一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法技术

本发明专利技术涉及一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法，先取粉碎后的烟末用氯仿进行索氏抽提，得到抽提液，将抽提液浓缩后干燥得到提取物；用二氯甲烷溶解提取物，得到混合液，然后向混合液中加入正己烷，静置后分离出上清液和底部不溶的沥青质；将上清液过装填好的色谱柱，并依次用正己烷、二氯甲烷和甲醇冲洗，分别得到非极性馏分、弱极性馏分和强极性馏分，完成烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离。本发明专利技术采用柱层析分离技术，将提取物分为非极性、弱极性和强极性三个馏分，使检测成分简单化，降低了复杂样品对设备的污染，克服了传统分析方法中的许多微组分由于被其主要组分覆盖而无法检测出来的不足，减少了谱图解析的干扰。

【技术实现步骤摘要】
一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法
本专利技术属于烟草化学
，具体涉及一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法。
技术介绍
烟草类脂物是烟叶表面物质的重要组成部分，化学成份复杂，其中的特征化学成份与烟草特有香气和吃味品质密切相关。因此，针对烟草类脂物中特征化学成分的有效分离进行研究，对烟叶品质评价、配方研究、工艺生产都有十分重要的意义。目前，烟草类脂物分析前处理方法有：样品直接进样、提取物直接进样等方法。这些方法普遍存在进样成份复杂、设备污染较大、谱图解析干扰多等不足，不能全面正确地反映烟叶质量。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法，将烟草类脂物依据极性进行精细分离，使检测成分简单化，能够较全面地反映烟叶质量。为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：包括以下步骤：(1)取粉碎后的烟末用氯仿进行索氏抽提，得到抽提液，将抽提液浓缩后干燥得到提取物；(2)用二氯甲烷溶解步骤(1)得到的提取物，得到混合液，然后向混合液中加入正己烷，静置后分离出上清液和底部不溶的沥青质；(3)将上清液过装填好的色谱柱，并依次用正己烷、二氯甲烷和甲醇冲洗，分别得到非极性馏分、弱极性馏分和强极性馏分，完成烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离。进一步地，步骤(1)的索氏抽提中，粉碎后的烟末用氯仿抽提过的干燥滤纸包好，再用氯仿进行索氏抽提，粉碎后的烟末和氯仿的质量体积比为(5～7)g：(300～350)mL。进一步地，步骤(1)的索氏抽提是在70～80℃进行抽提20～24h，抽提过程中采用5～10℃的循环冷却水。进一步地，步骤(1)中氯仿和抽提液浓缩后的体积比是(300～350)：(10～15)；抽提液浓缩后，先在30～40℃干燥2～4h，再冷却至室温得到提取物。进一步地，步骤(2)中，二氯甲烷和步骤(1)中粉碎后的烟末的比为(2～5)mL：(5～7)g。进一步地，步骤(2)的混合液中先加入正己烷，静置萃取4～24h后分离上清液，向剩余的萃取液中再加入正己烷，重复静置分离过程两次，将三次所得上清液合并，底部不溶的物质为沥青质；每次加入的正己烷和步骤(1)中粉碎后的烟末的比为(25～35)mL：(5～7)g。进一步地，步骤(3)中采用湿法填柱，先加用二氯甲烷抽提过的脱脂棉，捣实后用正己烷润湿；然后按硅胶和氧化铝的高度比为(2～4)：(1～3)装填到柱子中，硅胶和氧化铝的总高度为20～25cm。进一步地，硅胶和氧化铝均先经过氯仿抽提；其中，硅胶的粒径为80～100目，氯仿抽提24h，120℃烘干过夜；氧化铝的粒径为100～200目，氯仿抽提24h，350℃烘干4h。进一步地，步骤(1)中的粉碎后的烟末和步骤(3)中正己烷、二氯甲烷和甲醇之间的比例为(5～7)g：(200～300)mL：(80～120)mL：(180～220)mL。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：烟草粗提取物由挥发性、半挥发性、难挥发性物质组成。难挥发性物质进入设备，必会滞留于设备中，造成设备污染，减低设备灵敏度，干扰检测结果；相比较于提取物直接进样，本专利技术采用柱层析分离技术，将提取物分为非极性、弱极性和强极性三个馏分，分别进行处理，上机检测，使检测成分简单化，降低了复杂样品对设备的污染，克服了传统分析方法中的许多微组分由于被其主要组分覆盖而无法检测出来的不足。本专利技术减少了谱图解析的干扰，使烟草中有机成分的分析系统和完整化，能够应用到烟草类脂物分析研究中，来评价不同质量烟叶的内在品质。附图说明图1是烟草中可溶有机物的提取及“族组成柱色层分离”技术路线流程图；图2是样品直接进样法测定对比例1样品的色谱(TIC)图；图3是样品提取物直接进样直接进样法测定对比例1样品的色谱(TIC)图；图4是本专利技术中采用气相色谱质谱联用法测定实施例1样品的非极性色谱(TIC)图；图5是本专利技术中采用气相色谱质谱联用法测定实施例1样品的弱极性色谱(TIC)图；图6是本专利技术中采用气相色谱质谱联用法测定实施例1样品的强极性色谱(TIC)图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术做进一步详细说明。参见图1，本专利技术的具体步骤如下：1.仪器、试剂水浴锅；循环冷却仪；旋转蒸发仪；索氏抽提器；层析柱；烧杯200mL；脱脂棉；烘箱；分析天平。氯仿(色谱纯)；甲醇(色谱纯)；正己烷(色谱纯)；二氯甲烷(色谱纯)；硅胶(80～100目，氯仿抽提24h，120℃烘干过夜)；氧化铝(100～200目，氯仿抽提24h，350℃烘干4h)2.样品提取准确称取粉碎后的烟末5～7g，用氯仿抽提过的干燥滤纸包好放入索氏抽提器内，用300～350mL色谱纯氯仿在70～80℃进行索氏抽提20～24h(循环冷却水5～10℃)，将提取液浓缩至10～15mL，转移至200mL烧杯中，于30～40℃烘箱中干燥2～4h后，在干燥皿中冷却至室温。称重待用。3.沥青质分离在2中提取物中加入2～5mL二氯甲烷，加热并摇动使其完全溶解。然后加入25～35mL正己烷，静置4～24h，待分层明显，上清液澄清透明，小心倾出上部清液待用，再在萃取液中加入25～35mL正己烷静置，取上清液合并到第一次的上清液中，如此三次，底部不溶的物质即为沥青质，最后将沥青质干燥称重，上清液留待过柱子。4.柱层析分离4.1填充柱子。本专利技术均采用湿法填柱，先在柱子的底部放入高度为1～2cm脱脂棉(用二氯甲烷抽提过的)，用玻璃棒捣实，加正己烷润湿。硅胶和氧化铝用正己烷浸泡过夜，按硅胶：氧化铝＝4:1或3:1或3：2或2:3的比例装入20～25cm高的填料(下部氧化铝，上部硅胶)，洗耳球轻敲柱壁使其填充密实，保持溶剂沒过硅胶表面，待柱子中正己烷液面下降至稍微沒过硅胶表面，即可上样。4.2洗脱非极性馏分。根据2中提取液干燥后的重量及沥青质的重量计算出上清液中可溶物的重量，取一定体积的上清液(含180～220mg可溶物)上柱子，用正己烷冲洗装上清液的容器三遍，一并倒入，待样品全部走完后，再用大量的正己烷冲洗，用量控制在200～300mL，此时收集到的馏分为非极性馏分，收集完毕后上旋蒸，浓缩到3～5mL，转移至已称重过的干净称量瓶中，干燥称重，计算非极性馏分的重量。正己烷复溶，定溶。上GCMS检测。4.3洗脱弱极性馏分。在柱子中继续加入80～120mL左右的二氯甲烷，此时收集到的馏分为弱极性馏分，收集完毕后上旋蒸，浓缩到3～5mL，转移至已称重过的干净称量瓶中，干燥称重，计算弱极性馏分的重量。二氯甲烷复溶，定溶。上GCMS检测。4.4洗脱强极性馏分。在柱子中继续加入180～220mL左右的甲醇，此时收集到的馏分为强极性馏分，收集完毕后上旋蒸，浓缩到3～5mL，转移至已称重过的干净称量瓶中，干燥称重，计算强极性馏分的重量。甲酯化处理样品，上GCMS检测。下面通过具体的实施例对本专利技术做进一步详细说明。对比例1采用烟叶样品，通过样品直接进样法上GCMS检测，采集结果如图2。采用烟叶样品，通过下述实施例1相同的提取步骤获得样品提取物，通过样品直接进样法上GCMS检测，采集结果如图3。实施例1以陕西B3L烟叶样品为例，进行详细说明：1.样品提取准确称取粉碎后的烟末6.0084g，用氯仿抽提过的干燥滤纸分2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)取粉碎后的烟末用氯仿进行索氏抽提，得到抽提液，将抽提液浓缩后干燥得到提取物；(2)用二氯甲烷溶解步骤(1)得到的提取物，得到混合液，然后向混合液中加入正己烷，静置后分离出上清液和底部不溶的沥青质；(3)将上清液过装填好的色谱柱，并依次用正己烷、二氯甲烷和甲醇冲洗，分别得到非极性馏分、弱极性馏分和强极性馏分，完成烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离。

【技术特征摘要】
1.一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)取粉碎后的烟末用氯仿进行索氏抽提，得到抽提液，将抽提液浓缩后干燥得到提取物；(2)用二氯甲烷溶解步骤(1)得到的提取物，得到混合液，然后向混合液中加入正己烷，静置后分离出上清液和底部不溶的沥青质；(3)将上清液过装填好的色谱柱，并依次用正己烷、二氯甲烷和甲醇冲洗，分别得到非极性馏分、弱极性馏分和强极性馏分，完成烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离。2.根据权利要求1所述的一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法，其特征在于：步骤(1)的索氏抽提中，粉碎后的烟末用氯仿抽提过的干燥滤纸包好，再用氯仿进行索氏抽提，粉碎后的烟末和氯仿的质量体积比为(5～7)g：(300～350)mL。3.根据权利要求1所述的一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法，其特征在于：步骤(1)的索氏抽提是在70～80℃进行抽提20～24h，抽提过程中采用5～10℃的循环冷却水。4.根据权利要求1所述的一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法，其特征在于：步骤(1)中氯仿和抽提液浓缩后的体积比是(300～350)：(10～15)；抽提液浓缩后，先在30～40℃干燥2～4h，再冷却至室温得到提取物。5.根据权利要求1所述的一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：王瑶，彭军仓，邓宝安，康世平，张萌萌，张凤侠，樊亚玲，吕娟，付瑜，
申请(专利权)人：陕西中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61