GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，包括：包被有GluR3B肽段的ELISA酶标板、包被有含1％BSA的PBS溶液的ELISA酶标板、酶标二抗、标准蛋白、包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、稀释液、显色液、终止液。该检测试剂盒可用于对癫痫患者血清、脑脊液中GluR3B抗体的含量进行检测，检测方法操作方便，准确度高，灵敏度高，且检测时不需要复杂仪器，易于在科研院校和医疗机构中推广应用，可大规模检测临床标本，快速获得人GluR3B抗体相关的海量数据和信息，为癫痫患者认知功能障碍的诊断提供重要的临床参考价值。

【技术实现步骤摘要】
GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法，于免疫学和生物
技术背景癫痫是神经科常见病，现今约有5千万癫痫患者，约占世界人口的0.5-1％。癫痫患者往往合并有严重认知方面、行为方面的异常，如注意缺陷/多动(ADD，ADHD)，情绪障碍，学习和记忆的缺损，这些合并症可能较癫痫发作本身对癫痫患者生活质量的影响更大。因此，寻找癫痫患者认知功能障碍的生物标志物并进行干预对改善癫痫患者生活质量的意义重大。目前，GluR3B抗体被发现存在于相当比例的不同类型的癫痫患者体内，因此怀疑它们对大脑有致病性的影响。进一步通过动物实验发现，在三种行为测试(旋杆实验，旷场实验和握力试验)中，小鼠产生高水平特异性和非特异性交叉反应的GluR3B抗体(由GluR3B肽免疫产生)会导致异常行为和运动障碍，而几组对照组(不产生抗体的小鼠或产生高水平的其他人为控制的抗体的小鼠，由人为控制的抗体免疫产生)，则不显示这样的异常。这说明，GluR3B抗体与癫痫患者所表现出来的精神/认知/行为异常是密切相关的。由于GluR3B抗体可以结合神经元，具有独特的能力激活他们的抗原(各自的谷氨酸受体)，杀死神经细胞，因而造成多发性脑损伤和诱导神经和认知/情绪障碍，GluR3B抗体作为癫痫患者认知功能障碍的生物标志物，对于癫痫患者认知功能障碍的诊断有重大意义，因此，对于癫痫病，尤其是常规疗法无效顽固性癫痫病，以及大的脑外科手术之前都有必要检测GluR3B肽抗体，但目前，尚无文献报道GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，也没有针对癫痫患者血清中的GluR3B抗体含量提供一种准确、简便、灵敏度高的检测手段。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其可用于对癫痫患者血清、脑脊液中GluR3B抗体的含量进行检测。本专利技术的另一个目的还在于提供利用该ELISA检测试剂盒对GluR3B抗体的含量进行检测的方法，该方法操作简单方便，准确度高，灵敏度高。为解决上述现有技术存在的问题，本专利技术采取的技术方案为：一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，包括：a.包被有GluR3B肽段的ELISA酶标板，所述的GluR3B肽段由上海强耀生物科技有限公司合成，序列为：NEYERFVPFSDQQISNDSSSSENR，包被肽段工作浓度为20ug/ml；b.包被有含1％BSA的PBS溶液的ELISA酶标板；此酶标板为排除非特异性结合的抗体；c.酶标二抗，为HRP标记的山羊抗人IgG；购自JacksonImmunoResearchd.标准蛋白，为GluR3B单克隆抗体；e.包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、稀释液、显色液、终止液。所述包被缓冲液pH为9.6，其制备方法：将0.16gNa2CO3与0.29gNaHCO3用双蒸水溶解，然后定容至100mL。所述封闭液的制备方法：将1gBSA溶解于PBS溶液，然后定容至100mL。所述ELISA酶标板洗涤液的制备方法：取3.75gNa2HPO4·12H2O、0.43gNaH2PO4·2H2O及7.2gNaCl，使用双蒸水溶解后定容至1L。所述稀释液的制备方法同封闭液。所述显色液为ABTS过氧化物酶底物，购自Kirkegaard&PerryLaboratories。所述终止液为2mol/l的硫酸溶液。利用该ELISA检测试剂盒对GluR3B抗体的含量进行检测的方法，包括如下步骤：(1)使用包被缓冲液将GluR3B肽段稀释成20ug/ml，在酶标板的每孔中加入100ul，封板后置于4℃孵育过夜，备用；在另一酶标板每孔加入封闭液，同样封板后置于4℃孵育过夜，备用；(2)次日，甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗涤液300ul，洗涤3-5次，甩干，将封闭液以100ul/孔体积加样到两块酶标板上，室温孵育2小时，甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗涤液300ul，洗涤3-5次，甩干；(3)将癫痫患者血清或脑脊液样本以100ul/孔体积加样到两块酶标板对应的孔上，标准蛋白经稀释液稀释成不同浓度梯度，以100ul/孔体积加样到两块酶标板对应的孔上，酶标板4℃保温过夜，次日，甩干，加入ELISA酶标板洗涤液300ul，洗涤3-5次，甩干；(4)将酶标二抗用稀释液以1：1000的比例稀释，然后以100ul/孔体积加样到两块酶标板上，酶标板室温孵育2小时，甩去各孔中的液体，加入ELISA酶标板洗涤液300ul，洗涤3-5次，甩干；(5)加入显色液，室温避光孵育10-20分钟，加入终止液终止反应，在酶标仪上405nm测定OD值。最终的OD值使用以下公式计算：[GluR3B包被酶标板OD值]-[封闭液包被酶标板OD值]有益效果：目前市场上无商业化的人源性GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，本专利技术的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒可准确检测癫痫患者血清、脑脊液中GluR3B抗体的含量，结果由酶标仪定量分析，排除了免疫组化、免疫荧光等半定量方法的主观性；灵敏度高，用该方法检测到的GluR3B抗体最低10ng/ml，灵敏度明显高于普通的Westernblot和免疫组化等半定量方法；本专利技术的LISA检测试剂盒中所用试剂和实验耗材均为市售商业化产品，容易获得，检测方法简单方便，检测中仅需移液器和酶标仪进行加样和读数，普通的实验室和医院均可开展此项检测，为临床检验和基础研究提供了一种新的手段和方法。本专利技术的试剂盒主要用于癫痫患者的血清、脑脊液样品中的GluR3B抗体定量检测，基础研究中可运用于各种生物学样品(如细胞培养上清液、细胞裂解液)中的GluR3B抗体的检测。检测时不需要复杂仪器，易于在科研院校和医疗机构中推广应用，可大规模检测临床标本，快速获得人GluR3B抗体相关的海量数据和信息，为癫痫患者认知功能障碍的诊断提供重要的临床参考价值，具有广阔的市场前景、较大的经济和社会效益。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，包括：a.包被有GluR3B肽段的ELISA酶标板，所述的GluR3B肽段由上海强耀生物科技有限公司合成，序列为：NEYERFVPFSDQQISNDSSSSENR，包被肽段工作浓度为20ug/ml；b.包被有含1％BSA的PBS溶液的ELISA酶标板；此酶标板为排除非特异性结合的抗体；c.酶标二抗，为HRP标记的山羊抗人IgG；购自JacksonImmunoResearch；d.标准蛋白，为GluR3B单克隆抗体；e.包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、稀释液、显色液、终止液。所述包被缓冲液pH为9.6，其制备方法：将0.16gNa2CO3与0.29gNaHCO3用双蒸水溶解，然后定容至100mL。所述封闭液的制备方法：将1gBSA溶解于PBS溶液，然后定容至100mL。所述ELISA酶标板洗涤液的制备方法：取3.75gNa2HPO4·12H2O、0.43gNaH2PO4·2H2O及7.2gNaCl，使用双蒸水溶解后定容至1L。所述稀释液的制备方法同封闭液。所述显色液为ABTS过氧化物酶底物，购自本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括：a.包被有GluR3B肽段的ELISA酶标板，包被肽段工作浓度为20ug/ml；b.包被有含1％BSA的PBS溶液的ELISA酶标板；c.酶标二抗，为HRP标记的山羊抗人IgG；d.标准蛋白，为GluR3B单克隆抗体；e.包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、稀释液、显色液、终止液。

【技术特征摘要】
1.一种GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括：a.包被有GluR3B肽段的ELISA酶标板，包被肽段工作浓度为20ug/ml；b.包被有含1％BSA的PBS溶液的ELISA酶标板；c.酶标二抗，为HRP标记的山羊抗人IgG；d.标准蛋白，为GluR3B单克隆抗体；e.包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、稀释液、显色液、终止液。2.如权利要求1所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液pH为9.6，其制备方法：将0.16gNa2CO3与0.29gNaHCO3用双蒸水溶解，然后定容至100mL。3.如权利要求1所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述封闭液的制备方法：将1gBSA溶解于PBS溶液，然后定容至100mL。4.如权利要求1所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述ELISA酶标板洗涤液的制备方法：取3.75gNa2HPO4·12H2O、0.43gNaH2PO4·2H2O及7.2gNaCl，使用双蒸水溶解后定容至1L。5.如权利要求1所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述显色液为ABTS过氧化物酶底物。6.如权利要求1至5任一项所述的GluR3B抗体的ELISA检测试剂盒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚瑞芹，樊红彬，李昕昱，来青伟，曲学彬，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32