【技术实现步骤摘要】
一种玻璃酸酶精品的提取方法
本专利技术涉及一种玻璃酸酶精品的提取方法。
技术介绍
玻璃酸酶是由哺乳动物如牛、羊睾丸提取或微生物发酵制得的糖苷内切酶。玻璃酸酶催化透明质酸等酸性黏多糖水解,产生以丁糖为主的偶寡糖,使透明质酸的黏滞性明显下降,从而降低组织黏度,提高毛细血管和组织的通透性,加速细胞内外物质的扩散,是一种重要的药物扩散剂。Fe2+、Cu2+离子对酶有可逆抑制作用。Pb2+、Hg2+、Ni2+、等离子对酶活性没有明显影响。在氯化钠(0.15mol/L)或硫酸鱼精蛋白的存在下,硫酸软骨素B(皮肤素)、硫酸类肝素、硫酸角质素、肝素钠及高浓度玻璃酸对玻璃酸酶的抑制作用可被逆转。玻璃酸酶为白色无定形粉末或颗粒,易溶于水,不溶于丙酮、乙醇和乙醚。最适pH值4.0~7.5。玻璃酸酶液态常温可稳定24h,5℃以下可稳定一周,100℃加热30min失活。玻璃酸酶稳定性较好,42℃持续加热60min活力不损失,100℃持续加热5min活力可保留80%。在低浓度的水溶液中较易失活,一般可用明胶或阿拉伯胶保护防止失活。药用玻璃酸酶为白色或微黄色粉末,无气味,易溶于水,不溶于丙酣、乙醋、乙醇等有机溶剂。生化制药主要用牛、羊睾丸为原料进行提取制备。玻璃酸酶根据其种类、分子量大小、最适pH值、降解底物的机理不同,分离提取方法有很多,如色谱法,乙醇法等等,例如国内传统工艺是用酸液溶解和硫酸铵盐析的方法来提取玻璃酸酶粗品,粗品经透析、冻干得玻璃酸酶精品的。但在提纯过程中损耗较大,也缺乏去病毒的工艺验证;产品的效价通常仅能达到320IU/mg,效价低,杂质含量高。随着国家药品标准对生 ...
【技术保护点】
1.一种玻璃酸酶精品的提取方法,其特征在于,其包括下列步骤:(1)预处理:在0‑10℃下将玻璃酸酶粗品与水混合,之后调节pH至4.0‑5.0;(2)透析:将步骤(1)得到的溶液用水进行透析,所述透析用的透析纸的截留分子量不大于10K;(3)去细菌内毒素:S1:在0‑10℃下将步骤(2)得到的透析液离心得上清液,之后依次加入磷酸三钠水溶液和乙酸钙水溶液,用氢氧化钠调节pH至8.0‑9.0;S2:将S1中得到的溶液在0‑10℃下离心,之后取上清液与活性炭混合;S3:将S2中得到的溶液在0‑10℃下离心得上清液,之后依次加入磷酸三钠水溶液和乙酸钙水溶液,然后调节pH至8.0‑9.0;其中,S1中和S3中的所述磷酸三钠水溶液的浓度均为0.3mol/L‑0.6mol/L,S1中和S3中的所述乙酸钙水溶液的浓度均为0.8mol/L‑1.1mol/L;(4)去病毒:将步骤(3)得到的溶液进行抽滤,之后调节pH至6.0‑8.0,然后进行过滤取滤液,之后采用纳米膜进行过滤即可;其中,所述抽滤和所述过滤均采用铺有滑石粉的漏斗进行,所述纳米膜的孔径为10‑20nm。
【技术特征摘要】
1.一种玻璃酸酶精品的提取方法,其特征在于,其包括下列步骤:(1)预处理:在0-10℃下将玻璃酸酶粗品与水混合,之后调节pH至4.0-5.0;(2)透析:将步骤(1)得到的溶液用水进行透析,所述透析用的透析纸的截留分子量不大于10K;(3)去细菌内毒素:S1:在0-10℃下将步骤(2)得到的透析液离心得上清液,之后依次加入磷酸三钠水溶液和乙酸钙水溶液,用氢氧化钠调节pH至8.0-9.0;S2:将S1中得到的溶液在0-10℃下离心,之后取上清液与活性炭混合;S3:将S2中得到的溶液在0-10℃下离心得上清液,之后依次加入磷酸三钠水溶液和乙酸钙水溶液,然后调节pH至8.0-9.0;其中,S1中和S3中的所述磷酸三钠水溶液的浓度均为0.3mol/L-0.6mol/L,S1中和S3中的所述乙酸钙水溶液的浓度均为0.8mol/L-1.1mol/L;(4)去病毒:将步骤(3)得到的溶液进行抽滤,之后调节pH至6.0-8.0,然后进行过滤取滤液,之后采用纳米膜进行过滤即可;其中,所述抽滤和所述过滤均采用铺有滑石粉的漏斗进行,所述纳米膜的孔径为10-20nm。2.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)中,在5-6℃下将玻璃酸酶粗品与水混合;步骤(1)中,所述水为纯化水;步骤(1)中,所述混合为搅拌;步骤(1)中,所述调节pH采用盐酸进行;和/或,步骤(1)中,所述pH为4.5-4.8。3.如权利要求2所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)中,所述水为去离子水;步骤(1)中,所述搅拌的时间为2-4小时,较佳地为3小时;步骤(1)中,所述盐酸的浓度为0.4-5mol/L,较佳地为2mol/L;和/或,步骤(1)中,所述pH为4.6。4.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(2)中,所述水为去离子水;步骤(2)中,所述透析的过程为将步骤(1)得到的所述玻璃酸酶粗品的水溶液用所述透析纸进行扎包,之后置于去离子水中;和/或,步骤(2)中,所述透析的时间为48-72小时。5.如权利要求4所述的提取方法,其特征在于,所述去离子水的用量为80-100L;所述透析的时间为55-60小时;和/或,所述透析纸扎包的体积为每包200-250mL。6.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(3)的S1中,所述离心的时间为20-40min,较佳地为30min;步骤(3)的S1中,所述离心的温度为4℃;步骤(3)的S1中,所述离心的转速为3000-5000r...
【专利技术属性】
技术研发人员:孙源远,汪雅雯,黄臻辉,丁金国,刘弘忍,周辉,
申请(专利权)人:上海上药第一生化药业有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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