养液；（3）以无菌水将固态发酵培养基含水量调整至30%-45%；接种5%-10%上述液体种子培养液，混匀；发酵条件为先30-37℃培养3-7d，后转入25-30℃培养10-30d；（4）发酵结束，收集发酵产物，50-80℃烘6-24h至水分小于10%，即得降血脂红曲产品。上述方法中，所述斜面培养基含可溶性淀粉2-5wt.%，麦芽糖5-10wt.%，蛋白胨2-5wt.%，琼脂2-4wt.%。将该斜面培养基装入试管中，经灭菌、摆成斜面冷却。上述方法中，种子液体培养基含米粉2-5.0wt.%，葡萄糖0-5.0wt.%，蛋白胨0-5.0wt.%，硫酸镁0.1-0.3wt.%，磷酸二氢钾0.1-0.2wt.%，硝酸钠0-0.5wt.%，根据容器大小装其容量的1/8-1/3液体培养基，灭菌、冷却。上述方法中，固态发酵培养基：将禾本科植物稻OryzasativaL.装入可装3-10倍（对应物料重量的水体积）的容器中，加入物料重1/3-2/3量的营养液[营养液含Mg2+0%-0.2%、PO43-0%-0.2%、NaNO30%-0.2%、冰醋酸0%-0.6%（v/w）的水溶液]，搅拌均匀后在121℃湿热灭菌20min，并趁热打散。本专利技术的实验证明，对红曲红曲霉菌FWB13发酵培养，可获取高MK含量的红曲中药材，且桔霉素未检出（检出限16ug/kg）。具有很好的市场前景。本专利技术的优点在于：本专利技术提供的低桔霉素高活性成分的降血脂红曲中药的制法，在传统发酵方法基础上采用新的菌株，不产生污染、质量稳定性高，适宜规模化生产，达到国际卫生标准。附图说明图1红色红曲霉菌FWB13的菌落形态和显微形态。分别用MEA（麦芽提取粉琼脂培养基）、Ma（麦芽汁琼脂培养基）、CYA（察氏酵母提取粉琼脂培养基）和G25N（甘油硝酸盐琼脂培养基），25℃培养25d，分别观察7d和25d菌落形态。图2红色红曲霉菌FWB13的显微形态。分别用MEA（麦芽提取粉琼脂培养基）、Ma（麦芽汁琼脂培养基）、CYA（察氏酵母提取粉琼脂培养基）和G25N（甘油硝酸盐琼脂培养基），25℃培养25d，分别观察7d和25d显微形态。图3基于ITSl-5.8SrDNA-ITS2区域序列绘制的发育进化树。图4基于CorePan分析结果构建红色红曲霉菌FWB13进化树。图5基于GeneFamily分析结果构建红色红曲霉菌FWB13进化树（以AspergillusflavusNRRL3357,PenicilliumchrysogenumWisconsin54-1255,AspergillusfumigatusAf293,MonascusruberNRRL1597，MonascuspurpureusNRRL1596为基因序列来源对照菌株）。图6红色红曲霉菌FWB13产桔霉素相关基因扩增结果。实验提取红曲ITSl-5.8SrDNA-ITS2区域基因，并进行PCR扩增，其琼脂糖凝胶电泳如图。图7酸式monacolinK标准品色谱图。图8内酯式monacolinK标准品色谱图。图9红色红曲霉菌FWB13固态发酵产品的色谱图。图10酸式MonaeollnK的MS检测结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株红色红曲霉菌，其特征在于：所述菌为红色红曲霉菌（Monascus ruber）FWB13，已于2017年03 月06日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为：CGMCC No.13685。

【技术特征摘要】
1.一株红色红曲霉菌，其特征在于：所述菌为红色红曲霉菌（Monascusruber）FWB13，已于2017年03月06日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为：CGMCCNo.13685。2.如权利要求1所述的红色红曲霉菌固态发酵产品的制备方法，其特征在于：所述方法为：（1）将红色红曲霉菌种接种于斜面培养基，28-30℃培养5-10d至菌丝长满斜面；（2）用10-20mL无菌水洗涤斜面孢子后所得的斜面培养液，孢子浓度调整为106cfu/mL，接种到种子液体培养基中，接种量2%-10%，在30℃、80-200r/min的旋转式摇床上液态培养3-10d，制得液体种子培养液；（3）以无菌水将固态发酵培养基含水量调整至30%-45%；接种5%-10%上述液体种子培养液，混匀；发酵条件为先30-37℃培养3-7d，后转入25-30℃培养10-30d；（4）发酵结束，收集发酵产物，50-80℃烘6-24h至水分小于10%，即得降...

【专利技术属性】
技术研发人员：林风，吴丽云，李志强，刘颖，
申请(专利权)人：福建省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35