包含κ和λ轻链的抗原结合多肽构建体及其用途制造技术

本文提供了包含至少两个不同异二聚体的多特异性抗原结合多肽构建体，每个异二聚体包含重链和轻链。至少一个异二聚体包含含有λ轻链的Fab区并且至少一个异二聚体包含含有κ轻链的Fab区。形成所述抗原结合多肽构建体的免疫球蛋白重链和轻链中的一个或多个包含促进所述重链和轻链之间的正确配对以形成所需的多特异性抗原结合多肽构建体的氨基酸修饰。所述氨基酸修饰可以位于CH1和/或CL结构域、VH和/或VL结构域或其组合中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含κ和λ轻链的抗原结合多肽构建体及其用途序列表本申请包含序列表，其已经通过电子方式以ASCII格式提交并以引用的方式在此整体并入。所述ASCII拷贝创建于2015年12月1日，命名为0966216，且大小为20.0字节。专利技术背景双特异性抗体能够结合两个不同的表位，并且通常基于两种不同的单特异性亲本抗体的免疫球蛋白重链和轻链来制备。结合两个不同表位或抗原的能力使得双特异性抗体成为治疗应用中具有吸引力的工具，其中一个益处是在治疗疾病时靶向多于一种抗原或表位。然而，高效地产生形式类似于天然存在的抗体的双特异性抗体可能是困难的，因为抗体重链已经进化成以相对混杂的方式结合抗体轻链。由于这种混杂的配对，双特异性抗体的两个不同重链和两个不同轻链的相伴表达自然导致重链-轻链配对的混乱。这种混乱仍然是产生双特异性治疗剂的一个重要挑战，因为均匀配对是良好的可制造性和生物功效的基本要求。已经描述了制备形式类似于天然存在的抗体的双特异性抗体的一些方法。然而，这些方法是针对以下情况而开发和例证：其中用于制备双特异性抗体的亲本抗体都具有κ基因家族的轻链。尽管大多数已知的治疗性抗体(以及因此潜在的亲本抗体)具有κ轻链，但也有一些具有λ轻链。κ和λ轻链在结构和序列上彼此都不同。用于从两个亲本抗体产生形式类似于天然存在的抗体的双特异性抗体的各种方法的综述可见于Klein等人，(2012)mAbs4：6，1-11中。国际专利申请号PCT/EP2011/056388(WO2011/131746)描述了用于产生异二聚体蛋白质的体外方法，其中不对称突变被引入两种单特异性起始蛋白质的CH3区中以驱动在还原条件下温育时两种单特异性IgG4抗体或IgG4样抗体之间的定向“Fab臂”或“半分子”交换。美国专利公开号2009/0182127(NovoNordisk，Inc.)描述了通过修饰轻链-重链对的Fc界面处和CH1:CL界面处的氨基酸残基以降低一对的轻链与另一对的重链相互作用的能力来产生双特异性抗体。国际专利公开号WO2014/081955(Amgen)和WO2014/150973(EliLilly)描述了λ轻链中的可能被修饰以驱动期望的配对特异性的氨基酸残基。这些出版物均未描述可用于从具有κ轻链的一个亲本抗体和具有λ轻链的另一个亲本抗体制备双特异性抗体的互补氨基酸修饰。国际专利公开号WO2012/131555(Glenmark)描述了用TCR(T细胞受体)结构域界面代替抗体的重链和λ轻链之间的界面。专利技术概述本公开提供了包含免疫球蛋白λ轻链和免疫球蛋白κ轻链的多特异性抗原结合多肽。在一个方面，所述抗原结合多肽是包含第一异二聚体和第二异二聚体的构建体。在一个实施方案中，第一异二聚体(H1L1)包含形成特异性结合第一抗原的第一Fab区的第一免疫球蛋白重链多肽序列(H1)和免疫球蛋白λ轻链多肽序列(L1)；并且第二异二聚体(H2L2)包含形成特异性结合第二抗原的第二Fab区的第二免疫球蛋白重链多肽序列(H2)和免疫球蛋白κ轻链多肽序列(L2)。在一些实施方案中，H1不同于H2。在一些实施方案中，H1和H2包含重链可变结构域(VH结构域)和重链恒定结构域1(CH1结构域)。在一个实施方案中，L1包含λ轻链可变(VL-λ)结构域和λ轻链恒定(CL-λ)结构域。在一个实施方案中，L2包含κ轻链可变(VL-κ)结构域和κ轻链恒定(CL-κ)结构域。在一些实施方案中，与相应的野生型H1、H2、L1和L2多肽序列相比，H1、H2、L1和L2中的一个或多个包含氨基酸修饰，其中所述氨基酸修饰促进H1与L1而非L2优先配对，和/或促进H2与L2而非L1优先配对。在一些实施方案中，氨基酸修饰不引入新的半胱氨酸残基。在一个实施方案中，氨基酸修饰不去除天然存在的半胱氨酸残基。在一些实施方案中，当H1、H2、L1和L2在细胞或哺乳动物细胞中共表达时，或当H1、H2、L1和L2在无细胞表达系统中共表达时，或当H1和L1在(第一)细胞中产生并且H2和L2在第二(例如不同的)细胞中产生并且两个细胞的产物通过氧化还原产生方法混合时，或当H1和L1在第一无细胞表达系统中产生并且H2和L2在第二(例如不同的)无细胞表达系统中产生并且两个无细胞表达系统的产物混合时，所述构建体包含促进H1与L1而非L2优先配对和/或促进H2与L2而非L1优先配对的氨基酸修饰。在构建体的一些实施方案中，每个异二聚体包含单一Fab。在本文所述的抗原结合多肽构建体的一些实施方案中：a.H2包含位置143处的氨基酸取代；L2包含位置124处的氨基酸取代；并且i.H1包含位置186或179处的氨基酸取代；且L1包含位置180处的氨基酸取代；ii.H1包含位置186处的氨基酸取代；且L1包含位置133处的氨基酸取代；iii.H1包含位置143处的氨基酸取代；且L1包含位置133处的氨基酸取代；或iv.H1包含位置188处的氨基酸取代；且L1包含位置178处的氨基酸取代；b.H1包含位置143处的氨基酸取代；L1包含位置131处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置186或124和186处的氨基酸取代；且L2包含位置133、或133和160、或124和133、或176和180处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置188处的氨基酸取代；且L2包含位置131处的氨基酸取代；iii.H2包含位置143处的氨基酸取代；且L2包含位置124和133、或124和133和180处的氨基酸取代；c.H1包含位置143处的氨基酸取代；L1包含位置131处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置124和186、或124和179、或188处的氨基酸取代；且L2包含位置176和178、或176和180、或131处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置143和188、或143、或124和143处的氨基酸取代；且L2包含位置124和176和178、或124和178、或124和180、或124和176和180、或124、或124和176处的氨基酸取代；d.H1包含位置179、186、143和/或188处的氨基酸取代；L1包含位置180、133和/或176和178处的氨基酸取代；H2包含位置143处的氨基酸取代；且L2包含位置131和/或124处的氨基酸取代；e.H1包含位置39处的氨基酸取代或不包含促进优先配对的氨基酸取代；L1包含位置38处的氨基酸取代或不包含促进优先配对的氨基酸取代；H2包含位置39处的氨基酸取代；且L2包含位置38处的氨基酸取代；f.H1包含位置143处的氨基酸取代；L1包含位置131处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置188或124和186处的氨基酸取代；且L2包含位置176和178、或176和180、或131处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置143或186处的氨基酸取代；且L2包含位置124和133、或124和133和180处的氨基酸取代；g.H1包含位置188处的氨基酸取代；L1包含位置176和178或178处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置177和188处的氨基酸取代；且L2包含位置176和178处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置186或124或124和179处的氨基酸取代；且L2包含位置176或131和176处的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗原结合多肽构建体，其包含第一异二聚体和第二异二聚体，所述第一异二聚体(H1L1)包含形成特异性结合第一抗原的第一Fab区的第一免疫球蛋白重链多肽序列(H1)和免疫球蛋白λ轻链多肽序列(L1)；并且所述第二异二聚体(H2L2)包含形成特异性结合第二抗原的第二Fab区的第二免疫球蛋白重链多肽序列(H2)和免疫球蛋白κ轻链多肽序列(L2)，其中：H1不同于H2，并且H1和H2各自包含重链可变结构域(VH结构域)和重链恒定结构域1(CH1结构域)；L1包含λ轻链可变(VL‑λ)结构域和λ轻链恒定(CL‑λ)结构域，且L2包含κ轻链可变(VL‑κ)结构域和κ轻链恒定(CL‑κ)结构域；并且与相应的野生型H1、H2、L1和L2多肽序列相比，H1、H2、L1和L2中的一个或多个包含促进H1与L1而非L2优先配对和/或促进H2与L2而非L1优先配对的氨基酸修饰，其中所述氨基酸修饰不去除天然存在的半胱氨酸残基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.08 US 62/239,206;2015.12.01 US 62/261,7691.一种抗原结合多肽构建体，其包含第一异二聚体和第二异二聚体，所述第一异二聚体(H1L1)包含形成特异性结合第一抗原的第一Fab区的第一免疫球蛋白重链多肽序列(H1)和免疫球蛋白λ轻链多肽序列(L1)；并且所述第二异二聚体(H2L2)包含形成特异性结合第二抗原的第二Fab区的第二免疫球蛋白重链多肽序列(H2)和免疫球蛋白κ轻链多肽序列(L2)，其中：H1不同于H2，并且H1和H2各自包含重链可变结构域(VH结构域)和重链恒定结构域1(CH1结构域)；L1包含λ轻链可变(VL-λ)结构域和λ轻链恒定(CL-λ)结构域，且L2包含κ轻链可变(VL-κ)结构域和κ轻链恒定(CL-κ)结构域；并且与相应的野生型H1、H2、L1和L2多肽序列相比，H1、H2、L1和L2中的一个或多个包含促进H1与L1而非L2优先配对和/或促进H2与L2而非L1优先配对的氨基酸修饰，其中所述氨基酸修饰不去除天然存在的半胱氨酸残基。2.根据权利要求1所述的构建体，其中当H1、H2、L1和L2在细胞或哺乳动物细胞中共表达时，或当H1、H2、L1和L2在无细胞表达系统中共表达时，或当H1和L1在细胞中产生且H2和L2在不同的细胞中产生并且两个细胞的产物通过氧化还原产生方法混合时，或当H1和L1在无细胞表达系统中产生且H2和L2在不同的无细胞表达系统中产生并且两个无细胞表达系统的产物混合时，所述氨基酸修饰促进H1与L1而非L2优先配对和/或促进H2与L2而非L1优先配对。3.根据权利要求1或2所述的抗原结合多肽构建体，其中每个异二聚体包含单个Fab。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合多肽构建体，其中：a.H2包含位置143处的氨基酸取代；L2包含位置124处的氨基酸取代；并且i.H1包含位置186或179处的氨基酸取代；且L1包含位置180处的氨基酸取代；ii.H1包含位置186处的氨基酸取代；且L1包含位置133处的氨基酸取代；iii.H1包含位置143处的氨基酸取代；且L1包含位置133处的氨基酸取代；或iv.H1包含位置188处的氨基酸取代；且L1包含位置178处的氨基酸取代；b.H1包含位置143处的氨基酸取代；L1包含位置131处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置186或124_186处的氨基酸取代；且L2包含位置133或133_160或124_133或176_180处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置188处的氨基酸取代；且L2包含位置131处的氨基酸取代；iii.H2包含位置143处的氨基酸取代；且L2包含位置124_133或124_133_180处的氨基酸取代；c.H1包含位置143处的氨基酸取代；L1包含位置131处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置124_186或124_179或188处的氨基酸取代；且L2包含位置176_178或176_180或131处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置143_188或143或124_143处的氨基酸取代；且L2包含位置124_176_178或124_178或124_180或124_176_180或124或124_176处的氨基酸取代；d.H1包含位置179、186、143和/或188处的氨基酸取代；L1包含位置180、133和/或176_178处的氨基酸取代；H2包含位置143处的氨基酸取代；且L2包含位置131和/或124处的氨基酸取代；e.H1包含位置39处的氨基酸取代或不包含促进优先配对的氨基酸取代；L1包含位置38处的氨基酸取代或不包含促进优先配对的氨基酸取代；H2包含位置39处的氨基酸取代；且L2包含位置38处的氨基酸取代；f.H1包含位置143处的氨基酸取代；L1包含位置131处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置188或124_186处的氨基酸取代；且L2包含位置176_178或176_180或131处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置143或186处的氨基酸取代；且L2包含位置124_133或124_133_180处的氨基酸取代；g.H1包含位置188处的氨基酸取代；L1包含位置176_178或178处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置177_188处的氨基酸取代；且L2包含位置176_178处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置186或124或124_179处的氨基酸取代；且L2包含位置176或131_176处的氨基酸取代；h.H1包含位置186处的氨基酸取代；L1包含位置133处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置188处的氨基酸取代；且L2包含位置131处的氨基酸取代；或ii.H2包含位置177_188处的氨基酸取代；且L2包含位置176_178处的氨基酸取代；或H1包含位置124_190处的氨基酸取代；L1包含位置135处的氨基酸取代；H2包含位置124或188处的氨基酸取代；且L2包含位置176或176_178处的氨基酸取代；i.H1包含位置177_188处的氨基酸取代；L1包含位置176_178处的氨基酸取代；并且i.H2包含位置188处的氨基酸取代；且L2包含位置176_178或131处的氨基酸取代；ii.H2包含位置186处的氨基酸取代；且L2包含位置133或124_160_180处的氨基酸取代；iii.H2包含位置124或124_179或124_186处的氨基酸取代；且L2包含位置176或176_178或176_180处的氨基酸取代；或iv.H2包含位置143处的氨基酸取代；且L2包含位置133或124_133处的氨基酸取代；j.H1包含位置188处的氨基酸取代；L1包含位置178处的氨基酸取代；H2包含位置124或188处的氨基酸取代；且L2包含位置176_178或176_180或176处的氨基酸取代；k.或H1包含位置145_188处的氨基酸取代；L1包含位置178处的氨基酸取代；且H2包含位置124和/或188处的氨基酸取代；且L2包含位置124、133和178中的一个或多个处的氨基酸取代；l.H1包含位置174、179或186处的氨基酸取代；L1包含位置176或180处的氨基酸取代；H2包含位置143或190处的氨基酸取代；且L2包含位置131、135或124处的氨基酸取代；或m.H1包含位置174处的氨基酸取代；L1包含位置176处的氨基酸取代；H2包含位置190处的氨基酸取代；且L2不包含促进优先配对的氨基酸取代或包含位置135处的氨基酸取代；n.H1包含位置143_190处的氨基酸取代；L1包含位置133处的氨基酸取代；H2包含位置124处的氨基酸取代；且L2包含位置131_135处的氨基酸取代；o.H1包含位置143和/或186处的氨基酸取代；L1包含位置133处的氨基酸取代；H2包含位置124处的氨基酸取代；且L2包含位置131处的氨基酸取代；p.H1包含位置143_179处的氨基酸取代；L1包含位置124_178处的氨基酸取代；H2包含位置186处的氨基酸取代；且L2包含位置178_180或160_180处的氨基酸取代；q.H1包含位置143处的氨基酸取代；L1包含位置124处的氨基酸取代；H2包含位置179或186处的氨基酸取代；且L2包含位置124_160_180处的氨基酸取代；r.H1包含位置186处的氨基酸取代；L1包含位置180或178_180处的氨基酸取代；H2包含位置143和/或179处的氨基酸取代；且L2包含位置124_178或131处的氨基酸取代；s.H1包含位置179处的氨基酸取代；L1包含位置180处的氨基酸取代；H2包含位置143处的氨基酸取代；且L2包含位置124处的氨基酸取代；t.H1包含位置143或186处的氨基酸取代；L1包含位置180处的氨基酸取代或不包含促进优先配对的氨基酸取代；H2包含位置143_145处的氨基酸取代；且L2包含位置124处的氨基酸取代；u.H1不包含促进优先配对的氨基酸取代；L1包含位置135处的氨基酸取代；H2包含位置139处的氨基酸取代；且L2包含位置116处的氨基酸取代；v.H1不包含促进优先配对的氨基酸取代或包含位置45处的氨基酸取代；L1不包含促进优先配对的氨基酸取代；H2包含位置45处的氨基酸取代；且L2包含位置44处的氨基酸取代；w.H1包含位置139处的氨基酸取代；L1包含位置116处的氨基酸取代；H2不包含促进优先配对的氨基酸取代；且L2包含位置135处的氨基酸取代；或x.H1包含位置124处的氨基酸取代；L1包含位置176处的氨基酸取代；H2包含位置124处的氨基酸取代；且L2包含位置176处的氨基酸取代。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗原结合多肽构建体，其中所述第一Fab区对所述第一抗原的亲和力在由相应的野生型H1和L1多肽序列形成的Fab区对所述第一抗原的亲和力的约100倍以内，且/或所述第二Fab区对所述第二抗原的亲和力在由相应的野生型H2和L2多肽序列形成的Fab区对所述第二抗原的亲和力的约100倍以内。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗原结合多肽构建体，其中所述第一Fab区的熔融温度(Tm)与由相应的野生型H1和L1多肽序列形成的Fab区对所述第一抗原的Tm相差在约20℃以内，且/或所述第二Fab区的熔融温度(Tm)与由相应的野生型H2和L2多肽序列形成的Fab区对所述第二抗原的Tm相差在约20℃以内。7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗原结合多肽构建体，其中：a.H1和L1是野生型多肽序列，并且H2和L2各自包含至少一个氨基酸修饰；b.H1、L1和H2中的一个或多个包含至少一个氨基酸修饰，并且L2是野生型多肽序列；c.H1、L1和L2中的一个或多个包含至少一个氨基酸修饰，并且H2是野生型多肽序列；d.H1、H2和L2中的一个或多个包含至少一个氨基酸修饰，并且L1是野生型多肽序列；e.L1、H2和L2中的一个或多个包含至少一个氨基酸修饰，并且H1是野生型多肽序列；或f.H1、L1、H2和L2各自包含至少一个氨基酸修饰。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗原结合多肽构建体，其中所述氨基酸修饰位于：a.H1的CH1结构域、H2的CH1结构域、L1的CL-λ结构域和L2的CL-κ结构域中的至少两个；b.H1和H2的CH1和VH结构域、...

【专利技术属性】
技术研发人员：D尤罗塞夫，M桑切斯，SAL汤姆尤，LG普雷斯塔，
申请(专利权)人：酵活有限公司，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA