一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂及其制备方法，所述制剂包括含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞、外周血血浆蛋白和生理盐水。本发明专利技术利用含有女性特有染色体的干细胞可以治疗并预防由于男性雄激素水平过高引起的系列男性泌尿和生殖系统的良恶性肿瘤疾病。 1

Preparation containing female chromosome stem cells for treating male specific tumor and preparation method thereof

The present invention discloses a preparation and preparation method of a female chromosome stem cell for the treatment of a male specific tumor. The preparation includes an embryo derived mesenchymal stem cell containing a female XX chromosome, a peripheral blood plasma protein, and a physiological saline. The invention uses stem cells containing female endemic chromosomes to treat and prevent a series of benign and malignant tumors of the male urinary and reproductive system due to the high male androgen level. One

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂及其制备方法
本专利技术涉及生物医疗技术和应用领域，尤其是涉及一种包含女性XX染色体的干细胞经培养制备，用于治疗前列腺、阴茎、睾丸等男性所特有的良恶性肿瘤的制剂及其制备方法。
技术介绍
男性泌尿生殖系统肿瘤是危害男性健康治疗效果有限的性别疾病，特别是男性泌尿生殖系统癌，治疗方法有限，早期肿瘤有手术机会，但会造成器官功能丧失，治愈率有限。传统的手术治疗面临着手术意外、术后感染、菌血症、局部种植等风险。放射治疗对正常组织及重要器官的损害极大，而化学治疗同样面临着极其严重的毒副作用，如恶心、呕吐、脱发等。男性泌尿生殖系统肿瘤的发病机制主要与雄性激素受体过高相关，女性染色体细胞可以分泌或旁分泌特异性雌性激素等，以及一些细胞因子，以此来调节雄性激素等水平，在一定程度上能够起到激素平衡化，抑制男性疾病发展的作用。同时体内可兼容男性和女性染色体。现代治疗男科癌症的基本方法就是手术、放疗和化疗，手术可致器官缺如致畸；放化疗不仅对肿瘤组织有杀伤，而且对正常组织也有损伤，其过程痛苦给患者造成身心压力，因此寻求一种有效、无痛苦、最接近人体自然生物性状的细胞生物治疗方法，是目前男性特有疾病研究的热点。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述治疗局限性，本专利技术申请人提供了一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂及其制备方法。本专利技术利用的女性胚胎源骨髓间充质干细胞来源充足、生物活性强、增殖能力强、定向分化能力强、低或无免疫原性、制备简便、可连续培养、反复冻存复苏后仍保存生物的特性、高分化潜能，细胞同质性高，具有正常的核型和端粒酶活性。本专利技术利用含有女性特有染色体的干细胞来治疗和解决并预防由于男性雄激素水平过高引起的系列男性泌尿和生殖系统的疾病。本专利技术的技术方案如下：一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂，所述制剂包括含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞、外周血血浆蛋白和生理盐水。所述制剂中含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞的浓度为(1-3)×107个/mL，外周血血浆蛋白的用量为80～160ng/mL，余量为生理盐水，配成1mL制剂。所述含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞的制备方法为：(1)将检测合格的女性胚胎骨髓间充质干细胞放置在含血清的DMEM/F12培养基的培养瓶中培养，将培养瓶置于温度为37℃、饱和湿度、5％的CO2浓度的培养箱内开始培养，每2～3天更换一次培养液，去除未贴壁的细胞；(2)培养3天时，细胞长满后用0.05％胰酶消化后离心收集细胞；(3)将步骤(2)收集的细胞重复上述步骤继续传代培养，待细胞达到90％以上密度，进行消化、传代，收集第3～5代细胞冻存、复苏备用；(4)采用流式细胞仪筛选出标记和粘附分子高表达CD105、CD73、CD44，不表达或低表达CD34和CD45的细胞，做染色体核型分析，即获得所述含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞。步骤(1)中所述DMEM/F12培养基中含有20mM/LHEPES、0.1％大豆胰酶抑制剂、25～50μg/mL转铁蛋白、10～20μg/mL纤粘连蛋白和20～60ng/mL的成纤维细胞生长因子-4。步骤(1)中所述DMEM/F12培养基中血清的含量为10～15％。所述含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞可以替换为含有女性染色体的其他人源干细胞。本专利技术有益的技术效果在于：本专利技术采用的异体骨髓间充质干细胞来源广，获取较为容易，由于自体细胞是成体细胞，其增殖和定向分化能力是有限的；也避免了自身疾病的回输，以达到基因优势互补；男女性别染色体、男女的激素水平可以互相调节，减少和避免性别因素造成男性特异疾病的发生和发展；能够减轻病患从自身获取细胞的痛苦；骨髓间充质干细胞有低免疫原的特性；不需要人类白细胞特异抗原HLA和基因的配型配对。本专利技术为男性特有肿瘤病人特别是难治和晚期重症患者提供了一种有效的、快速的、无痛苦的细胞生物治疗技术。由于肿瘤的发生是一个慢性的迁延过程，伴随着细胞核异质和基因的突变，男性疾病通常雄激素受体高表达，需要用外源性的药物或放射治疗、或手术切除睾丸去势来解决。而携带有女性染色体基因异体骨髓间充质干细胞带有外源优势基因，可以降低雄激素受体水平，弥补由于雄激素水平过高所造成的基因缺陷疾病，且基因优势互补，更好地提高患者的生存率。本专利技术将携带女性染色体的骨髓间充质干细胞在含有FGF、VEGF等不同生长因子的培养基里生长，能明显提高细胞的生存能力和细胞活性，调理受损的男性泌尿生殖系统微环境、促进泌尿生殖系统再生和功能的恢复，细胞生长因子FGF、VEGF等可对含有女性染色体的骨髓间充质干细胞进行诱导分化，能使其定向分化成可以分泌雌性激素、孕激素的细胞。本专利技术利用携带女性染色体的骨髓间充质干细胞制剂通过静脉输注的方式移植给患有男性泌尿和生殖系统疾病的病人，明显改善病人的生存率，改善全身状态及泌尿和生殖系统功能，开辟男性疾病治疗的新方法。开发用于治疗男性疾病的女性染色体细胞制剂及制备方法具有非常重要的临床意义和广阔的应用前景。本专利技术原料为含有女性染色体的骨髓间充质干细胞，低免疫原性，具有扩增、定向高分化、归巢性、安全有效、无毒副作用；利用干细胞高分化多向潜能和自我更新复制的特点迅速准确迁徙到病灶；调理受损的男性泌尿和生殖系统微环境；调节激素水平，促进泌尿生殖系统再生和功能的恢复。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术进行具体描述。实施例1一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂，所述制剂包括1×107个/mL女性胚胎源骨髓间充质干细胞、80ng/mL外周血血浆蛋白，余量为生理盐水，配成1mL制剂。所述女性胚胎源骨髓间充质干细胞的制备方法为：(1)将检测合格的女性胚胎骨髓间充质干细胞悬液接种在含血清的DMEM/F12培养基的培养瓶中，将培养瓶置于温度为37℃、饱和湿度、5％的CO2浓度的培养箱内开始培养，每2天更换一次培养液，去除未贴壁的细胞；(2)培养3天时，用0.05％胰酶消化后离心收集细胞；(3)将步骤(2)收集的细胞重复上述步骤继续传代培养，待细胞达到90％密度，进行消化、传代，收集第5代细胞冻存、复苏备用；(4)采用流式细胞仪筛选出标记和粘附分子高表达CD105、CD73、CD44，不表达或低表达CD34和CD45的细胞，做染色体核型分析，即获得所述女性胚胎源骨髓间充质干细胞。步骤(1)中所述DMEM/F12培养基中含有20mM/LHEPES、0.1％大豆胰酶抑制剂、40μg/mL转铁蛋白、15μg/mL纤粘连蛋白和40ng/mL的成纤维细胞生长因子-4。实施例2一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂，所述制剂包括2×107个/mL女性胚胎源骨髓间充质干细胞、120ng/mL外周血血浆蛋白，余量为生理盐水，配成1mL制剂。所述女性胚胎源骨髓间充质干细胞的制备方法为：(1)将检测合格的女性胚胎骨髓间充质干细胞悬液接种在含血清的DMEM/F12培养基的培养瓶中，将培养瓶置于温度为37℃、饱和湿度、5％的CO2浓度的培养箱内开始培养，每2天更换一次培养液，去除未贴壁的细胞；(2)培养3天时，用0.05％胰酶消化后离心收集细胞；(3)将本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂，其特征在于所述制剂

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂，其特征在于所述制剂包括含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞、外周血血浆蛋白和生理盐水。2.根据权利要求1所述的含有女性染色体干细胞的制剂，其特征在于所述制剂中含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞的浓度为(1-3)×107个/mL，外周血血浆蛋白的用量为80～160ng/mL，余量为生理盐水，配成1mL制剂。3.根据权利要求1所述的含有女性染色体干细胞的制剂，其特征在于所述含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞的制备方法为：(1)将检测合格的女性胚胎骨髓间充质干细胞放置在含血清的DMEM/F12培养基的培养瓶中培养，将培养瓶置于温度为37℃、饱和湿度、5％的CO2浓度的培养箱内开始培养，每2～3天更换一次培养液，去除未贴壁的细胞；(2)培养3天时，细胞长满后用0.05％胰酶消化后离心收集细胞；(3)将步骤(2)收集的细胞重复上述步骤继...

【专利技术属性】
技术研发人员：周萱，
申请(专利权)人：奥思达干细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32