一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒及其制备方法和在肿瘤诊疗中应用技术

本发明专利技术公开了一种基于荧光染料(fluorescent dyes,FD)与(coomassie brilliant blue，CBB)共结合的血清白蛋白(serum albumin,SA)纳米粒的制备方法，包括以下步骤：S101:将考马斯亮蓝溶液与血清白蛋白溶液按照质量比1:5‑1:40混合，后搅拌反应0.5‑15h；S102:后过滤，洗涤，分散得到中间产物；S103:往中间产物加入其重量百分比为1‑10％的荧光染料，搅拌反应0.5‑15h；S104:过滤后制得血清白蛋白纳米粒。采用本发明专利技术的一种血清白蛋白纳米粒的制备方法，工艺流程简单，可操作性强，工艺重复性好，制备的荧光染料和考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒具有优良的抗肿瘤效果，且选择性高、毒副作用小。

Serum albumin nanoparticles combined with fluorescent dyes and Coomassie brilliant blue and its preparation method and application in tumor diagnosis and treatment

The present invention discloses a preparation method of serum albumin (serum albumin, SA) nanoparticles based on fluorescent dyes (FD) and (Coomassie brilliant blue, CBB), including the following steps: S101: mixing the komma bright blue solution with the serum white egg white solution at 1:40 as the mass of 1:5, and stirring reaction 0. 5 15h; S102: after filtering, washing and dispersing the intermediate products; S103: was added to the intermediate products with its weight percentage of 1, 10% of fluorescent dye, stirring reaction 0.5, 15h, and S104: filtration to produce serum albumin nanoparticles. The preparation method of a serum albumin nanoparticle of the present invention has simple process, strong operability and good reproducibility. The prepared fluorescent dye and Coomassie brilliant blue serum albumin nanoparticles have excellent antitumor effect, high selectivity and small side effects.

【技术实现步骤摘要】
一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒及其制备方法和在肿瘤诊疗中应用
本专利技术涉及新型有机纳米材料，尤其是应用在医疗领域的纳米材料，具体是一种基于荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒及其制备方法和应用。
技术介绍
肿瘤是威胁人类健康和生命的疾病之一，目前化疗仍是肿瘤治疗的手段。但临床上使用的化疗药物毒副作用不容忽视。目前公开的血清白蛋白的抗肿瘤纳米药物粒子大多通过装载传统细胞毒类化疗药物实现，如中国专利CN201610228149.4公开了一种抗肿瘤药与MRI造影剂共传递白蛋白纳米粒及其制备方法，通过药物与载体间的静电吸附和配位作用，以及载体自身氨基酸残基的交联实现载药，具体为药物与造影剂共传递白蛋白纳米粒的最优制备工艺及其在肿瘤诊疗结合方面的作用。由于传统细胞毒化疗抗肿瘤药物往往对正常细胞存在毒副作用，尽管利用靶向技术可以提高这些药物在肿瘤细胞中的浓度从而起到降低毒副作用的效果，但一些器官如肝脏、脾脏不可避免地吸收纳米药物，从而对这些器官产生依然存在潜在危险。另外还有中国专利CN201510566206.5公开了具有近红外光热效应的铜基人血白蛋白纳米复合物及其制备方法和应用，通过控制蛋白浓度、铜盐浓度、反应溶液pH、反应时间和反应温度，诱导无机铜基纳米复合物的生长，合成出以人血白蛋白为骨架、包裹硫化铜或硒化铜纳米复合物的铜基纳米结构，该具有近红外光热效应的铜基人血白蛋白纳米复合物可用于光热治疗，实现肿瘤高效热消除，为无机纳米复合材料，生物相容性差，也不能直接化学治疗。至今还未发现基于荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备及应用研究。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种基于荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，解决现有技术存在的问题。本专利技术采用的技术手段如下：一方面，一种基于荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，包括以下步骤：S101:将考马斯亮蓝溶液与血清白蛋白溶液按照质量比1:5-1:40混合，后搅拌反应0.5-15h；S102:后超滤或透析，洗涤，分散得到中间产物；S103:往中间产物加入其重量百分比为1-10％的荧光染料，搅拌反应0.5-15h；S104:超滤或透析后制得荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒。优选地，S101步骤的反应在4℃～50℃下进行；S103步骤的反应在4℃～30℃下进行。优选地，S102和S104步骤中，超滤或透析均采用截留分子量为10-50KD的超滤管或透析袋进行。优选地，S102步骤中，选用二甲基亚砜或二甲基甲酰胺洗涤，使用磷酸缓冲液分散。优选地，荧光染料包括Cy3-NHS、Cy5-NHS、Cy5.5-NHS、Cy7-NHS、异硫氰酸荧光素和异硫氰酸罗丹明B中的一种或多种。优选地，血清白蛋白选用人血清白蛋白、鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白、马血清白蛋白和兔源血清白蛋白中的一种。优选地，考马斯亮蓝包括G250和R250中的一种。另一方面，提供一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合血清白蛋白纳米粒的应用。本专利技术的一种血清白蛋白纳米粒，最大的特点在于该纳米粒子可高效杀死肿瘤细胞而不对正常细胞产生明显影响。可用于非实体瘤和实体瘤的化学治疗，其中非实体瘤包括各类白血病；实体瘤包括肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌或黑色素瘤。另外本专利技术的荧光染料与考马斯亮蓝共结合血清白蛋白纳米粒，还能用于实体瘤示踪，其中实体瘤包括肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌。本专利技术的荧光染料与考马斯亮蓝共结合血清白蛋白纳米粒，也可用于实体瘤的光热消融治疗，其中实体瘤包括肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌或黑色素瘤。综上所述，本专利技术的一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合血清白蛋白纳米粒的制备方法工艺流程简单，可操作性强，工艺重复性好，制备的荧光染料和考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒不需要额外装载化疗药物，本身可以广普地杀死肿瘤细胞，对正常细胞则没有明显毒性，是一种潜在的更为安全的抗肿瘤药物。本专利技术公开了一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒子的制备方法，用该方法获得的纳米粒子最大的特点在于该粒子本身能高效诱导实体和非实体肿瘤细胞凋亡，但对正常细胞没有明显影响，因此相较于传统化疗药物，更为安全；此外，该纳米粒子还对实体瘤具有荧光示踪与光热治疗效果。由于采用血清白蛋白为主要组分，且血清白蛋白有无免疫反应、组织相容性好、在体内可降解等特点，该纳米粒子具有良好的生物安全性。因此，在生物医学方面的应用，具有非常重要的科学意义和应用价值。附图说明图1为本专利技术的一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法的流程图；图2、本专利技术制备得到的荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒子透射电镜TEM图及粒径分布统计；图3、本专利技术制备得到的荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒子可见-近红外吸收谱；图4、本专利技术制备得到的荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒子的荧光光谱；图5、本专利技术制备得到的荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒子光热升降温曲线；图6、荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒体外选择性肿瘤细胞增殖毒性实验结果；图7、荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒体内成像结果；图8、在小鼠血液中注射可表达荧光素酶(Luc)的4T1肿瘤细胞(4T1-Luc)后再注射Cy5.5-MSA-G250纳米粒子，肿瘤细胞的转移得到有效抑制；图9、荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒抑制体内白血病细胞(Luc标记的L1210细胞)的生长；(a)注射药物组；(b)注射PBS组；图10、荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白光热处理小鼠4T1移植瘤后小鼠的肿瘤生长情况。具体实施方式以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例一：如图1，一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，包括以下步骤：S101:将考马斯亮蓝G250溶液与人血清白蛋白(HSA)溶液按照质量比1:10混合，在25℃下搅拌反应7h；S102:后用截留分子量为30KD的超滤管超滤，除掉滤液，用体积30％的二甲基亚砜洗涤2次，使用磷酸缓冲液分散(PBS)，得到中间产物G250-HSA；S103:往中间产物G250-HSA加入重量百分比为4％的荧光染料Cy5.5-NHS，并在25℃下搅拌7h；S104:采用截留分子量为30kD的透析袋透析48h后制得本专利技术的Cy5.5荧光染料及考马斯亮蓝G250共结合的人血清白蛋白纳米粒(Cy5.5-HSA-G250)。实施例二：一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，包括以下步骤：S101:将考马斯亮蓝G250溶液与鼠血清白蛋白(MSA)溶液按照质量比1:40混合，在4℃下搅拌反应15h；S102:后用截留分子量为10KD的超滤管超滤，除掉滤液，用其体积30％的二甲基甲酰胺(DMF)洗涤3次，使用磷酸缓冲液分散(PBS)，得到中间产物MSA-G250；S103:往中间产物MSA-G250加入重量百分比为1％的荧光染料Cy5.5-NHS，并在4℃下搅拌15h；S104:采用截留分子量为10kD的透析袋透析48h后制得本专利技术的Cy5.5荧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S101:将考马斯亮蓝溶液与血清白蛋白溶液按照质量比1:5‑1:40混合，后搅拌反应0.5‑15h；S102:后超滤或者透析，洗涤，分散得到中间产物；S103:往中间产物加入其重量百分比为1‑10％的荧光染料，搅拌反应0.5‑15h；S104:超滤或透析后制得血清白蛋白纳米粒。

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S101:将考马斯亮蓝溶液与血清白蛋白溶液按照质量比1:5-1:40混合，后搅拌反应0.5-15h；S102:后超滤或者透析，洗涤，分散得到中间产物；S103:往中间产物加入其重量百分比为1-10％的荧光染料，搅拌反应0.5-15h；S104:超滤或透析后制得血清白蛋白纳米粒。2.根据权利要求1所述的一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于：所述S101步骤的反应在4℃～50℃下进行；S103步骤的反应在4℃～30℃下进行。3.根据权利要求1所述的一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于：所述S102和S104步骤中，超滤或透析均采用截留分子量为10-50KD的超滤管或透析袋进行。4.根据权利要求1所述的一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于：所述S102步骤中，选用二甲基亚砜或二甲基甲酰胺洗涤，使用磷酸缓冲液分散。5.根据权利要求1所述的一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的血清白蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：张立明，吕卓璇，谭光宏，黄风迎，曹榕，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：海南,46