好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法技术

本公开提供了一种好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法，属于微生物发酵技术领域，能够同时生产得到高含量的复合酶和维生素B12。所述方法采用好食脉孢菌进行发酵，包括一级种子培养、二级种子培养、发酵生产等步骤，并在发酵过程中补加营养液。本公开所述方法生产的复合酶可作为饲料复合酶，提高饲料利用率。该方法用于同时生产饲料复合酶和维生素B12。

【技术实现步骤摘要】
好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法
本专利技术涉及微生物发酵
，尤其涉及一种好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法。
技术介绍
随着我国经济的快速发展，人民的生活水平不断提高。对食品的需要量日渐增加，促进了畜牧水产养殖业的迅速发展。然而随着人口增加和耕地面积的不断减少，出现了人畜争粮的现象，导致饲料价格居高不下，因此提供酶制剂提高畜禽饲料的利用率一直是动物营养科学的研究目标之一。解决方法之一便是添加外源酶和消除抗营养因子，如纤维素、半纤维素等就是饲料中的抗营养因子。另外，在饲料中添加蛋白酶(外源性消化酶)有利于提高饲料中蛋白质的可消化性。因此，在饲料中添加适量的与饲料日粮相匹配的复合酶制剂能明显提高饲料利用率。通常，合适的复合酶制剂包括纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶等。其中，目前对纤维素酶产生菌的研究多集中于木酶、曲霉和青霉等真菌，但这类菌有β-葡萄糖苷酶产量和酶活偏低、对葡萄糖的耐受性较差等缺点。此外，维生素B12(VB12)又叫钴胺素，是唯一的一种需要肠道分泌物(内源因子)帮助才能被吸收的维生素，具有广泛的生理作用，可参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血；防止大脑神经受到破坏。目前，对VB12产生菌的研究多集中于放线菌、丙酸菌、诺卡式菌、棒状菌、芽孢杆菌、乙酸杆菌以及丁酸杆菌等。但目前的发酵方法由于发酵周期长、菌体量和产物积累量不一致等原因，导致VB12的生物发酵法生产成本过高。因此，通过微生物发酵生产饲料复合酶制剂，并且进一步地，通过合适的培养条件提高复合酶的酶活，甚至同时联产维生素B12、改善VB12生产成本高的问题，具有很好的市场前景。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法，可同时得到高酶活且配比较为均衡的纤维素酶、木聚糖酶、中温淀粉酶、蛋白酶，并且还能够得到高含量的维生素B12。本专利技术提供一种好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法，其中，所述复合酶包括纤维素酶、木聚糖酶、中温淀粉酶、蛋白酶；所述方法包括以下步骤：1)选取菌种所述好食脉孢菌的保藏编号为CICC12001；2)一级种子培养将菌种转移到一级种子罐中，在一级种子罐中培养20～24h，其中，温度28～30℃，风量1:0.6～1：0.8，罐压0.03～0.05Mpa；一级种子培养基为：甜菜糖100g/L、玉米蛋白粉25g/L、玉米浆25g/L、KCl2g/L、硫酸铵10g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾12g/L、氯化钙1g/L；121-123℃温度下灭菌处理25min；3)二级种子培养在二级种子罐中培养6～8h，其中温度28～30℃,风量1：0.6～1：0.8，罐压0.03～0.05Mpa；二级种子培养基为：甜菜糖100g/L、玉米蛋白粉25g/L、玉米浆25g/L、KCl2g/L、硫酸铵10g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾12g/L、氯化钙1g/L；；121-123℃温度下灭菌处理25min；4)接种将二级种子培养后的菌种用无菌水制成含量为107个/mL的孢子悬液，接种到灭菌的发酵培养基中；5)发酵生产在温度28～30℃、罐压0.02～0.05Mpa、风量1：0.6～1：0.8、溶氧≧30％、pH4.8～5.0的条件下发酵180～210小时，其中，在发酵过程中通过添加氨水调控pH，在发酵过程中添加营养液A或营养液B，营养液A的成分及重量百分比为槐糖40～50g/L、甜菜碱15～28g/L、玉米浆1.1～2.0g/L；营养液B的成分及重量百分比为纤维二糖10～15g/L、反玉米素0.1～0.5g/L、甜菜碱12～21g/L、玉米浆1.5～2.5g/L、栀子苷0.12～0.36g/L、碳酸氢钠0.01～0.03g/L、氧化镁0.01～0.03g/L；发酵培养基的组成为：甜菜糖50g/L、玉米蛋白粉25g/L、KCl1g/L、硫酸铵5g/L、硫酸镁1g/L、磷酸氢二钾6g/L、玉米浆25g/L、氯化钙0.5g/L、硫酸亚铁0.17g/L、氯化钴0.015g/L、硫酸锰0.02g/L；121-123℃温度下灭菌处理25min。本专利技术提供了一种好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法，采用好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12，通过一种菌种的发酵，同时产复合酶和维生素B12。与常规现有技术相比，在本专利技术所述方法中，酶产物中纤维素酶、木聚糖酶、中温淀粉酶、蛋白酶的酶活配比适宜，构成的复合酶可用作饲料复合酶制剂，提高饲料利用率。并且，还具有较高的VB12含量，发酵液在将复合酶提取分离后既可直接作为VB12原料源用作饲料添加剂、也可用于进一步提取分离VB12，降低了发酵生产VB12的成本。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例提供一种好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法，其中，所述复合酶包括纤维素酶、木聚糖酶、中温淀粉酶、蛋白酶；所述方法包括以下步骤：1)选取菌种所述好食脉孢菌的保藏编号为CICC12001；2)一级种子培养将菌种转移到一级种子罐中，在一级种子罐中培养20～24h，其中，温度28～30℃，风量1:0.6～1：0.8，罐压0.03～0.05Mpa；一级种子培养基为：甜菜糖100g/L、玉米蛋白粉25g/L、玉米浆25g/L、KCl2g/L、硫酸铵10g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾12g/L、氯化钙1g/L；121-123℃温度下灭菌处理25min；3)二级种子培养在二级种子罐中培养6～8h，其中温度28～30℃,风量1：0.6～1：0.8，罐压0.03～0.05Mpa；二级种子培养基为：甜菜糖100g/L、玉米蛋白粉25g/L、玉米浆25g/L、KCl2g/L、硫酸铵10g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾12g/L、氯化钙1g/L；121-123℃温度下灭菌处理25min；4)接种将二级种子培养后的菌种用无菌水制成含量为107个/mL的孢子悬液，接种到发酵罐中已灭菌的发酵培养基中；5)发酵生产在温度28～30℃、罐压0.02～0.05Mpa、风量1：0.6～1：0.8、溶氧≧30％、pH4.8～5.0的条件下发酵180～210小时，其中，在发酵过程中通过添加氨水调控pH，在发酵过程中添加营养液A或营养液B，营养液A的成分及重量百分比为槐糖40～50g/L、甜菜碱15～28g/L、玉米浆1.1～2.0g/L；营养液B的成分及重量百分比为纤维二糖10～15g/L、反玉米素0.1～0.5g/L、甜菜碱12～21g/L、玉米浆1.5～2.5g/L、栀子苷0.12～0.36g/L、碳酸氢钠0.01～0.03g/L、氧化镁0.01～0.03g/L；发酵培养基为：甜菜糖50g/L、玉米蛋白粉25g/L、KCl1g/L、硫酸铵5g/L、硫酸镁1g/L、磷酸氢二钾6g/L、玉米浆25g/L、氯化钙0.5g/L、硫酸亚铁0.17g/L、氯化钴0.015g/L、硫酸锰0.02g/L；121-123℃温度下灭菌处理25min。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法，其特征在于，所述复合酶包括纤维素酶、木聚糖酶、中温淀粉酶、蛋白酶；所述方法包括以下步骤：1)选取菌种所述好食脉孢菌的保藏编号为CICC12001；2)一级种子培养将菌种转移到一级种子罐中，在一级种子罐中培养20～24h，其中，温度28～30℃，风量1:0.6～1：0.8，罐压0.03～0.05Mpa；一级种子培养基的组成为：甜菜糖100g/L、玉米蛋白粉25g/L、玉米浆25g/L、KCl 2g/L、硫酸铵10g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾12g/L、氯化钙1g/L；121‑123℃温度下灭菌处理25min；3)二级种子培养在二级种子罐中培养6～8h，其中温度28～30℃，风量1：0.6～1：0.8，罐压0.03～0.05Mpa；二级种子培养基为：甜菜糖100g/L、玉米蛋白粉25g/L、玉米浆25g/L、KCl 2g/L、硫酸铵10g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾12g/L、氯化钙1g/L；121‑123℃温度下灭菌处理25min；4)接种将二级种子培养后的菌种用无菌水制成含量为107个/mL的孢子悬液，接种到发酵罐中的发酵培养基中；5)发酵生产在温度28～30℃、罐压0.02～0.05Mpa、风量1：0.6～1：0.8、溶氧≧30％、pH4.8～5.0的条件下发酵180～210小时，其中，在发酵过程中通过添加氨水调控pH，在发酵过程中添加营养液A或营养液B，营养液A的成分及组成为槐糖40～50g/L、甜菜碱15～28g/L、玉米浆1.1～2.0g/L；营养液B的成分及组成为纤维二糖10～15g/L、反玉米素0.1～0.5g/L、甜菜碱12～21g/L、玉米浆1.5～2.5g/L、栀子苷0.12～0.36g/L、碳酸氢钠0.01～0.03g/L、氧化镁0.01～0.03g/L；发酵培养基的组成为：甜菜糖50g/L、玉米蛋白粉25g/L、KCl 1g/L、硫酸铵5g/L、硫酸镁1g/L、磷酸氢二钾6g/L、玉米浆25g/L、氯化钙0.5g/L、硫酸亚铁0.17g/L、氯化钴0.015g/L、硫酸锰0.02g/L；121‑123℃温度下灭菌处理25min。...

【技术特征摘要】
1.一种好食脉孢菌生产复合酶并联产维生素B12的发酵方法，其特征在于，所述复合酶包括纤维素酶、木聚糖酶、中温淀粉酶、蛋白酶；所述方法包括以下步骤：1)选取菌种所述好食脉孢菌的保藏编号为CICC12001；2)一级种子培养将菌种转移到一级种子罐中，在一级种子罐中培养20～24h，其中，温度28～30℃，风量1:0.6～1：0.8，罐压0.03～0.05Mpa；一级种子培养基的组成为：甜菜糖100g/L、玉米蛋白粉25g/L、玉米浆25g/L、KCl2g/L、硫酸铵10g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾12g/L、氯化钙1g/L；121-123℃温度下灭菌处理25min；3)二级种子培养在二级种子罐中培养6～8h，其中温度28～30℃，风量1：0.6～1：0.8，罐压0.03～0.05Mpa；二级种子培养基为：甜菜糖100g/L、玉米蛋白粉25g/L、玉米浆25g/L、KCl2g/L、硫酸铵10g/L、硫酸镁2g/L、磷酸氢二钾12g/L、氯化钙1g/L；121-123℃温度下灭菌处理25min；4)接种将二级种子培养后的菌种用无菌水制成含量为107个/mL的孢子悬液，接种到发酵罐中的发酵培养基中；5)发酵生产在温度28～30℃、罐压0.02～0.05Mpa、风量1：0.6～1：0.8、溶氧≧30％、pH4.8～5.0的条件下发酵180～210小时，其中，在发酵过程中通过添加氨水调控pH，在发酵过程中添加营养液A或营养液B，营养液A的成分及组成为槐糖40～50g/L、甜菜碱15～28g/L、玉米浆1.1～2.0g/L；营养液B的成分及组成为纤维二糖10～15g/L、反玉米素0.1～0.5g/L、甜菜碱12～21g/L、玉米浆1.5～2.5g/L、栀子苷0.12～0.36g/L、碳酸氢钠0.01～0.03g/L、氧化镁0.01～0.03g/L；发酵培养基的组成为：甜菜糖50g/L、玉米蛋白粉25g/L、KCl1g/L、硫酸铵5g/L、硫酸镁1g/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洪兵，李勇其，周玉明，周秋华，宋毅，
申请(专利权)人：湖南鸿鹰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43