用于检测胃癌的组合物及其试剂盒和用途制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测胃癌的组合物，所述组合物包括：1)用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因或其片段，和/或RNF180基因或其片段；和2)用于检测血清/血浆中MG7抗原浓度的试剂。通过对目标基因的甲基化状态和目标基因的蛋白表达水平来检测胃癌。本发明专利技术还提供了包括所述组合物的试剂盒。以及一种对胃癌进行体外检测的方法。因此，本发明专利技术利用实时PCR分析血浆样本中的DNA的方法，能方便地实现针对SEPT9基因或其片段和/或RNF180基因或其片段的检测，并且能根据实时PCR的循环阈值(Ct)值来快速、便捷地判断样本是否呈阳性，进一步地，本发明专利技术通过检测待测样品血清/血浆中MG7抗原浓度的浓度，提供了一种准确的体外检测方法。

【技术实现步骤摘要】
用于检测胃癌的组合物及其试剂盒和用途
本专利技术属于生物
，涉及一种组合物及其在疾病检测中的用途，具体地，本专利技术涉及一种用于检测胃癌的组合物及其相应的试剂盒和用途。
技术介绍
在中国，胃癌是一种高发的恶性肿瘤疾病。根据全国肿瘤防治办公室公开的数据显示：2015年，我国胃癌新发病例6.79x105例，死亡4.98x105例；新发病例和死亡人数均位居常见癌症的第二位。我国胃癌的病例死亡比(death-to-caseratio)为0.733，死亡率很高。造成胃癌死亡率高、治愈率低的一个重要因素是早期胃癌的确诊率较低。由于早期胃癌缺乏明显、特异的症状，绝大部分患者在确诊时已进入胃症晚期，此时病灶多已发生转移，无法采用治愈性手段进行治疗。临床研究发现，从胃癌病灶开始形成到患者出现临床症状的过程平均需要数年时间，这为发现早期胃癌、提高早期胃癌的确诊率提供了一个有效的窗口期。充分利用这个窗口期，有望提高胃癌治疗效果、降低胃癌死亡率。目前胃癌诊断技术主要为影像学检测技术(如：x线钡餐检查、纤维胃镜检查及活检)、细胞学检测技术(如：胃液细胞学检查)，然而，这些技术检测灵敏性低，侵入性强，并且检测成本较高，有的操作技术要求高，在胃癌的检测和诊断的使用受到限制，无法充分满足临床检测的需求。近几年兴起的肿瘤生物标识物(如：胃蛋白酶原)检测技术具有方便、快捷、灵敏、无创等技术优势，便于临床使用和推广，然而，单一肿瘤标识物难以实现理想的肿瘤检测性能。基于此，当前对能够有效提高胃癌的检测效果的检测技术存在需求。因此，开发灵敏、特异的新型胃癌生物标识物和检测技术是提高胃癌早癌检出率、改善胃癌治疗效果、降低胃癌死亡率的重要途径。
技术实现思路
针对现有技术存在的早期胃癌患者检测中确诊率低，检测成本高的问题，本专利技术提供了一种用于检测胃癌的组合物，本专利技术提供的组合物能够敏感和特异性地检测胃癌，本专利技术还提供了包含所述组合物的试剂盒以及其在检测胃癌中的用途，本专利技术提供的试剂盒具有良好的胃癌检测灵敏性，能够方便、快捷、有效地检测胃癌。本专利技术提供了一种用于体外检测胃癌的组合物、试剂盒及其用途，以及基于该试剂盒来执行检测的方法。根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种用于体外检测胃癌的组合物，所述组合物包括：1)用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因或其片段，和/或RNF180基因或其片段；和2)用于检测血清/血浆中MG7抗原浓度的试剂。通过判断所述目标基因的甲基化状态以及血清/血浆中MG7抗原的浓度来检测胃癌。根据本专利技术的某些优选的实施方案，所述组合物包括用于检测SEPT9基因或其片段、RNF180基因或其片段的每一个的至少一个区域内甲基化状态的核酸。通过对目标基因的甲基化检测结果来检测胃癌。优选地，所述SEPT9基因或其片段的至少一个区域包括所述基因的至少15个核苷酸的片段，其中所述核苷酸包含至少一个CpG二核苷酸序列；所述RNF180基因或其片段的至少一个区域包括所述基因的至少15个核苷酸的片段，其中所述核苷酸包含至少一个CpG二核苷酸序列；CpG的甲基化状态表明所述疾病的检测结果。优选地，用于检测SEPT9基因或其片段和/或RNF180基因或其片段中至少一个区域内甲基化状态的核酸序列包括：等同于或互补于来自SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的至少9个碱基长的连续序列片段，或在中等严紧或严紧条件下杂交于来自SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的至少9个碱基长的连续序列片段；其中，所述SEQIDNO:1提供了SEPT9基因的富含CpG的序列；所述SEQIDNO:2提供了RNF180基因的富含CpG的序列。优选地，所述核酸为引物和/或探针。典型的引物和/或探针包含等同于、互补于或在中等严紧或严紧条件下杂交于选自SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2的至少15个核苷酸的片段及其互补序列。SEPT9引物F1:SEQIDNO:3：CCCACCAACCATCATATSEPT9引物R1:SEQIDNO:4：GTAGTAGTTAGTTTAGTATTTATTTTSEPT9探针P1:SEQIDNO:5：GTTCGAAATGATTTTATTTAGTTGCSEPT9探针P2:SEQIDNO:6：CGTTGATCGCGGGGTTCRNF180引物F1:SEQIDNO:7：GGTTGTAGGTATAGTTCGAGCGTTRNF180引物R1:SEQIDNO:8：GACCGCCAACAACCAAACTCTAAARNF180探针P1:SEQIDNO:9：CTACGACTCCGACGACGACGATACCGA优选地，所述组合物还包括将基因的5位未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶或在杂交性能方面可检测地不同于胞嘧啶的其他碱基的试剂。优选的试剂是亚硫酸氢盐。优选地，所述用于检测血清/血浆中MG7抗原浓度的试剂为酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)试剂；其中，所述试剂包括MG7抗原的特异性抗体；更优选的，所述试剂为“三明治式”酶联免疫吸附试剂；进一步优选地，所述试剂包括MG7抗原的特异性抗体包被的反应板、MG7蛋白酶结合物、底物液、洗液和终止液。根据本专利技术的第二个方面，还提供了包括所述组合物的试剂盒。典型地，所述的试剂盒还包括用于容纳受试者生物样品的容器。并且，所述的试剂盒还包括使用和解释试剂盒结果的说明。根据本专利技术的第三个方面，还提供了一种对胃癌进行体外检测的方法，所述方法包括以下步骤：1)分离待测生物样品中目标基因的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因或其片段、RNF180基因或其片段；2)检测所述目标基因中至少一个区域内的甲基化状态；3)检测MG7抗原在待测生物样品的血清/血浆中的浓度；优选地，使用ELISA方法检测；4)通过所述目标基因的甲基化检测结果和目标抗原血清浓度检测结果对胃癌进行体外检测。在一个优选的实施方案中，所述方法包括以下步骤：1)分离待测生物样品中的目标基因，其中所述目标基因选自SEPT9基因或其片段、RNF180基因或其片段；2)确定所述目标基因的每个的至少一个区域内的甲基化状态；3)检测MG7抗原在待测生物样品的血清/血浆中的浓度；4)通过所述目标基因的甲基化检测结果和MG7抗原的血清浓度检测结果对胃癌进行体外检测。根据某些优选实施方案，所述方法还包括以下步骤：1)使用试剂将目标基因的5’位未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶或其它碱基，转化后的碱基在杂交性能方面是可检测的；2)将经步骤1)处理过的目标基因与扩增酶和引物接触，使得所述经处理的基因被扩增以产生扩增产物或不被扩增；3)用探针检测扩增产物；以及4)基于所述扩增物是否存在，确定所述目标基因的DNA序列的至少一个CpG二核苷酸的甲基化状态；其中，所述目标基因选自SEPT9或其片段、RNF180基因或其片段。并且，所述接触或扩增包括适用至少一种选自如下的方法：使用耐热DNA聚合酶作为所述扩增酶、使用缺乏5’-3’外切酶活性的聚合酶、使用聚合酶链式反应(PCR)、产生带有可检测标记的扩增产物核酸分子。在一个优选的实施方案中，所述方法还包括通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测MG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于体外检测胃癌的组合物，所述组合物包括：1)用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因或其片段，和/或RNF180基因或其片段；和2)用于检测血清/血浆中MG7抗原浓度的试剂。

【技术特征摘要】
1.一种用于体外检测胃癌的组合物，所述组合物包括：1)用于检测目标基因的至少一个区域内甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因选自SEPT9基因或其片段，和/或RNF180基因或其片段；和2)用于检测血清/血浆中MG7抗原浓度的试剂。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物包括用于检测SEPT9基因或其片段、RNF180基因或其片段的每一个的至少一个区域内甲基化状态的核酸；优选地，所述SEPT9基因或其片段的至少一个区域包括所述基因的至少15个核苷酸的片段，其中所述核苷酸包含至少一个CpG二核苷酸序列；所述RNF180基因或其片段的至少一个区域包括所述基因的至少15个核苷酸的片段，其中所述核苷酸包含至少一个CpG二核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述用于检测SEPT9基因或其片段和/或RNF180基因或其片段中至少一个区域内甲基化状态的核酸序列包括：等同于或互补于来自SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的至少9个碱基长的连续序列片段，或在中等严紧或严紧条件下杂交于来自SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的至少9个碱基长的连续序列片段；其中，所述SEQIDNO:1提供了SEPT9基因的富含CpG的序列；所述SEQIDNO:2提供了RNF180基因的富含CpG的序列。4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中，所述核酸为引物和/或探针。典型的引物和/或探针包含等同于、互补于或在中等严紧或严紧条件下杂交于选自SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2的至少15个核苷酸的片段及其互补序列。SEPT9引物F1:SEQIDNO:3：CCCACCAACCATCATATSEPT9引...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩晓亮，马竣，周光朋，徐海，宋乐乐，王建铭，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，博诚研究中心，
类型：发明
国别省市：北京,11