本发明专利技术公开了一种检测门冬氨酸鸟氨酸中特定杂质的分析方法，属于分析化学领域；该方法采用HPLC方法进行检测，采用ProntoSIL‑Amino（德国Bischoff）氨基柱，检测波长：210‑220nm，流速：0.8‑1.2ml/min，柱温：25‑35℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾‑甲醇为流动相，采用梯度洗脱程序进行分析，本技术方案可以迅速、准确对（β‑门冬氨酸）‑（δ‑鸟氨酸）以及（β‑门冬氨酸）‑鸟氨酸进行定性和定量分析，且分离度好，检测限和定量限都较低，线性范围较宽，回收率范围在标准规定的范围内，所以该方法灵敏，能够准确计算出（β‑门冬氨酸）‑（δ‑鸟氨酸）以及（β‑门冬氨酸）‑鸟氨酸的含量，为门冬氨酸鸟氨酸中杂质的进一步监测、研究提供了技术支持。
【技术实现步骤摘要】
一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种使用HPLC法分析检测门冬氨酸鸟氨酸中含有的(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸杂质的分析方法。
技术介绍
门冬氨酸鸟氨酸，化学名称：(S)-2，5-二氨基戊酸-(S)-2-氨基丁二酸盐；是L-天门冬氨酸与L-鸟氨酸经过化学反应而形成的盐，溶于水后以离子的形式存在，进入体内后分解为门冬氨酸和鸟氨酸，能直接参与肝细胞代谢，并能激活肝脏解毒功能中的两个关键酶，因而能够协助清除对人体有害的自由基，增强肝脏的排毒功能，迅速降低过高的血氨，促进肝细胞自身的修复和再生，从而有效地改善肝功能，恢复机体能量平衡。目前门冬氨酸鸟氨酸的制剂形式有颗粒剂和注射剂两种，本实验室技术人员在研究门冬氨酸鸟氨酸原料和制剂长期稳定性实验的过程中发现：在距离生产时间15-20个月后产生了两种杂质：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸，该两种杂质为门冬氨酸鸟氨酸在储存过程中发生氨基和羧基的相互缩合或者由于自身降解而生成，由于以上两种杂质的存在，可能引起人体不良反应及药物刺激性，所以其含量多少直接影响门冬氨酸鸟氨酸或其制剂的质量，也决定了药品的保质期长短。现有技术中关于门冬氨酸鸟氨酸中杂质的检测方法中没有公开相关(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的信息，如CN104807924A中提供了一种检测门冬氨酸鸟氨酸中富马酸、精氨酸、尿素、丁二酸、苹果酸、内酰胺的高效液相分析检测方法；CN102288687A提供了一种检测鸟氨酰胺的检测方法；覃婷婷等在《天津药学》杂志中采用柱后衍生化高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸颗粒剂的有关物质及含量，其中有关物质为：鸟氨酸内酰胺、赖氨酸、Ω-二鸟氨酸；所以目前现有技术中的门冬氨酸鸟氨酸中没有公开相关(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸，更没有公开两种杂质的分析方法，且现有的门冬氨酸鸟氨酸及其制剂的药品质量标准中也没有明确收录有关以上杂质的定量和定性的方法，所以为进一步研究门冬氨酸和鸟氨酸的质量标准，本申请主要针对两种杂质的定性和定量方法进行研究。
技术实现思路
为克服现有技术中没有公开门冬氨酸鸟氨酸原料和制剂中(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的两种杂质的检测方法，本申请采用如下技术方案：一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，采用高效液相色谱仪测定，色谱条件为：色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱；检测波长：210-220nm；流速：0.8-1.2ml/min；柱温：25-35℃；流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾-甲醇，体积比35-45：55-65；流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液-甲醇，体积比为55-65：35-45；采用梯度洗脱程序：以上的特定杂质为(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸中的一种或两种；优选的，流动相A用磷酸调节pH至5.6-6.0；流动相B用磷酸调节pH至4.8-5.2；优选的，流动相A用磷酸调节pH至5.8-6.0；流动相B用磷酸调节pH至4.8-5.0；优选的，流动相A中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为35-40：60-65；流动相B中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为60-65：35-40；更优选的，流动相A中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为35：65；流动相B中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为65：35；流动相A用磷酸调节pH至5.8；流动相B用磷酸调节pH至5.0。以上方法中色谱柱的规格优选为：4.6mmx250mm，5μm；检测波长优选为：210nm；流速优选为：1.0ml/min；柱温优选为：30℃；梯度洗脱程序优选为：更优选的，一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，采用以下方法进行分析：色谱条件：色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾和甲醇，体积比为35：65，用磷酸调节pH至5.8；流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾和甲醇，按体积比65：35，用磷酸调节pH至5.0；采用梯度洗脱程序：以上方法可用于检测含有门冬氨酸鸟氨酸原料的食品、保健品、药品及制剂中的(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸任何一种或两种杂质。该专利技术的有益效果为：1)本专利技术提供的技术方案能够将门冬氨酸鸟氨酸原料或者制剂中(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸进行有效的分离，其中门冬氨酸、(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、鸟氨酸、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸四者之间的分离度>1.5，达到了分析的要求；2)通过对检测限和定量限进行测定，证明本申请技术方案的检测限和定量限相对较低：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)检测限为6.80ng，浓度为0.34μg/ml；定量限为22.66ng，浓度为1.11μg/ml；(β-门冬氨酸)-鸟氨酸检测限为4.34ng，浓度为0.71μg/ml；定量限为14.52ng，浓度为2.37μg/ml；所以本技术方案具有检测限低，灵敏度高的特点；3)通过测定(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的线性方程，找出定量分析的依据：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)在1.13～13.60μg/ml之间线性关系良好，线性方程为：A＝15355C-2580.5，r为0.9994，；(β-门冬氨酸)-鸟氨酸在2.38～14.25μg/ml之间线性关系良好，线性方程为：A＝9472C-6820，r为0.9990；4)(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)的回收率在97.7％～103.0％间；(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的回收率在98.5％～102.4％之间，以上回收率符合验证方案规定的90.0％-108.0％标准，可以证实该方法具有极高的准确度。所以本申请的技术方案具有灵敏度高、方法准确的优势，且其线性范围符合分析的要求，该方法为门冬氨酸鸟氨酸杂质的进一步监测、研究提供了可能。实施例：为便于理解
技术实现思路
，下面结合具体实施例进一步描述本专利技术的技术方案，但不以任何方式限制本专利技术。以下实施例1-5中所采用的液相色谱方法均采用如下方法进行：色谱条件：色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至5.8)-甲醇(35：65)；流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾(用磷酸调节pH至5.0)-甲醇(65：35)；采用梯度洗脱程序：实施例1：分离度检测1)溶液的配置：主成分对照品定位溶液：精密称取盐酸鸟氨酸、门冬氨酸、门冬氨酸鸟氨酸各100mg，分别置50ml量瓶中，加流动相B溶解并稀释至刻度，摇匀，即得主成分对照品定位溶液；杂质对照品溶液：精密称取(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸各25mg，置100ml量瓶中，加流动相B溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(β-门冬本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪测定，色谱条件为：色谱柱：ProntoSIL‑Amino（德国Bischoff）氨基柱；检测波长：210‑220nm；流速：0.8‑1.2ml/min；柱温：25‑35℃；流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾‑甲醇，体积比35‑45：55‑65；流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液‑甲醇，体积比为55‑65：35‑45；采用梯度洗脱程序：
【技术特征摘要】
1.一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪测定，色谱条件为：色谱柱：ProntoSIL-Amino（德国Bischoff）氨基柱；检测波长：210-220nm；流速：0.8-1.2ml/min；柱温：25-35℃；流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾-甲醇，体积比35-45：55-65；流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液-甲醇，体积比为55-65：35-45；采用梯度洗脱程序：。2.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述的特定杂质是（β-门冬氨酸）-（δ-鸟氨酸）、（β-门冬氨酸）-鸟氨酸中的一种或两种。3.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述流动相A用磷酸调节pH至5.6-6.0；所述流动相B用磷酸调节pH至4.8-5.2。4.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述流动相A用磷酸调节pH至5.8-6.0；所述流动相B用磷酸调节pH至4.8-5.0。5.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述流动相A中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为35-40：60-65；所述流动相B中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为60-65：35-40。6.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱路英，殷妙妙，文向东，高峰，
申请(专利权)人：朱路英，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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