一种紫苑石斛的组织培养育苗方法技术

本发明专利技术公开了一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，包括：外植体选择步骤、果荚消毒步骤、播种步骤、继代培养步骤、生根培养步骤、炼苗驯化步骤和移栽步骤。该紫苑石斛的组织培养育苗方法能够有效的提高紫苑石斛种苗的繁育速度及繁育数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现紫苑石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。 1

A method of tissue culture and seedling cultivation of Dendrobium

The invention discloses a method of tissue culture and seedling raising for Dendrobium, including the step of selection of explant, step of pod disinfection, sowing step, step of subculture, step of rooting culture, step of domestication and domestication of seedling and step of transplanting. The method of tissue culture and cultivation of Dendrobium Dendrobium can effectively improve the breeding speed and breeding quantity of Dendrobium, control the stability of the Germplasm from the mother source, guarantee the quality of the seedling, realize the factory production of the high quality seed of Dendrobium, meet the production demand, and alleviate the present situation of the scarcity of resources. One

【技术实现步骤摘要】
一种紫苑石斛的组织培养育苗方法
本专利技术涉及组织培养
，尤其涉及一种紫苑石斛的组织培养育苗方法。
技术介绍
紫苑石斛(Dendrobiumtransparens)为兰科，主要分布在缅甸，中国境内主要分布在广西，多数从缅甸国家进口；紫苑石斛茎下垂，稍肉质，圆柱形，不分枝，具多节。总状花序多个，长至落叶的老茎上，每个花柄通常有2朵花，花型大成粉紫色，膜质，开展；花瓣近椭圆形，唇瓣卵圆形呈粉紫色，两侧围抱蕊柱形成喇叭状，喇叭状部位呈深紫色。紫苑石斛资源稀少、花色清新靓丽、有淡淡的清香味，花期长达2个月，具有较高的观赏价值。但是，现有的紫苑石斛存在以下缺陷：目前国内市场上流通的紫苑石斛主要靠从缅甸国家进口，少部分来源于广西，尚无人工栽培，母本较少，种源稀缺；一般通过分株繁殖和扦插的方式进行繁殖，繁殖种苗较少，繁殖率低，生长周期较长，正常生长环境下不经人工授粉结果的几率较小；由于果荚少，果粉细小，在自然环境下不易萌发生长等诸多因素的制约，使得具有高观赏价值的紫苑石斛种苗繁育受阻。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，能够有效的提高紫苑石斛种苗的繁育速度及繁育数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现紫苑石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。本专利技术的目的采用如下技术方案实现：一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，包括：外植体选择步骤：在紫苑石斛母本植株的开花期进行人工授粉，长出果荚后，继续培育，采摘成熟果荚并置于冰箱中保存，得到备用果荚；果荚消毒步骤：取所述备用果荚，将种壳表面清洗干净，得到第一洁净果荚；将所述第一洁净果荚移至接种室中，进行酒精消毒和无菌水冲洗，得到第二洁净果荚；将所述第二洁净果荚用次氯酸钠消毒和无菌水冲洗，得到第三洁净果荚；将所述第三洁净果荚用升汞消毒和无菌水冲洗，得到第四洁净果荚；播种步骤：解剖所述第四洁净果荚，将果粉撒到1/2MS培养基上，转移至培养室中培养，得到萌芽种子；继代培养步骤：将所述萌芽种子置于培养室中继续培养，直至种苗长到2-3cm，获取一级瓶苗；将所述一级瓶苗转移至1/2MS培养基中，生长至5-6cm时，获取二级瓶苗；生根培养步骤：将所述二级瓶苗转移至生根培养基中进行培养，获取生根瓶苗；炼苗驯化步骤：将所述生根瓶苗置于培养室中培养，然后移到室外环境中进行驯化，获取驯化苗；移栽步骤：将所述生根培养基的瓶盖打开，继续放置所述驯化苗3-5天，然后倒出，并用多菌灵浸泡苗根部，接着洗净阴干，移栽至基质中进行驯化。进一步地，在所述外植体选择步骤中，紫苑石斛母本植株的植株年龄为2-4年；长出果荚后继续培育3-4个月；将所述成熟果荚置于3-7℃的冰箱中保存1.5-2.5周。进一步地，在所述果荚消毒步骤中，将所述备用果荚用洗洁精水或洗衣粉水浸泡15-20min，用毛刷刷干净种壳表面，并用自来水冲洗10-15min，得到第一洁净果荚；将所述第一洁净果荚放至洁净烧杯中，移至接种室，在无菌操作台上用75％医用酒精浸泡30-60s，浸泡期间用镊子不断搅拌，保证消毒彻底，接着用无菌水冲洗3-4次，得到第二洁净果荚；将所述第二洁净果荚用浓度为2％的次氯酸钠消毒外壳1-2min，接着用无菌水冲洗3-4次，得到第三洁净果荚；将所述第三洁净果荚用0.1％的升汞消毒6-8min，接着用无菌水冲洗4-5次，得到第四洁净果荚。进一步地，在所述播种步骤中，用经过280-290℃高温消毒的解剖刀和镊子解剖所述第四洁净果荚，将果粉撒到1/2MS培养基后，并盖上经过消毒的培养基瓶盖；所述培养室的温度为24-26℃，光照强度为2000-2500Lx，光照时间为10-12小时/天，培养30-35天。进一步地，在所述播种步骤中，在所述1/2MS培养基中添加2％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉，并将培养基的pH调至5.8-6.0。进一步地，在所述继代培养步骤中，将所述萌芽种子置于光照强度为2000-2500Lx的培养室中继续培养，光照时间为10-12小时/天，生长50-60天，直至种苗长到2-3cm，获取一级瓶苗；在无菌环境下将所述一级瓶苗转移至1/2MS培养基中培养50-60天，生长至5-6cm时，获取二级瓶苗。进一步地，在所述继代培养步骤中，在所述1/2MS培养基中添加0.8mg/L的萘乙酸、1.5mg/L的6苄基腺嘌呤6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁和0.3g/L的活性碳粉，并将培养基的pH调至5.8-6.0。进一步地，在所述生根培养步骤中，在无菌环境下将所述二级瓶苗转移至生根培养基中培养85-95天，获取生根瓶苗；所述生根培养基为MS培养基，在所述MS培养基中添加2.0mg/L的萘乙酸、1.0mg/L的6苄基腺嘌呤6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、25g/L的香蕉汁和0.3g/L的活性碳粉，并将培养基的pH调至5.8-6.0。进一步地，在所述炼苗驯化步骤中，将所述生根瓶苗置于培养室中培养85-95天，然后将其移到室外环境中放置15-30天，获取驯化苗。进一步地，在所述移栽步骤中，用800-1000倍的水稀释多菌灵，获取浸泡液并浸泡苗根部15-20min，然后用清水洗净并阴干。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术所提供的紫苑石斛的组织培养育苗方法，能够有效的提高紫苑石斛种苗的繁育速度及繁育数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现紫苑石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。(2)本专利技术所提供的紫苑石斛的组织培养育苗方法，繁殖时最重要的一个环节种子消毒彻底，消毒彻底才能保证种子播种后培养基不感染，在温度、光照等特定条件适合的情况下，紫苑石斛种子育苗的发芽率大于80％，保证品种纯正。在播种和继代培养步骤时，培养基采用1/2MS培养基，通过和MS培养基对比，对种苗的萌发生长无影响，采用1/2MS培养基可以节约原料，在生产中每瓶培养基可节约1.0-1.5元的成本。附图说明图1为本专利技术的紫苑石斛在播种阶段，种子的萌发图；图2为本专利技术的紫苑石斛在继代培养阶段的增殖图；图3为本专利技术的紫苑石斛在生根培养阶段的生根图；图4为本专利技术的紫苑石斛在炼苗驯化阶段的炼苗图；图5为本专利技术的紫苑石斛在移栽阶段的栽培图。具体实施方式下面，结合附图以及具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，包括：外植体选择步骤：在紫苑石斛母本植株的开花期进行人工授粉，长出果荚后，继续培育，采摘成熟果荚并置于冰箱中保存，得到备用果荚；果荚消毒步骤：取备用果荚，将种壳表面清洗干净，得到第一洁净果荚；将第一洁净果荚移至接种室中，进行酒精消毒和无菌水冲洗，得到第二洁净果荚；将第二洁净果荚用次氯酸钠消毒和无菌水冲洗，得到第三洁净果荚；将第三洁净果荚用升汞消毒和无菌水冲洗，得到第四洁净果荚；播种步骤：解剖第四洁净果荚，将果粉撒到1/2MS培养基上，转移至培养室中培养，得到萌芽种子；继代培养步骤：将萌芽种子置于培养室中继续培养，直至种苗长到2-3cm，获取一级瓶苗；将一级本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，包括：

【技术特征摘要】
1.一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，包括：外植体选择步骤：在紫苑石斛母本植株的开花期进行人工授粉，长出果荚后，继续培育，采摘成熟果荚并置于冰箱中保存，得到备用果荚；果荚消毒步骤：取所述备用果荚，将种壳表面清洗干净，得到第一洁净果荚；将所述第一洁净果荚移至接种室中，进行酒精消毒和无菌水冲洗，得到第二洁净果荚；将所述第二洁净果荚用次氯酸钠消毒和无菌水冲洗，得到第三洁净果荚；将所述第三洁净果荚用升汞消毒和无菌水冲洗，得到第四洁净果荚；播种步骤：解剖所述第四洁净果荚，将果粉撒到1/2MS培养基上，转移至培养室中培养，得到萌芽种子；继代培养步骤：将所述萌芽种子置于培养室中继续培养，直至种苗长到2-3cm，获取一级瓶苗；将所述一级瓶苗转移至1/2MS培养基中，生长至5-6cm时，获取二级瓶苗；生根培养步骤：将所述二级瓶苗转移至生根培养基中进行培养，获取生根瓶苗；炼苗驯化步骤：将所述生根瓶苗置于培养室中培养，然后移到室外环境中进行驯化，获取驯化苗；移栽步骤：将所述生根培养基的瓶盖打开，继续放置所述驯化苗3-5天，然后倒出，并用多菌灵浸泡苗根部，接着洗净阴干，移栽至基质中进行驯化。2.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述外植体选择步骤中，紫苑石斛母本植株的植株年龄为2-4年；长出果荚后继续培育3-4个月；将所述成熟果荚置于3-7℃的冰箱中保存1.5-2.5周。3.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述果荚消毒步骤中，将所述备用果荚用洗洁精水或洗衣粉水浸泡15-20min，用毛刷刷干净种壳表面，并用自来水冲洗10-15min，得到第一洁净果荚；将所述第一洁净果荚放至洁净烧杯中，移至接种室，在无菌操作台上用75％医用酒精浸泡30-60s，浸泡期间用镊子不断搅拌，保证消毒彻底，接着用无菌水冲洗3-4次，得到第二洁净果荚；将所述第二洁净果荚用浓度为2％的次氯酸钠消毒外壳1-2min，接着用无菌水冲洗3-4次，得到第三洁净果荚；将所述第三洁净果荚用0.1％的升汞消毒6-8min，接着用无菌水冲洗4-5次，得到第四洁净果荚。4.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：许冬瑾，严新，雷连海，杜永魏，
申请(专利权)人：康美药业文山药材种植管理有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53