本发明专利技术提供了一种小白菜游离小孢子诱导培养基，其配方含有KNO3、MgSO4∙7H2O、KH2PO4、Ca(NO3)2∙4H2O、Na2‑EDTA、FeSO4∙7H2O、MnSO4∙4H2O、NiNO3、H3BO3、ZnSO4∙7H2O、KI、Na2MoO4∙2H2O、CuSO4∙5H2O、CoCl2∙6H2O、RNA‑Na、氯化2‑羟乙基三甲铵、L‑谷氨酰胺、维生素B1、维生素B6、烟酸、叶酸、生物素、肌醇、甘氨酸、L‑谷胱甘肽、甲基亚硝基脲、蔗糖、植物凝胶、6‑BA、NAA、聚乙二醇、水解蛋白、活性炭和植物硫化激动素PSK‑α。该培养基可以大大提高小白菜游离小孢子胚性愈伤组织诱导效率。
A medium for free microspore induction in Pakchoi
The invention provides a medium for free microspore induction culture of Chinese cabbage, which contains KNO3, MgSO4 7H2O, KH2PO4, Ca (NO3) 2 4H2O, Na2 EDTA, FeSO4, 7H2O, MnSO4. Glutamine, vitamin B1, vitamin B6, nicotinic acid, folic acid, biotin, inositol, glycine, L, glutathione, methyl nitrourea, sucrose, plant gel, 6 BA, NAA, PEG, hydrolyzed protein, activated carbon and plant vulcanized agonist PSK alpha. The medium could greatly improve the induction efficiency of Isolated Microspore Embryogenic Callus in Pakchoi.
【技术实现步骤摘要】
一种小白菜游离小孢子诱导培养基配方
本专利技术涉及一种小白菜游离小孢子诱导培养基配方，具体涉及一种可以大大提高小白菜游离小孢子胚性愈伤组织诱导效率、具有重要应用价值的小白菜游离小孢子诱导培养基配方，属于蔬菜培育高新
技术介绍
小白菜（BrassicacampestrisL.ssp.chinensis）属于十字花科芸薹属芸薹种白菜亚种，又称不结球白菜、青菜、小油菜，包括白菜（普通白菜）、菜心、乌塌菜、薹菜等多个变种，原产我国，是我国各地普遍栽培的蔬菜作物。由于其食用性强，营养丰富，品质优良，风味各异，深受人们喜爱，而且小白菜生产期短，适应性强，生产成本低，可常年栽培，周年供应，生产采收方便，在各大中城市蔬菜市场上占有重要位置。近年来，东南亚及欧美的一些国家也广泛引种，已逐渐成为世界性蔬菜。随着小白菜国际国内市场需求的紧俏，优质、抗病、丰产的小白菜良种培育成为蔬菜培育科研人员的研究主题之一。小白菜是异花授粉植物，杂交优势非常明显，目前主要采用杂交育种方法进行小白菜新品种培育。传统杂交育种方法存在周期长、效率低等突出问题，育成一个稳定优良自交系一般需要6-8年，甚至更长时间，选育自交系非常费事、费工。近年来随着人工成本的增加，常规育种的不足在实际工作中日渐明显。因此，迫切需求小白菜育种的新途径和新方法。近几年来随着单倍体育种在芸苔属农作物上的应用研究,充分证明单倍体育种与常规多代自交获得纯系相比，具有周期短、效率高、纯系稳定等特点。游离小孢子培养是单倍体育种技术中快速获得纯系的一种有效方法，同单倍体育种技术中的花药培养相比，游离小孢子培养消除了小孢子和花药壁、级链层细胞之间可能存在的营养竞争，往往培养成功的基因型多，胚状体诱导频率也高，同时去除了花药壁、级链层细胞等体细胞再生植株的干扰，从而可以提高选择的准确性，提高育种效率和品种质量。在芸薹属作物中，先后对油菜、芥菜、甘蓝、大白菜、小白菜和花椰菜等进行了游离小孢子培养并获得了再生植株。国内外学者对影响芸薹属作物游离小孢子培养的一些因素进行了研究，取得了显著的进展，通过优化培养基和改进培养方法，使部分材料小孢子胚诱导率有了提高。小白菜游离小孢子培养最早见于曹鸣庆等的报道，通过游离小孢子培养首先获得了小白菜小孢子胚状体，李岩等和蒋武生等获得了类似的结果，此后相关报道甚少。但是近年来小白菜游离小孢子培养研究进展缓慢，利用这项技术进行小白菜育种的研究鲜见报道，主要原因是小孢子胚性愈伤诱导率低而不稳定，直接限制了小白菜游离小孢子培养技术在育种上的应用。培养基是游离小孢子培养的物质基础，直接关系到小孢子的生长与分化，培养基组分对小孢子的刺激和启动，是游离小孢子能否诱导成功的最关键的因素。培养基组分的合适配比，可显著影响小孢子诱导效率，一些有机和无机添加物，可以显著提高小孢子诱导效率。目前有研究发现，相对于禾本科和茄科作物，低离子浓度的基本培养基配方对十字花科小孢子诱导更加有利，活性炭等一些添加物可以显著提高小白菜游离小孢子的诱导能力。因此，继续优化组合基本培养基配比，发掘和试验针对于提高小白菜游离小孢子成胚诱导能力的有机无机添加物，是建立小白菜游离小孢子高效诱导培养体系的关键。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可以大大提高小白菜游离小孢子胚性愈伤组织诱导效率、具有重要应用价值的小白菜游离小孢子诱导培养基配方。本专利技术的目的是通过以下技术方案解决的：一种小白菜游离小孢子诱导培养基配方，其特征在于：该培养基的配方如下：KNO356-64mg/L，MgSO4∙7H2O60-65mg/L，KH2PO465-70mg/L，Ca(NO3)2∙4H2O200-250mg/L，Na2-EDTA11-14mg/L，FeSO4∙7H2O12-15mg/L，MnSO4∙4H2O23-27mg/L，NiNO370-90mg/L，H3BO38.0-8.5mg/L，ZnSO4∙7H2O8.5-9.5mg/L，KI0.4-0.45mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.2-0.3mg/L，CuSO4∙5H2O0.02-0.03mg/L，CoCl2∙6H2O0.02-0.03mg/L，RNA-Na0.2-0.3g/L，氯化2-羟乙基三甲铵130～150mg/L，L-谷氨酰胺450-550mg/L，维生素B10.45-0.55mg/L，维生素B60.45-0.55mg/L，烟酸4.5-5.5mg/L，叶酸0.04-0.06mg/L，生物素0.04-0.06mg/L，肌醇140-180mg/L，甘氨酸3.5-4.5mg/L，L-谷胱甘肽27-33mg/L，甲基亚硝基脲1.2-1.8g/L，蔗糖120-140g/L，植物凝胶3.0-3.5g/L，6-BA0.15-0.25mg/L，NAA0.3-0.4mg/L，聚乙二醇0.14-0.18g/L，水解蛋白1.3-1.7g/L，活性炭0.015-0.025g/L，植物硫化激动素PSK-α40-50pmol/L，pH5.3-5.5。本专利技术相比现有技术有如下优点：本专利技术根据禾本科和茄科小孢子诱导培养基配方，针对于小白菜游离小孢子的孢子体发育特性，继续优化并组合基本培养基配比，低离子浓度基本培养基的组配，有利于小白菜游离小孢子的诱导；采用低含量的植物凝胶，使配制成的培养基半固体化，对小白菜游离小孢子的诱导更有利；发掘和试验针对于提高小白菜游离小孢子成胚诱导能力的有机添加物和无机添加物，NiNO3、RNA-Na、氯化2-羟乙基三甲铵、L-谷氨酰胺、叶酸、生物素、L-谷胱甘肽、甲基亚硝基脲、聚乙二醇、水解蛋白、活性炭、植物硫化激动素PSK-α等物质的合适浓度的添加，均不同程度的提高了小白菜游离小孢子的诱导率；6-BA和NAA植物激素的复配，显著提高了小白菜游离小孢子的诱导能力。本专利技术所提供的小白菜游离小孢子诱导培养基，是在现有研究发现基础之上进一步创造性改良的成果，是经过大量单因子、多因子试验所筛选的最优组合，我们进行了大量的实验研究亦得出本专利技术的组分配比是最优的。采用本专利技术所提供的培养基可以大大提高游离小白菜小孢子胚性愈伤组织的诱导效率，因此具有较高的产业推广价值。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明。一种小白菜游离小孢子诱导培养基配方，其特征在于：该培养基的配方如下：KNO356-64mg/L，MgSO4∙7H2O60-65mg/L，KH2PO465-70mg/L，Ca(NO3)2∙4H2O200-250mg/L，Na2-EDTA11-14mg/L，FeSO4∙7H2O12-15mg/L，MnSO4∙4H2O23-27mg/L，NiNO370-90mg/L，H3BO38.0-8.5mg/L，ZnSO4∙7H2O8.5-9.5mg/L，KI0.4-0.45mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.2-0.3mg/L，CuSO4∙5H2O0.02-0.03mg/L，CoCl2∙6H2O0.02-0.03mg/L，RNA-Na0.2-0.3g/L，氯化2-羟乙基三甲铵130～150mg/L，L-谷氨酰胺450-550mg/L，维生素B10.45-0.55mg/L，维生素B60.45-0.55mg/L，烟酸4.5-5.5mg/L，叶酸0.04-0.0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种小白菜游离小孢子诱导培养基配方，其特征在于：该培养基的配方如下：KNO3 56‑64mg/L，MgSO4∙7H2O 60‑65mg/L，KH2PO4 65‑70mg/L，Ca(NO3)2∙4H2O 200‑250mg/L，Na2‑EDTA 11‑14mg/L，FeSO4∙7H2O 12‑15mg/L，MnSO4∙4H2O 23‑27mg/L，NiNO3 70‑90mg/L，H3BO3 8.0‑8.5mg/L，ZnSO4∙7H2O 8.5‑9.5mg/L，KI 0.4‑0.45mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.2‑0.3mg/L，CuSO4∙5H2O 0.02‑0.03mg/L，CoCl2∙6H2O 0.02‑0.03mg/L，RNA‑Na 0.2‑0.3g/L，氯化2‑羟乙基三甲铵 130～150mg/L，L‑谷氨酰胺 450‑550mg/L，维生素B1 0.45‑0.55mg/L，维生素B6 0.45‑0.55mg/L，烟酸 4.5‑5.5mg/L，叶酸 0.04‑0.06mg/L，生物素 0.04‑0.06mg/L，肌醇 140‑180mg/L，甘氨酸 3.5‑4.5mg/L，L‑谷胱甘肽 27‑33mg/L，甲基亚硝基脲 1.2‑1.8g/L，蔗糖 120‑140g/L，植物凝胶 3.0‑3.5g/L，6‑BA 0.15‑0.25mg/L，NAA 0.3‑0.4mg/L，聚乙二醇 0.14‑0.18g/L，水解蛋白 1.3‑1.7g/L，活性炭 0.015‑0.025g/L，植物硫化激动素PSK‑α 40‑50pmol/L，pH 5.3‑5.5。...
【技术特征摘要】
1.一种小白菜游离小孢子诱导培养基配方，其特征在于：该培养基的配方如下：KNO356-64mg/L，MgSO4∙7H2O60-65mg/L，KH2PO465-70mg/L，Ca(NO3)2∙4H2O200-250mg/L，Na2-EDTA11-14mg/L，FeSO4∙7H2O12-15mg/L，MnSO4∙4H2O23-27mg/L，NiNO370-90mg/L，H3BO38.0-8.5mg/L，ZnSO4∙7H2O8.5-9.5mg/L，KI0.4-0.45mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.2-0.3mg/L，CuSO4∙5H2O0.02-0.03mg/L，CoCl2∙6H2O0.02-0.03mg/L，RNA-Na0.2-0.3g/L，氯化...
【专利技术属性】
技术研发人员：张瑞明，
申请(专利权)人：张瑞明，
类型：发明
国别省市：山东,37
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