新佐剂和包含所述新佐剂的疫苗组合物制造技术

本发明专利技术涉及可用于疫苗制备的具有佐剂特性的某些多酚。此外，本发明专利技术提供了包含所述多酚和递送系统(例如免疫刺激性重构流感病毒微体(IRIV))的佐剂系统。本发明专利技术举例说明了所述多酚或包含这样的多酚和IRIV的佐剂系统可提供与常规疫苗系统相比更好水平的针对目的抗原的免疫应答。根据本发明专利技术的优选多酚可以是β‑谷固醇。β‑谷固醇可任选地与已知佐剂组合以增强免疫应答。

New adjuvants and vaccine compositions containing the new adjuvants

The invention relates to certain polyphenols with adjuvant characteristics which can be used for vaccine preparation. In addition, the invention provides an adjuvant system comprising the polyphenols and delivery systems, such as immunomodulatory reconstitution of influenza virus microbodies (IRIV). The present invention illustrates that the polyphenols or the adjuvant system containing such polyphenols and IRIV can provide a better immune response to the target antigen compared to the conventional vaccine system. According to the invention, the preferred polyphenol can be beta valenol. Beta cerosterol can be optionally combined with known adjuvants to enhance immune response.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新佐剂和包含所述新佐剂的疫苗组合物
本专利技术涉及可用于疫苗制备的具有佐剂特性的某些多酚。此外，本专利技术提供了包含所述多酚和递送系统(例如免疫刺激性重构流感病毒微体(immunostimulatingreconstitutedinfluenzavirosome，IRIV))的佐剂系统。本专利技术举例说明了所述多酚或包含这样的多酚和IRIV的佐剂系统可提供与常规疫苗系统相比更好水平的针对目的抗原的免疫应答。根据本专利技术的优选多酚可以是β-谷固醇。β-谷固醇可任选地与已知佐剂组合以增强免疫应答。
技术介绍
目前正在研究的大多数疫苗抗原由病原体的高度纯化的重组分子或亚单位构成，因此它们缺少病原体的数个特征，包括固有的免疫刺激特性，并因此通常不引起强烈的免疫应答。尽管对大量佐剂进行了评估，但是基于铝的矿物盐(明矾(alum))仍然是用于人疫苗的使用最多的经批准佐剂。明矾具有良好的安全性过往记录，并被认为是用于针对可通过抗体应答预防之感染的疫苗接种的首选佐剂，并因此已被广泛地且成功地用于许多经许可疫苗中。然而，明矾的一些限制也是公知的。明矾无法使对小尺寸肽以及某些疫苗(例如伤寒和流感疫苗)的抗体应答充分提高。值得注意的是，已知明矾对于诱导对抗数种危及生命之感染所需的细胞毒性T细胞免疫和T辅助性1(Th1)应答是差的佐剂(Vaccine28(2010)2363-2366)。因此，迫切需要开发新的佐剂，以支持针对迄今为止用传统疫苗接种策略难以治疗的病原体的疫苗的开发，并克服可用的经许可佐剂的局限性。尽管许多努力已集中在开发新佐剂，包括矿物盐、脱毒毒素、脂肽、乳剂、细胞因子、多糖、核酸等，但是目前很少经批准用于人用。新佐剂开发中的主要缺点与不期望的副作用(其可以是局部的或全身性的)、难以制造、稳定性差和高生产成本相关。佐剂基于其主要作用机制可分为两类：免疫增强剂和递送系统。免疫增强剂直接地(例如，细胞因子)或者通过模式识别受体(patternrecognitionreceptor，PRR)(例如，细菌组分)激活固有免疫，而递送系统(例如，微粒和纳米粒)以重复模式浓缩抗原并展示抗原、将疫苗抗原靶向抗原呈递细胞(antigenpresentingcell，APC)并帮助抗原和免疫增强剂共定位。因此，免疫增强剂和递送系统二者均可用于增强体内抗原特异性免疫应答。第一种佐剂活性在1926年用吸收至明矾的白喉类毒素凭经验发现。从那以后，尽管经过了几十年的研究，但在主要市场中只有少数佐剂已被许可用于人。迄今为止发现的大多数佐剂虽然被评价为比明矾更强效，但由于其局部或全身性毒性而被认为不适合用于人用。因此，佐剂研究中的主要挑战之一是提高效力，同时使毒性最小化。实现这一目标的难度反映在这样的事实：尽管最初在80多年前发现，但是明矾仍然是当今使用的主要人佐剂。在此，本专利技术提供了可用于疫苗制备的具有佐剂特性的选择的多酚。这些多酚优选为植物固醇。本专利技术提供了作为用于制备针对靶抗原之疫苗的佐剂的选择的多酚，优选β-谷固醇。“越来越多的证据表明，选择维生素和多酚的类黄酮(flavonoid)亚类(统称营养佐剂)具有免疫调节特性。大多数维生素和类黄酮已被用作用于免疫增强的膳食补充剂。在植物油中配制的选择的维生素和类黄酮的组合在与抗原共施用并通过黏膜(鼻内和舌下)和全身性(肌内)途径给予时协同地增强免疫应答。但是，包括已知具有免疫调节特性的类黄酮在内的所有植物固醇不作为佐剂发挥作用。一些类黄酮具有免疫增强特性；在非常相同的类黄酮上进行的另一些体外和体内研究显示免疫抑制作用。每种选择的维生素和类黄酮的膳食补充在组合时可诱导免疫增强或免疫抑制作用”(ExpertOpin.Biol.Ther.(2011)11(11)：1501-1513)。该文件显示了类黄酮关于其免疫抑制或免疫增强特性的不确定性。此外，建议将类黄酮与维生素组合用作营养补充剂。特别地，本专利技术提供了包含靶抗原和单独作为佐剂之植物固醇的新疫苗组合物。与包含靶抗原和明矾或其他常规佐剂的组合物相比，根据本专利技术的此类新的疫苗组合物提供了出人意料地更高的针对靶抗原的免疫应答。此外，本专利技术提供了包含所述多酚和合适递送系统(例如免疫刺激性重构流感病毒微体(IRIV))的新的佐剂系统。苹果多酚提取物(applepolyphenolextract，APE)的一项研究提供了这样的证据：最佳剂量的APE的共施用显著减轻霍乱毒素(CholeraToxin，CT)毒性而不改变天然CT在小鼠模型的黏膜和全身性隔室中诱导Ag特异性体液免疫的黏膜佐剂活性。研究结果表明，APE对CT的佐剂性和毒性的生物学作用是剂量依赖性的(Vaccine27(2009)4808-4817)。此外，建议使用从苹果果实中提取的多酚与霍乱毒素佐剂组合以减轻霍乱毒素的毒性。APE在此处未作为佐剂进行评价。WO2005/117958提供了来自包膜病毒(特别是来自流感病毒)的病毒微体制备物，其包含来自所述病毒的抗原和皂苷佐剂。特别地，该专利技术提供了来自流感病毒的病毒微体制备物，其包含流感抗原QS21，任选地具有固醇。合适的固醇包括β-谷固醇、豆固醇、麦角固醇、麦角钙化醇和优选的胆固醇。这些固醇是本领域中公知的，例如胆固醇作为在动物脂肪中发现的天然存在的固醇公开在MerckIndex，第11版，第341页中。与包含皂苷佐剂的非病毒微体流感制剂相比，所述组合物具有保持病毒微体缔合之皂苷的佐剂作用同时显示出降低的反应原性的优点。该专利申请公开了使用固醇来保持皂苷的佐剂作用，并建议将其与具有佐剂作用的皂苷组合使用。“已知在包括有机和无机可药用载体的多种递送系统中的由选择的维生素和基于植物的多酚的组合构成的营养免疫增强递送系统(NIDS)增强用NIDS进行黏膜和全身性疫苗接种后小鼠模型中的局部和全身性免疫应答二者”(JVaccinesVaccin2012，3：4-74)。再次，建议使用与维生素组合的多酚来增强免疫应答。此处，多酚是以非常一般的术语公开。存在许多通常用作增强免疫的膳食补充剂的多酚。它们中没有哪个作为用于针对靶抗原之疫苗制剂的佐剂进行评价。此处提及和讨论的现有技术建议使用多酚或固醇来维持疫苗组合物中使用的已知佐剂的佐剂特性。其没有提供使用多酚或固醇作为增强免疫应答的唯一佐剂。此处，在本专利技术中，专利技术人发现了作为用于增强针对靶抗原之免疫应答的佐剂的选择的植物固醇，优选β-谷固醇。此外，本专利技术中公开的佐剂在提供较高免疫应答方面不限于少数抗原。其可针对多种抗原提供较高的免疫应答，例如基于肽的抗原、重组抗原、基于病毒样颗粒的抗原、病毒微体形式的抗原等。“许多挑战仍与佐剂开发有关。实际上，任何单一的免疫刺激剂或递送系统都不太可能充分地诱导所有新疫苗所需的广泛且长期的免疫。有效的佐剂系统可能需要一种或更多种免疫刺激剂与载体或递送系统之间的协同作用。此外，通常不可能比较在不同实验室或甚至在同一实验室内分析的佐剂，因为佐剂配制和表征方法未标准化。此外，每种抗原具有不同的固有免疫原性并且与免疫刺激剂和载体不同地相互作用，并且不存在可靠的算法以允许基于抗原的物理化学或免疫学性质来选择最佳佐剂”(TrendsinImmunology，第30卷，第1期，第23至32页)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.免疫原性组合物，其包含：(a)抗原；(b)作为佐剂的β‑谷固醇。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.19 IN 3960/MUM/20151.免疫原性组合物，其包含：(a)抗原；(b)作为佐剂的β-谷固醇。2.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其还包含递送系统或第二佐剂。3.如权利要求2所述的递送系统，其为病毒微体。4.如权利要求3所述的病毒微体，其为免疫刺激性重构流感病毒微体(IRIV)或呼吸道合胞病毒病毒微体。5.如权利要求2所述的佐剂，其中所述第二佐剂选自基于明矾的佐剂、矿物盐佐剂、完全弗氏佐剂(CFA)、不完全弗氏佐剂(IFA)、montanide、MF59和佐剂65、细菌来源的佐剂、亲脂性佐剂、亲水性佐剂或其合适的组合。6.如权利要求5所述的佐剂，其中矿物盐佐剂选自钙、铁和锆的盐或其合适的组合。7.如权利要求5所述的佐剂，其中亲脂性佐剂选自Telormedix、单磷酰基脂质A、吡喃葡糖基脂质佐剂及其合适的组合。8.如权利要求2所述的免疫原性组合物，其包含：(a)β-谷固醇；(b)免疫刺激性重构流感病毒微体或第二佐剂(IRIV)。9.制备如权利要求1或2所述免疫原性组合物的方法，其包括：(a)制备抗原；(b)配制具有抗原的经修饰病毒微体或者制备包含第二佐剂和抗原的混合物；(c)将β-谷固醇添加到具有抗原的经修饰病毒微体或者包含第二佐剂和抗原的混合物中。10.如权利要求9所述的方法，其中所述病毒微体是免疫刺激性重构流感病毒微体(IRIV)。11.如权利要求9所述的方法，其中第二佐剂可选自基于明矾的佐剂、矿物盐佐剂、完全弗氏佐剂(CFA)、不完全弗氏佐剂(IFA)、montanide、MF59和佐剂65、细菌来源的佐剂、亲脂性佐剂、亲水性佐剂或其合适的组合。12.任选地具有一种或更多种可药用载体或赋形剂的包含如权利要求1或2所述免疫原性组合物的药物组合物，其用于诱导针对抗原的免疫应答。13.包含如权利要求1或2所述免疫原性组合物的疫苗，其用于诱导针对抗原的免疫应答。14.刺激有此需要的患者的免疫应答的方法，其包括施用合适剂量的根据权利要求1至13中任一项所述的免疫原性组合物。15.如前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，其中抗原是选自细菌、病毒、寄生物和真菌的感染原。16.如前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，其中抗原是重组抗原或抗原肽或病...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃皮法尼奥·菲舍拉，戈拉夫·古普塔，赖因哈德·格吕克，
申请(专利权)人：卡迪拉保健有限公司，
类型：发明
国别省市：印度,IN