一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法技术

本发明专利技术公开了一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法，其特征在于：所述检验方法的步骤如下：A采样液；B培养；C试验。通过上述试验中的多项检测来判定绿脓杆菌是否存在，来判别捐赠纺织物是否符合捐赠要求。

A test method for Pseudomonas aeruginosa in donated textiles

The invention discloses a method for the examination of Pseudomonas aeruginosa in textiles, which is characterized in that the steps of the test method are as follows: A sampling liquid; B culture; C test. The presence of Pseudomonas aeruginosa was determined by a number of tests in the above tests to determine whether donated textiles meet the donor requirements.

【技术实现步骤摘要】
一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法
本专利技术涉及生物检验领域，尤其涉及一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法。
技术介绍
绿脓杆菌，又称铜绿假单胞菌(学名Pseudomonasaeruginos)，是一种革兰氏阴性菌、好氧、呈长棒形的细菌，只有单向的运动性。绿脓肝菌是一种条件致病菌，对外界环境适应能力很强，在潮湿环境下可长期存活。人正常皮肤尤其是潮湿部位(如腋下、会阴部、耳道、呼吸道和肠道等处)均有绿脓肝菌的存在，而完整的皮肤和粘膜作为屏障能够有效的抵御绿脓肝菌的入侵，但人体的正常防御机制下降或受到损伤(如皮肤粘膜损伤、粒细胞缺乏、低蛋白血症、肿瘤的放化疗、长期应用激素和抗生素、烧伤、婴幼儿皮肤、脐带、肠道，老年人泌尿系统)则容易引发绿脓肝菌感染。绿脓杆菌是一种令免疫受损的机会性感染病原，一般影响肺部及泌尿道，或造成烧伤、伤口及其他血液感染，如败血病。虽然很不常有，但绿脓杆菌亦会造成肺炎。在很多肺炎研究中指出，绿脓杆菌是其中一种需要隔绝的细菌。绿脓菌素就是这种细菌的致病因子，且在氧化应激下能使秀丽隐杆线虫死亡，但是有研究指水杨酸能抑制绿脓菌素的生成。10％在医院感染的病症都是由绿脓杆菌所引致的。囊肿性纤维化病人的肺部是最先感染绿脓杆菌的一群。在缺乏适当处理食水质素下，它亦是引致皮肤炎的其中一种细菌。它也是造成烧伤感染最普遍的细菌。据报道绿脓杆菌引起的院内感染占10％～31.5％，居病原菌之首，国内外烧伤中心对细菌感染的临床调查中发现绿脓杆菌感染占50％以上。基于以上致病性，绿脓杆菌是疾病诊断中必检微生物之一。在捐赠纺织物中的检验测试是必须的。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供了一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法，其特征在于：所述检验方法的步骤如下：A采样液；B培养：取样液1mL,加入到9mLSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃士2℃培养18-24h；待SCDLP培养液表面呈现一层薄菌膜，从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置35℃士2℃培养18-24h，观察菌落特征；C试验：1)氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1％二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性；不变色者为阴性；2)绿脓菌素试验：取2-3个菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃士2℃培养24h,加入三氯甲烷3-5mL，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL，振荡后静置片刻，如上层出现粉红色或紫红色即为阳性；3)硝酸盐还原产气试验:挑取被检菌落接种在硝酸盐胨水培养基中，置35℃士2℃培养24h，培养基小倒管中有气者即为阳性；4)明胶液化试验:取菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35℃士2℃培养24h，取出放于4-10℃，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性；5)42℃生长试验：取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42℃培养24-48h，有绿脓杆菌生长为阳性；步骤C的试验结果中氧化酶及绿脓菌素试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出绿脓杆菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出绿脓杆菌。SCDLP液体培养基成分和制法如下：制法:将各种成分混合，分装，121℃灭菌20min，摇匀，避免吐温80沉于底部，冷至25℃后使用，加热溶解，调pH至7.2。十六烷三甲基溴化铵培养液成分和制法如下：制法:上述各成分混合加热溶解，调pH至7.4-7.6，然后加入琼脂，115℃灭菌20min，冷至55℃左右，倾注平皿。绿脓菌素测定用培养基斜面成分和制法如下：制法:将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4,加入琼脂和甘油，加热溶解，分装试管，115℃灭菌20min，制成斜面备用。明胶培养基成分和制法如下:制法：各成分加入蒸馏水中浸泡20min，加热搅拌溶解，调pH至7.4，5mL分装于试管中，115℃灭菌20min，直立制成高层备用。硝酸盐蛋白胨水培养基成分和制法如下：制法:将蛋白胨与酵母浸膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.2，煮沸过滤后补足液量，加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解均匀，分装到加有小倒管的试管中，115℃灭菌20min备用。其中，下表为捐赠纺织品的微生物要求：由上述对本专利技术结构的描述可知，和现有技术相比，本专利技术具有如下优点：本专利技术为一套针对微生物中绿脓杆菌为主的检验方法，对细菌菌落总数、真菌菌落总数、致病性化脓菌、大肠菌群检验结果符合上表要求的，判定该项批产品合格，否则为不合格。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法，其特征在于：所述检验方法的步骤如下：A采样液；B培养：取样液1mL,加入到9mLSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃士2℃培养18-24h；待SCDLP培养液表面呈现一层薄菌膜，从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置35℃士2℃培养18-24h，观察菌落特征；其中：SCDLP液体培养基成分和制法如下：制法:将各种成分混合，分装，121℃灭菌20min，摇匀，避免吐温80沉于底部，冷至25℃后使用，加热溶解，调pH至7.2。十六烷三甲基溴化铵培养液成分和制法如下：制法:上述各成分混合加热溶解，调pH至7.4-7.6，然后加入琼脂，115℃灭菌20min，冷至55℃左右，倾注平皿。C试验：1)氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1％二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性；不变色者为阴性；2)绿脓菌素试验：取2-3个菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃士2℃培养24h,加入三氯甲烷3-5mL，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL，振荡后静置片刻，如上层出现粉红色或紫红色即为阳性；其中：绿脓菌素测定用培养基斜面成分和制法如下：制法:将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4,加入琼脂和甘油，加热溶解，分装试管，115℃灭菌20min，制成斜面备用。3)硝酸盐还原产气试验:挑取被检菌落接种在硝酸盐胨水培养基中，置35℃士2℃培养24h，培养基小倒管中有气者即为阳性；其中：硝酸盐胨水培养基成分和制法如下：制法:将蛋白胨与酵母浸膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.2，煮沸过滤后补足液量，加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解均匀，分装到加有小倒管的试管中，115℃灭菌20min备用。4)明胶液化试验:取菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35℃士2℃培养24h，取出放于4-10℃，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性；其中：明胶培养基成分和制法如下:制法：各成分加入蒸馏水中浸泡20mi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法，其特征在于：所述检验方法的步骤如下：A采样液；B培养：取样液1mL,加入到9mL SCDLP培养液中，充分混匀，置35℃士2℃培养18‑24h；待SCDLP培养液表面呈现一层薄菌膜，从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置35℃士2℃培养18‑24h，观察菌落特征；C试验：1)氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1％二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性；不变色者为阴性；2)绿脓菌素试验：取2‑3个菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃士2℃培养24h,加入三氯甲烷3‑5mL，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL，振荡后静置片刻，如上层出现粉红色或紫红色即为阳性；3)硝酸盐还原产气试验:挑取被检菌落接种在硝酸盐胨水培养基中，置35℃士2℃培养24h，培养基小倒管中有气者即为阳性；4)明胶液化试验:取菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35℃士2℃培养24h，取出放于4‑10℃，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性；5)42℃生长试验：取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42℃培养24‑48h，有绿脓杆菌生长为阳性。...

【技术特征摘要】
1.一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法，其特征在于：所述检验方法的步骤如下：A采样液；B培养：取样液1mL,加入到9mLSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃士2℃培养18-24h；待SCDLP培养液表面呈现一层薄菌膜，从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置35℃士2℃培养18-24h，观察菌落特征；C试验：1)氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1％二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性；不变色者为阴性；2)绿脓菌素试验：取2-3个菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃士2℃培养24h,加入三氯甲烷3-5mL，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL，振荡后静置片刻，如上层出现粉红色或紫红色即为阳性；3)硝酸盐还原产气试验:挑取被检菌落接种在硝酸盐胨水培养基中，置35℃士2℃培养24h，培养基小倒管中有气者即为阳性；4)明胶液化试验:取菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35℃士2℃培养24h，取出放于4-10℃，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性；5)42℃生长试验：取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42℃培养24-48h，有绿脓杆菌生长为阳性。2.根据权利要求1所述的一种捐赠纺织品中绿脓杆菌的检验方法，其特征在于：步骤C的试验结果中氧化酶及绿脓菌素试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出绿脓...

【专利技术属性】
技术研发人员：佟桁，黄仲丽，王婷，李瑞然，
申请(专利权)人：河南省纺织产品质量监督检验院，
类型：发明
国别省市：河南,41