一种藻蓝蛋白纳米制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂及其制备方法。采用的技术方案是：包括以下原料按重量份配比制成：藻蓝蛋白2‑4份、丹参酮2‑4份、羧甲基壳聚糖1‑2份、脂溶性乳化剂20‑100份、水溶性乳化剂50‑150份、表面活性剂50‑250份。本发明专利技术将两个药物先制备成复合纳米乳后，再利用离子交联法制备羧甲基壳聚糖纳米球制剂，对其处方工艺及理化性质进行优化和考察，制备出性质优良的纳米结构载体，具有逆转肿瘤细胞多药耐药作用。 1

A kind of cyanoprotein nanoscale preparation and its preparation method

The invention relates to carboxymethyl chitosan nanospheres loaded with phycocyanin and tanshinone and a preparation method thereof. The technical scheme is as follows: the following materials are made up of the following raw materials according to the weight ratio: phycocyanin 2, 4 parts of tanshinone 2, 2 carboxymethyl chitosan 1, 100 fat soluble emulsifier 20, 150 water soluble emulsifier, 150 water soluble emulsifier and 50 surfactant of surfactant. After the preparation of two drugs into composite nanoscale, carboxymethyl chitosan nanospheres were prepared by ion crosslinking method. The formulation process and physicochemical properties were optimized and investigated. The nano structure carrier with excellent properties was prepared, and it could reverse the multidrug resistance of tumor cells. One

【技术实现步骤摘要】
一种藻蓝蛋白纳米制剂及其制备方法
本专利技术属于中药学领域，具体涉及一种负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂及其制备方法。
技术介绍
近年来，虽然各种新型化疗药物不断被研发出来，但是整个癌症邻域的治疗效果并没有得到改善，终其原因就是肿瘤细胞的自我保护机制导致其产生了耐药性，通过转运蛋白的外排自动将化疗药物泵出，导致有效药量减少，无法达到治疗效果，所以肿瘤细胞的多药耐药性质(MDR)是导致肿瘤化疗失败的最主要原因，因此在研发抗肿瘤药物时，应该考虑到相应的逆转肿瘤多药耐药药物的研究。藻蓝蛋白(C-PC)是从藻蓝蛋白中分离出的一种深蓝色粉末，其颜色鲜艳，是自然界中少见的色素蛋白之一，营养丰富，其氨基酸组成非常齐全，必需氨基酸的含量很高，藻蓝蛋白不仅具有抗癌、逆转癌细胞的耐药性、抗氧化、清除自由基、促进血细胞再生和促使人体内合成弹力蛋白等功效，它还并有荧光，可作为生物学、细胞学一些光动力学的研究试剂。藻蓝蛋白可以帮助调节、合成人体代谢所需要的多种重要的酶，对抑制癌细胞的生长和促进人体细胞再生、保养卵巢具有重要作用，同时藻蓝蛋白调节人体免疫系统，增强免疫系统功能，提高人体对疾病的抵抗力。因此，藻蓝蛋白被食品专家形象地誉为″食物钻石″。1986年，由日本康派艾滋病研究所研制、CONFIDENCE藻类营养食品公司生产的康派奇(confident)藻蓝蛋白素作为癌症患者、白血病患者等的康复药品和营养食品，取得突出的配合疗效。但是藻蓝蛋白对光、热、酸等不稳定。在弱酸性和中性下稳定(pH4.5～8)，酸性(pH4.2)时会发生沉淀，强碱可至脱色。所以在制作成药物剂型时，应充分考虑到这一点。丹参酮(Tanshinone)是从丹参(radixsalviaemiltiorrhizae)中提取的脂溶性菲醌类成分，包括丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、隐丹参酮、二氢丹参酮等。是作为对肿瘤细胞具有毒作用机制的代表性抗肿瘤中药单体，研究表明，丹参酮可对多种肿瘤细胞产生细胞毒作用，并可诱导肿瘤细胞分化和凋亡，抑制肿瘤细胞转移，还可降低端粒酶活性。羧甲基壳聚糖纳米球(CMCNP)是壳聚糖的衍生物，是一种具有很好生物相容性的高分子材料，具有很好的水溶性，可作为良好的药物载体材料应用于医药领域，并且它可以生物降解，以亲水性材料壳聚糖作为载体，可以解决药物溶出慢、重复性差、载药率低、生物利用度低和靶向性差等问题，同时将藻蓝蛋白包合起来可以提高其对光、热、酸的稳定性，又因为藻蓝蛋白自身具有荧光效果，制成新剂型后可以直接利用活体成像仪检测给药后的不同时间点的体内组织分布。中国专利技术专利CN201710989606.6公开了“一种藻蓝蛋白配制酒及其制备方法”该专利技术所述添加物包含藻蓝蛋白、党参、灵芝、佛手、枳椇子和葛根；中国专利技术专利CN201710809951.7公开了“一种丹参酮IIA羟基磷灰石固体分散体及其制备方法”，该固体分散体以丹参酮IIA为活性成分，以羟基磷灰石为固体载体，用95％乙醇超声溶解或分散均匀，进行喷雾冷冻干燥而得。目前未见藻蓝蛋白与丹参酮组合物制备成纳米结构载体，未见藻蓝蛋白与丹参酮组合物及其纳米结构载体在逆转肿瘤多药耐药中应用报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于将藻蓝蛋白与丹参酮制备成壳聚糖纳米球载体，对其处方工艺及理化性质进行优化和考察，制备出性质优良的纳米结构载体，体现逆转肿瘤多药耐药作用。本专利技术采用的技术方案是：一种负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂，包括以下原料按重量份配比制成：所述脂溶性乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油EL或大豆卵磷脂中的一种或两种混合。所述水溶性乳化剂为牛胆酸钠或泊洛沙姆中的一种或二种的混合。所述表面活性剂为吐温80。所述泊洛沙姆为泊洛沙姆407、泊洛沙姆338或泊洛沙姆188；优选泊洛沙姆407。上述的负载藻蓝蛋白和丹参酮羧甲基壳聚糖纳米球制剂的制备方法如下：1)将丹参酮和脂溶性乳化剂同时加入有机溶剂中，45-75℃水浴加热溶解，搅拌使分散均匀后，将表面活性剂缓慢加入，继续45-75℃水浴中加热搅拌使分散均匀，作为油相；所述有机溶剂为无水乙醇；2)将藻蓝蛋白和水溶性乳化剂溶于适量注射用水中，45-75℃水浴加热溶解，搅拌均匀，作为外水相；3)在800-1500r/min搅拌下，将少量外水相缓慢注入油相中，搅拌20-30min，形成初乳；4)在800-1500r/min搅拌下，将剩余的外水相缓慢注入油相中，充分搅拌乳化形成水包油型复乳；5)在10ml羧甲基壳聚糖(CMC)溶液中加入5ml制得的复乳，不断搅拌5-10min，加入3-5ml二氯化钙溶液，继续搅拌20-30min，10000-12000g离心20min，取沉淀，蒸馏水洗涤三次后重悬，得液相负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂；优选的，所述二氯化钙溶液浓度为1.5mg/ml；所述羧甲基壳聚糖(CMC)溶液浓度为1.5mg/ml；6)向液相负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂中加入冻干保护剂溶液，冻干，得固相负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂；优选的，所述冻干保护剂为质量百分比为10％的海藻糖溶液。本专利技术的有益效果是：本专利技术将藻蓝蛋白和丹参酮两种药物采用纳米结构载体(CMCNP)进行负载，制成一种新型纳米给药体系，由于亲水性壳聚糖纳米球无法实现对难溶性药物丹参酮的直接装载，所以在用羧甲基壳聚糖装载前，先将丹参酮与藻蓝蛋白做成水包油型的复乳，再利用离子交联法制备负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂。通过本专利技术的方法制备负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂(C-PC-T/CMCNP)为圆形或类圆形实体球，粒径为93.7±1.4nm，多分散系数为0.15±0.01，Zeta电位为-33.2±0.24mV，藻蓝蛋白和丹参酮的包封率均可达60％以上，体外释放实验结果显示，藻蓝蛋白药物溶液10h内基本全部释放完全，相反，丹参酮药物溶液体外释放率低，而制得的藻蓝蛋白和丹参酮羧甲基壳聚糖纳米球制剂则缓释效果良好，缓释12h累积缓释率超过70％，24小时后释放出95％药量，因此本专利技术的负载藻蓝蛋白和丹参酮羧甲基壳聚糖纳米球制剂具有很好缓释性能，即解决了藻蓝蛋白的突释问题，又解决了丹参酮释放慢问题。本专利技术，通过将藻蓝蛋白和丹参酮制备成羧甲基壳聚糖纳米球制剂，不仅可以提高生物利用度，且对肿瘤多药耐药有良好逆转效果。本专利技术通过藻蓝蛋白和丹参酮制备成复合纳米结构载体，两者联合使用能有效提高药物在肿瘤细胞内有效积累量，起到逆转肿瘤多药耐药作用，同时由于其剂型优势，可以减缓药物的排泄，达到缓释作用。本专利技术将藻蓝蛋白和丹参酮复合制备，并均得到50％以上的包封率，粒径在93nm左右，工艺可行，便于工业化生产。附图说明图1A是实施例1中空白调零溶液的紫外扫描图。图1B是实施例1中丹参酮溶液的紫外扫描图。图1C是实施例1中藻蓝蛋白溶液的紫外扫描图。图1D是实施例1中藻蓝蛋白和丹参酮羧甲基壳聚糖纳米球的两次紫外扫描图。图2是实施例1制备的藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球的透射电镜图。图3是实施例1制备的藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球的粒径分布图。图4是实施例1制备的藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球的Zeta电位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球的制剂，其特征在于，所述负载

【技术特征摘要】
1.一种负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球的制剂，其特征在于，所述负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂属于缓释制剂，制备方法如下：1)将丹参酮和脂溶性乳化剂同时加入有机溶剂中，45-75℃水浴加热溶解，搅拌使分散均匀后，将表面活性剂缓慢加入，继续45-75℃水浴中加热搅拌使分散均匀，作为油相；2)将藻蓝蛋白和水溶性乳化剂溶于适量注射用水中，45-75℃水浴加热溶解，搅拌均匀，作为外水相；3)在搅拌状态下，将少量外水相缓慢注入油相中，搅拌20-30分钟，形成初乳；4)在搅拌状态下，将剩余的外水相缓慢注入油相中，充分搅拌乳化形成水包油型复乳；5)在羧甲基壳聚糖溶液中加入适量制得的水包油型复乳，搅拌5-10分钟后，加入二氯化钙溶液，继续搅拌20-30分钟，以1000-1200转/分钟的速度离心20分钟，取沉淀，蒸馏水洗涤三次后重悬，得液相负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂；其中，以下各原料按重量份配比如下：藻蓝蛋白2-4份、丹参酮2-4份、羧甲基壳聚糖1-2份、脂溶性乳化剂20-100份、水溶性乳化剂50-150份、表面活性剂50-250份；所述脂溶性乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油EL或大豆卵磷脂中的一种或两种混合；所述水溶性乳化剂为牛胆酸钠或泊洛沙姆中的一种或二种的混合；所述表面活性剂为吐温80。2.一种负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂，其特征在于，所述负载藻蓝蛋白和丹参酮的羧甲基壳聚糖纳米球制剂为缓释制剂，制备方法如下：1)将丹参酮和脂溶性乳化剂同时加入有机溶剂中，45-75℃水浴加热...

【专利技术属性】
技术研发人员：王冰月，白莉，王琦，
申请(专利权)人：广州加原医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44