一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法技术

本发明专利技术提供一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法，以α‑二羰基化合物作为靶标物质，检测出含有所述靶标物质的蜂蜜样品即为高果糖浆掺假蜂蜜；具有指示作用的α‑二羰基化合物包括：1,2‑二酮‑戊糖、2,3二酮‑戊糖、3‑脱氧‑1,2‑二酮‑戊糖、1‑脱氧‑2,3‑二酮‑戊糖中的一种或多种。本发明专利技术提出的方法，通过检测筛选的4种α‑二羰基化合物作为鉴别多类型高果糖浆掺假鉴别的靶标化合物。该方法简单有效，一次分析，可以覆盖目前主要高果糖浆掺假蜂蜜。

【技术实现步骤摘要】
一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法
本专利技术属于检测
，具体涉及一种对掺高果糖浆的蜂蜜的检测方法。
技术介绍
蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质。由于蜂蜜具有重要的营养价值和保健作用，长期以来深受人们的喜爱。蜂蜜是极易掺假的食品。由于利益驱动，近年来有些个体户及厂家，向蜂蜜中掺入糖、转化糖、果糖、葡萄糖、葡糖高果糖浆、果葡糖等，制造掺假蜂蜜，有些生产厂家甚至以葡萄糖、果葡高果糖浆、蜂蜜香精等替代原料制造蜂蜜,以天然蜂蜜的形式投放市场，坑骗消费者以获取暴利，损坏了我国天然蜂蜜的产品信誉。特别是近些年出现一种新型的掺假，以大米高果糖浆、甜菜高果糖浆掺假，因为其与蜂蜜的C同位素接近，结合比较先进的制造工艺去除了一些多糖，目前常规检测方法，如蜂蜜中高果糖淀粉高果糖浆测定方法-薄层色谱法与离子色谱法，以及碳-4植物糖含量测定方法-稳定碳同位比例法等鉴别蜂蜜真伪的方法无法辨别其真假。同时因为多种方法存在，企业检测原料，往往要进行多种方法同时检测，极大增加了企业成本，不利于行业健康发展。因此，急需建立一种能够同时测定多种高果糖浆掺假蜂蜜的鉴别方法。近几年，陆续有文章和一些实验室方法进行了同时多种高果糖浆鉴别方法的尝试，但是因为没有明确的靶标，或是标准物质作为支持，导致方法科学性差，误判率高。
技术实现思路
针对现有技术的不足之处，本专利技术要解决的技术问题是提供一种可以同时识别多种类型高果糖浆掺假蜂蜜的方法。实现本专利技术上述目的的技术方案为：一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法，以α-二羰基化合物作为靶标物质，检测出含有所述靶标物质的蜂蜜样品即为高果糖浆掺假蜂蜜；具有指示作用的α-二羰基化合物包括：1,2-二酮-戊糖、2,3二酮-戊糖、3-脱氧-1,2-二酮-戊糖、1-脱氧-2,3-二酮-戊糖中的一种或多种。进一步地，进行检测的方法为液相色谱荧光检测法、高效液相色谱飞行时间质谱法和液相色谱串联质谱法中的一种或二种。优选地，使用邻苯二胺、5,6-二氨基-2,4-二羟基嘧啶、2,4,5-三氨基-6-羟基嘧啶中的一种作为衍生剂。其中，衍生条件为，取蜂蜜样品1～20g，在pH值3.0～9.0条件下，加入过量衍生剂，反应温度从10℃到130℃之间，反应30min～24h。其中，用于定量所述α-二羰基化合物的标准品的制备方法为：取摩尔比例1：1：2：(0.5～2)的核糖、葡萄糖、衍生剂，在pH为3.0～9.0的缓冲溶液中，优选pH范围为4.0～5.0；在100～150℃下反应50～80min，反应后置于冰水中冷却。本方法中，结合方法的检出限，设定阳性的阈值如下：当样品中任意检出这4种α-二羰基化合物任意一种或多种，且只要4种化合物中任意一种的含量超过如下规定：1,2-二酮-戊糖、2,3-二酮-戊糖含量≥50μg/kg、3-脱氧-1,2-二酮-戊糖、1-脱氧-2,3-二酮-戊糖含量≥20μg/kg时，即可判定该样品为高果糖浆掺假(大于20％的添加)。本专利技术一种优选技术方案为，所述的方法包括步骤：1)衍生：蜂蜜样品在pH＝3.0～9.0的缓冲溶液中，优选pH范围为4～5；加入质量浓度为0.1～5％衍生剂溶液，在常温、避光条件下，反应10～20h，蜂蜜样品和衍生剂溶液的比例为1～3g：1mL；2)纯化：反应溶液经反相柱净化，用水清洗，再用流动相洗脱后，用水定容，用滤膜过滤，3)色谱检测：使用液相色谱荧光或质谱法检测。其中，步骤2)所述反相色谱柱为C18，C8，苯基填充柱中的一种；流动相为乙腈水溶液或甲醇水溶液，流速为0.2～1.0mL/min。其中，步骤3)所述液相色谱荧光检测中，荧光检测器的激发波长为270～370nm，发射波长为420～520nm。其中，步骤3)所述质谱法为电喷雾质谱法，雾化气温度为250～350℃，雾化气流速为6～12L/min，雾化气压力为30～50psi，鞘气温度为260～350℃，鞘气流速为6-12L/min，电离电压为4000kv，碎片电压为60～175,扫描方式为正离子模式，全扫描以及多反应监测模式。监测离子为上述的三种不同衍生剂的衍生化反应产物。全扫描方式时，监测该类化合物的准分子离子以及其特征的碎片，失去一分子或二分子H2O，失去CH2O、CH2CO和CHOH＝CHOH。使用多反应监测模式时，使用准分子离子M+H，以及M+H-18,M+H-36,M+H-30作为监测离子对进行定量检测。本专利技术的技术方案具有如下优点：本专利技术通过对高果糖浆加入蜂蜜的加工工艺的研究，确定不同的原料和加工方式导致α-二羰基化合物种类和含量不同，因此以α-二羰基化合物作为靶标物质，确定了可以同时识别多类型高果糖浆掺假蜂蜜的方法。本专利技术提出的方法，通过检测筛选的4种α-二羰基化合物作为鉴别多类型高果糖浆掺假鉴别的靶标化合物。该方法简单有效，一次分析，可以覆盖目前主要高果糖浆掺假蜂蜜。针对α-二羰基化合物分子量小，易溶于水，无法直接制备该类化合物纯品的问题，本专利技术采用在戊糖和半光氨酸的美拉德反应体系中溶液生成α-二羰基化合物，该化合物易与邻苯二胺，5,6-二氨基-2,4-二羟基嘧啶和2,4,5-三氨基-6-羟基嘧啶反应可以生成稳定的喹喔啉和喋啶衍生物。本专利技术方法制备的标准品可以准确定量高果糖浆和蜂蜜样品中的4种α-二羰基化合物，为科学鉴别高果糖浆掺假蜂蜜提供了有效的科学依据。附图说明图1高果糖浆和蜂蜜中1,2-二酮-戊糖、2,3-二酮-戊糖的质谱TIC图。图2高果糖浆和蜂蜜中3-脱氧-1,2-二酮-戊糖和1-脱氧-2,3-二酮-戊糖的质谱TIC图。图3荧光色谱检测高果糖浆和蜂蜜中的4种特征物色谱图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例中，若无特别说明，所使用的方法均为本领域常规的方法。实施例11、实验样品常见的高果糖浆样品其中大米高果糖浆样品11个，编号DM1-DM11；玉米高果糖浆样品23个，编号YM1-YM23；甜菜高果糖浆样品9个，编号TC1-TC9；蔗糖高果糖浆14个，编号ZT1-ZT14；木薯高果糖浆6个。2、实验用真实蜂蜜样品：油菜蜂蜜32个，编号YC1-YC32；洋槐蜂蜜33个，编号YH1-YH33；枣花蜂蜜15个，编号ZH1-ZH15；椴树蜂蜜12个，编号DS1-DS12；荆条蜂蜜30个，编号JT1-JT30；荔枝蜂蜜5个，编号LZ1-LZ5；龙眼蜂蜜3个，编号LY1-LY3；荞麦蜂蜜4个，编号QM1-QM4；向日葵蜂蜜5个，编号XRK1-XRK5；麦卢卡蜂蜜7个，编号MNK1-MNK7；三叶草蜂蜜4个，编号SYC1-SYC3；多花种混合蜂蜜32个，编号DHZ1-DHZ32；中蜂蜜13个，编号ZF1-ZF13。3、样品提取与衍生(实施例1、3、4三种衍生剂试验中，衍生剂浓度为质量浓度)：称取高果糖浆或蜂蜜样品2g，用pH＝5.0的磷酸盐缓冲溶液2mL溶解，加入1mL的1％邻苯二胺水溶液，常温避光反应24h；4、样品净化：①衍生完的样品，经微孔滤膜过滤后直接测定(这是开始发现差异的实验)；②衍生后的样液分批经过OASISHLB(6ml，200mg，使用前，用5ml甲醇和10ml水活化)柱净化，样液流完后，用3mL水清洗，使用3ml乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法，其特征在于，以α‑二羰基化合物作为靶标物质，检测出含有所述靶标物质的蜂蜜样品即为高果糖浆掺假蜂蜜；具有指示作用的α‑二羰基化合物包括：1,2‑二酮‑戊糖、2,3二酮‑戊糖、3‑脱氧‑1,2‑二酮‑戊糖、1‑脱氧‑2,3‑二酮‑戊糖中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法，其特征在于，以α-二羰基化合物作为靶标物质，检测出含有所述靶标物质的蜂蜜样品即为高果糖浆掺假蜂蜜；具有指示作用的α-二羰基化合物包括：1,2-二酮-戊糖、2,3二酮-戊糖、3-脱氧-1,2-二酮-戊糖、1-脱氧-2,3-二酮-戊糖中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行检测的方法为液相色谱荧光检测法、高效液相色谱飞行时间质谱法和液相色谱串联质谱法中的一种或二种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用邻苯二胺、5,6-二氨基-2,4-二羟基嘧啶、2,4,5-三氨基-6-羟基嘧啶的一种作为衍生剂。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，衍生条件为，取蜂蜜样品1～20g，在pH值3.0～9.0条件下，加入过量衍生剂，反应温度从10℃到130℃之间，反应30min～24h。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用于定量所述α-二羰基化合物的标准品的制备方法为：取摩尔比例1：1：2：(0.5～2)的核糖、葡萄糖、衍生剂，在pH为3.0～9.0的缓冲溶液中，优选pH范围为4.0～5.0；在100～150℃下反应50～80min，反应后置于冰水中冷却。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，设定阳性的阈值如下：当样品中任意检出这4种α-二羰基化合物任意一种或多种，且只要4种化合物中任意一种的含量超过如下规定：1,2...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛晓锋，孙明辉，吴黎明，王凯，赵玲玲，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11