一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法技术

本发明专利技术公开了一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，通过采用现代分离技术制备黄刺玫不同极性组分的提取物；运用高效液相色谱法建立各组分提取物的指纹图谱，并标定特征峰；以血小板聚集抑制率、凝血酶原时间、凝血酶时间和部分凝血酶时间为指标评价不同提取物的抗血栓活性；将指纹图谱特征峰数据和药效活性数据带入数学模型进行谱效相关性分析，评价特征峰的药效活性。本基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，可以快速、准确地评价黄刺玫中具有抗血栓作用的化学成分，为黄刺玫的药效物质基础研究及质量控制提供科学有效的方法，为进一步开发黄刺玫治疗血栓性疾病的药物或保健品提供参考。

【技术实现步骤摘要】
一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法
本专利技术涉及到一种评价中药化学成分药效活性的方法，特别涉及一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法。
技术介绍
黄刺玫(RosaxanthinaLindl.)又名黄刺莓，属多年生落叶灌木，是蔷薇科蔷薇属有刺野生黄刺玫的果实。广泛分布于东北、华北、西北等地区的山区和丘陵地带。据《中药大辞典》记载，野刺玫果具有健脾理气，养血调经的作用，治疗消化不良，气滞腹泻，胃痛，月经不调等病症。民间大量采食用于泡茶、泡酒等。现代研究表明，刺玫果中含有黄酮类、有机酸、三萜类、皂苷等多种生物活性成分。由此可见，天然黄刺玫是一种不可多得的食、药同源的宝贵资源。中药指纹图谱与化学计量学相结合，通过偏最小二乘法、相关性分析、回归分析等方法进行化学模式识别的方法来评价中药的质量，已经被世界卫生组织所认可。但目前大多数中药的活性成分及其物质基础不明确，建立在中药化学成分基础上的中药指纹图谱并不能有效地表现其与药效的相关性，因此只有将指纹图谱中化学成分的含量变化与其药效变化联系起来，建立起谱效关系，才能有效地反映其内在质量。大量药理研究表明，从刺玫果中分离得到的檞皮素、山奈素、儿茶素等黄酮类化合物具有降血压、保护心肌缺血、抗血栓形成的作用。因此本专利技术以黄刺玫提取物的HPLC指纹图谱为基础，通过偏最小二乘法、灰色关联度分析和双变量相关分析，考察黄刺玫抗血栓药效活性的谱效关系。
技术实现思路
为了解决现有的问题，本专利技术的目的在于提供一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，可以快速、准确地评价黄刺玫中具有抗血栓作用的化学成分及活性成分筛选，为黄刺玫的药效物质基础研究及质量控制提供科学有效的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，通过建立黄刺玫不同极性提取物的HPLC指纹图谱，标定共有特征峰，通过谱效数学模型评价黄刺玫中化学成分的抗血栓作用。一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，其步骤如下：1)采用现代提取技术制备黄刺玫的不同极性的组分；2)采用高效液相色谱法(HPLC)-二极管阵列检测器(DAD)技术建立黄刺玫指纹图谱；3)标定共有峰，提取特征峰数据；4)对不同极性提取物进行抗血小板聚集和抗凝血实验；5)将指纹图谱特征峰数据和药效活性数据经化学计量学方法进行统计分析，评价黄刺玫中化学成分的药效活性。优选的，黄刺玫提取物制备方法为：第一步、取适量黄刺玫适当粉碎，精密称取6份粗粉，每份100g，置于圆底烧瓶中；第二步、分别向上述圆底烧瓶中加入10倍量体积的水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇和90％乙醇；第三步、回流提取1h，提取两次；第四步、滤过，合并滤液，滤液经回收溶剂；第五步、真空干燥，制得干燥提取物。优选的，黄刺玫提取物经大孔树脂层析柱纯化方法为：第一步、称取回收溶剂干燥样品适量；第二步、用水溶解后上大孔树脂吸附柱，分别以40％、60％、80％乙醇溶液洗脱；第三步、收集各洗脱部位，经回收溶剂、真空干燥，制得干燥提取物。优选的，建立黄刺玫HPLC指纹图谱的条件：色谱柱采用十八烷基键合硅胶填料；流动相为：A为乙腈，B为0.1％(v/v)磷酸溶液；采用梯度洗脱：0min→10min→26min→44min→53min→58min→63min→65min，乙腈：12％→16％→16％→28％→30％→50％→50％→12％，0.1％(v/v)磷酸溶液：88％→84％→84％→72％→70％→50％→50％→88％；流速：1.0mL/min；检测器：二极管阵列检测器；检测波长：360nm；柱温：30℃；进样量：15μL。优选的，共有特征峰的保留时间(tR)分别为：10.7min、11.0min、12.9min、13.4min、17.8min、20.4min、21.8min、22.9min、25.4min、26.4min、30.0min、30.8min、38.5min、40.2min、43.2min、45.2min、47.4min、51.6min、52.2min。优选的，共有峰中9号峰为芦丁，13号峰为槲皮素-3-O-α-L鼠李糖苷，19号峰为槲皮素。优选的，实验所用动物为SD大鼠，药效学评价指标为血小板聚集抑制率、凝血酶时间、凝血酶原时间和部分凝血酶时间。优选的，将黄刺玫不同极性提取物的指纹图谱化学信息和药效活性信息带入数学模型进行谱效相关性分析，包括偏最小二乘法、灰色关联度分析和双变量相关分析，评价黄刺玫中化学成分的药效活性，研究其药效物质基础。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术在国内首次进行了黄刺玫指纹图谱特征和药效活性的相关性研究，利用化学模式识别方法将黄刺玫提取物在指纹图谱上所体现的化学成分的变化和药效的变化建立了相关性，为黄刺玫的质量控制提供了更为全面和准确的谱效基础。(2)本专利技术在国内首次完成了黄刺玫具有抗凝血和抗血小板聚集活性组分的评价，明确了黄刺玫中与药效活性较为密切的化学成分，为黄刺玫的抗血栓药效物质基础研究提供依据，为进一步开发相关的保健品或治疗药物提供参考。附图说明图1为本专利技术的黄刺玫样品提取物HPLC指纹图谱；图2为本专利技术的黄刺玫不同极性提取物匹配后HPLC指纹图谱；图3为本专利技术的血小板聚集抑制率回归系数图；图4为本专利技术的血小板聚集抑制率VIP图；图5为本专利技术的PT时间回归系数图；图6为本专利技术的PT时间VIP图；图7为本专利技术的TT时间回归系数图；图8为本专利技术的TT时间VIP图；图9为本专利技术的APTT时间回归系数图；图10为本专利技术的APTT时间VIP图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1-10，本专利技术所采用的技术方案是：一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，通过建立黄刺玫不同极性提取物的HPLC指纹图谱，以及黄刺玫提取物的抗血栓药效活性，利用谱效数学模型评价黄刺玫的抗血栓活性成分。一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫活性成分评价方法，其步骤如下：第一步、供试溶液的制备：取适量黄刺玫适当粉碎，精密称取6份粗粉，每份100g，置于圆底烧瓶中，分别加入10倍量体积的水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇和90％乙醇，回流提取1h，提取两次，滤过，合并滤液，滤液经回收溶剂、真空干燥，制得干燥提取物；称取回收溶剂干燥样品适量，用水溶解后上大孔树脂层析柱，分别以40％、60％、80％乙醇溶液洗脱，收集各洗脱部位，经回收溶剂、真空干燥，制得干燥提取物；第二步、黄刺玫指纹图谱的建立：采用高效液相色谱法对步骤一所得的样品进行指纹图谱测定；色谱条件：色谱柱采用十八烷基键合硅胶填料；流动相为：A为乙腈，B为体积比浓度为0.1％磷酸溶液，采用梯度洗脱：0min→10min→26min→44min→53min→58min→63min→65min，乙腈：12％→16％→16％→28％→30％→50％→50％→12％，体积比浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，其特征在于，通过建立黄刺玫不同极性提取物的HPLC指纹图谱，标定共有特征峰，通过谱效数学模型评价黄刺玫中化学成分的抗血栓作用。

【技术特征摘要】
1.一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，其特征在于，通过建立黄刺玫不同极性提取物的HPLC指纹图谱，标定共有特征峰，通过谱效数学模型评价黄刺玫中化学成分的抗血栓作用。2.如权利要求1所述的一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，其特征在于，其步骤如下：1)采用现代提取技术制备黄刺玫的不同极性的组分；2)采用高效液相色谱法(HPLC)-二极管阵列检测器(DAD)技术建立黄刺玫指纹图谱；3)标定共有峰，提取特征峰数据；4)对不同极性提取物进行抗血小板聚集和抗凝血实验；5)将指纹图谱特征峰数据和药效活性数据经化学计量学方法进行统计分析，评价黄刺玫中化学成分的药效活性。3.如权利要求1所述的一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，其特征在于，黄刺玫提取物制备方法为：第一步、取适量黄刺玫适当粉碎，精密称取6份粗粉，每份100g，置于圆底烧瓶中；第二步、分别向上述圆底烧瓶中加入10倍量体积的水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇和90％乙醇；第三步、回流提取1h，提取两次；第四步、滤过，合并滤液，滤液经回收溶剂；第五步、真空干燥，制得干燥提取物。4.如权利要求1-3任一项所述的一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，其特征在于，黄刺玫提取物经大孔树脂层析柱纯化方法为：第一步、称取回收溶剂干燥样品适量；第二步、用水溶解后上大孔树脂吸附柱，分别以40％、60％、80％乙醇溶液洗脱；第三步、收集各洗脱部位，经回收溶剂、真空干燥，制得干燥提取物。5.如权利要求1或2所述的一种基于抗血栓谱效关系的黄刺玫化学成分评价方法，其特征在于，建立黄刺玫HPLC指纹图谱的条件：色谱柱采用十八烷基键合硅胶填料；流动相为：A为乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨莹莹，阮文辉，
申请(专利权)人：山西省医药与生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：山西,14