Combined with determination. A method for the determination of MHC II binding activity of preparations containing the lymphocyte activation gene 3 (LAG 3) protein or its fragments, derivatives, or analogues is described. The method includes the use of biological layer interference (BLI) to measure the binding of the LAG MHC 3 protein, fragments, derivatives or analogs to MHC class molecules. The method can be used for quality control determination in good production specification (GMP) production of the compounds. Probes and kits for describing the method are also described.
【技术实现步骤摘要】
结合测定
本专利技术涉及用于测定淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)蛋白或其片段、衍生物或类似物制剂的MHCII类结合活性的方法,以及用于所述方法中的探针和试剂盒。
技术介绍
LAG-3蛋白是具有四个细胞外免疫球蛋白超家族结构域的CD4I同源型膜蛋白。与CD4相似,LAG-3在T细胞的表面处低聚化,并且结合抗原递呈细胞(APC)上的MHCII类分子,但具有比CD4显著更高的亲和力。LAG-3在活化的CD4+和CD8+T淋巴细胞上表达,其中它与细胞表面处的CD3/T细胞受体复合物缔合并且负向调节信号转导。因此,它负向调节T细胞增殖、功能和体内平衡。与效应或记忆T细胞相比,LAG-3在耗竭的T细胞上被上调。LAG-3也在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)上被上调,并且使用抗LAG-3抗体阻断LAG-3可以增强抗肿瘤T细胞应答。IMP321是重组的、可溶性LAG-3Ig融合蛋白,其以高亲合力结合MHCII类。它是靶向MHCII类阳性抗原递呈细胞(APC)的第一类免疫增强剂(Fougeray等:AsolubleLAG-3proteinasanimmunopotentiatorfortherapeuticvaccines:PreclinicalevaluationofIMP321.Vaccine2006,24:5426-5433;Brignone等:IMP321(sLAG-3)safetyandTcellresponsepotentiationusinganinfluenzavaccineasamodelantigen:Asingle-blindphaseIstudy.Vac ...
【技术保护点】
1.一种用于测定包含淋巴细胞活化基因‑3(LAG‑3)蛋白或其片段、衍生物或类似物的制剂的MHC II类结合活性的方法,其中所述方法包括使用生物层干涉术(BLI)测定所述LAG‑3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类分子的结合。
【技术特征摘要】
1.一种用于测定包含淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)蛋白或其片段、衍生物或类似物的制剂的MHCII类结合活性的方法,其中所述方法包括使用生物层干涉术(BLI)测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHCII类分子的结合。2.根据权利要求1所述的方法,其包括测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHCII类表达细胞上存在的MHCII类分子的结合。3.根据权利要求2所述的方法,其中所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物被固定化到BLI探针的试剂层,并且所述MHCII类表达细胞是在溶液中的。4.根据权利要求3所述的方法,其中所述MHCII类表达细胞可以至少1E6/mL,优选至少4E6/mL或8E6/mL的密度存在。5.根据权利要求3或4所述的方法,其中所述试剂层已用封闭试剂预处理以最小化所述MHCII类表达细胞与所述试剂层的非特异性结合。6.根据权利要求5所述的方法,其中所述封闭试剂包括白蛋白,优选牛血清白蛋白(BSA)。7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法,其中所述MHCII类表达细胞是Raji细胞。8.根据权利要求2至7中任一项所述的方法,其中所述MHCII类表达细胞是从冷冻储备溶液获得的解冻的、即用型细胞。9.根据前述任一项权利要求所述的方法,其包括针对多种不同浓度的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物,测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与所述MHCII类分子的结合速率,以及产生针对所述结合速率的剂量-应答曲线。10.根据前述任一项权利要求所述的方法,其还包括在与用于测定所述制剂的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物的结合相同的条件下,通过使用BLI测定参比样品的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHCII类分子的结合来测定LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物的所述参比样品的MHCII类结合活性,并且将针对所述参比样品测定的所述MHCII类结合活性与针对所述制剂测定的所述MHCII类结合活性进行比较。11.根据权利要求10所述的方法...
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