一种去甲基金霉素的提取方法技术

本发明专利技术提供一种去甲基金霉素的提取方法，其包括如下步骤：调发酵液的pH值至酸性，发酵液与菌体固液分离，得液体1；所得液体1与3‑4％的阳离子表面活性剂，在pH值为8.0‑8.5，发生络合反应，固液分离，得络合物1；阳离子表面活性剂为十四烷基三甲基氯化铵和/或十六烷基三甲基氯化铵；所述百分比为阳离子表面活性剂的质量占液体1的质量的百分比；调所得络合物1的pH值，与尿素发生络合反应，固液分离，得络合物2；调所得络合物2的pH值，使之溶解，固液分离，得液体2；用盐酸调节所得液体2的pH值，降温、结晶，得DMCTC盐酸盐。该甲基金霉素的提取方法，可获得纯度≥94％的DMCTC盐酸盐。

A method of extracting methylation of chlortetracycline

The invention provides a method for extracting methylation of chlortetracycline, which includes the following steps: the pH value of the fermentation broth to acidity, the separation of the fermentation liquid and the solid liquid of the bacteria, the liquid 1, the liquid 1 and the 3 cationic surfactant, and the complexation reaction, the solid-liquid separation, the complex 1, the complex 1, and the cationic surfactant in the pH value of 8. The surfactant is fourteen alkyl three methyl ammonium chloride and / or sixteen alkyl three methyl ammonium chloride; the percentage is the mass of the cationic surfactant, the mass of the liquid 1; the pH value of the adjusted complex 1, the complexation reaction with the urea, the solid-liquid separation, the collaterals 2, the pH value of the complex 2 The solution is solid and liquid separated, and the liquid is 2. The pH value of the liquid 2 is adjusted by hydrochloric acid, and the DMCTC hydrochloride is obtained by cooling and crystallizing. The extraction method of chlortetracycline can obtain DMCTC hydrochloride with purity of more than 94%.

【技术实现步骤摘要】
一种去甲基金霉素的提取方法
本专利技术涉及一种去甲基金霉素的提取方法。
技术介绍
去甲基金霉素(英文名称Demethylchlortetracycline，缩写DMCTC，其结构如式1所示)具有较宽的抗菌谱，对革兰阳性菌包括耐四环素的金黄色葡萄球菌、链球菌等和革兰阴性菌中的淋病耐瑟菌均有很强的作用，是生产米洛环素和替加环素关键前体，是一种重要的医药原料。去甲基金霉素由金黄色链霉菌(Streptomycesaureus)发酵生产，然后通过分离提取得到原料药去甲基金霉素盐，目前主要报道的分离提取的工艺主要有：(1)发酵液经过酸化、萃取、反萃取、浓缩结晶方法(中国抗生素杂志，2000，25：341-343)，其缺点是使用了大量的有机溶媒，污染大；(2)利用柱层析纯化法提取去甲基金霉素(中国抗生素杂志，2013，38：915-917)，其缺点是生产成本高，不适用于工业化大生产；(3)发酵液调至碱性pH，加入晶种结晶的方法(CN201310575459)。虽然操作简单，但由于去甲基金霉素在碱性条件下稳定性差，容易形成DMCTC差向异构体；(4)将浓缩脱色的发酵液调节pH在4.5-8.5，结晶沉淀，然后利用去甲基金霉素复盐法精制(CN201310380480)。但分离过程需要利用树脂对发酵液脱色减少杂质，增加了操作成本。DMCTC的价格便宜、用量大，应用中对其纯度有较高的要求，现有的工艺制得的DMCTC的纯度无法达到94％以上，因此，会限制其大规模生产应用，因此开发一种污染小、成本低、简单可行的生产工艺以使DMCTC的纯度达到94％以上，甚至达到USP质量要求(纯度≥95％)是目前亟须解决的问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术中有机溶媒使用量大、生产成本高等缺陷，而提供一种污染小、成本低的去甲基金霉素的提取方法。本专利技术提供了一种去甲基金霉素的提取方法，其包括如下步骤：(1)调含去甲基金霉素的发酵液的pH值至酸性，所述发酵液与菌体进行固液分离，得液体1；(2)所得液体1与3-4％的阳离子表面活性剂，在pH值为8.0-8.5，发生络合反应，固液分离，得络合物1；所述阳离子表面活性剂为十四烷基三甲基氯化铵和/或十六烷基三甲基氯化铵；所述百分比为所述阳离子表面活性剂的质量占所述液体1的质量的百分比；(3)调所得络合物1的pH值，并与尿素发生络合反应，固液分离，得络合物2；(4)调所得络合物2的pH值，所得络合物2溶解，固液分离，得液体2；(5)用盐酸调节所得液体2的pH值至酸性，降温、结晶，得DMCTC盐酸盐。本专利技术中，所说的含去甲基金霉素的发酵液为本领域常规所说的由金黄色链霉菌(Streptomycesaureus)发酵生产得到的发酵液，其中含有去甲基金霉素。步骤(1)中，所述调发酵液的pH值的操作为本领域常规，所述pH值较佳地调至1.0-2.0，所述pH值更佳地调至1.5。所述调pH值的物质为本领域常规pH调节剂，如硫酸水溶液。步骤(1)中，所述的固液分离为本领域常规，较佳地为微滤，所述微滤采用的微滤膜为本领域常规，较佳地为0.45μm陶瓷膜。步骤(2)中，所述十四烷基三甲基氯化铵为本领域常规，较佳地为PurumTTAC150，所述十六烷基三甲基氯化铵为本领域常规，较佳地为PurumCTAC150，所述PurumTTAC150和PurumCTAC150购于韩国idchem有限公司。步骤(2)中，所述调pH值的物质为本领域常规pH调节剂，如氢氧化钠水溶液。步骤(2)中，所述的固液分离为本领域常规，一般为过滤。步骤(3)中，所述调所得络合物1的pH值的操作为本领域常规，所述pH值较佳地调至1.0-2.0，所述pH值更佳地调至1.5。所述调pH值的物质为本领域常规pH调节剂，如硫酸水溶液。步骤(3)中，所述的固液分离为本领域常规，一般为过滤。步骤(4)中，所述调所得络合物2的pH值的操作为本领域常规，所述pH值较佳地调至2.0-3.0，所述pH值更佳地调至2.5。所述调pH值的物质为本领域常规pH调节剂，如氢氧化钠水溶液。步骤(4)中，所述的固液分离为本领域常规，一般为过滤。步骤(5)中，所述调节所得液体2的pH值的操作为本领域常规，所述pH值较佳地调至0.2-0.8，所述pH值更佳地调至0.5。步骤(5)中，所述降温的操作为本领域常规，所述降温较佳地降温至5℃；所述结晶的操作为本领域常规，所述结晶的时间较佳地为6小时。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。本专利技术所用试剂和原料均市售可得。本专利技术的积极进步效果在于：本专利技术去甲基金霉素的提取方法，通过对阳离子表面活性剂的种类、用量及加入阳离子表面活性剂之后pH值的创造性发现，可获得纯度≥94％的DMCTC盐酸盐，甚至达到USP质量要求(纯度≥95％)。附图说明图1为本专利技术实施例1中去甲基金霉素发酵液的HPLC图谱。图2为本专利技术实施例1中获得的去甲基金霉素盐酸盐的HPLC图谱。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。金黄色链霉菌(Streptomycesaureus)ATCC21658购于美国模式培养物集存库(ATCC)。下述实施例中的含去甲基金霉素的发酵液的制备方法如下：将金黄色链霉菌(Streptomycesaureus)ATCC21658的菌丝接种到种子培养基，在培养温度为28℃下，培养40小时后，按10％接种量接种到发酵培养基，在培养温度28℃下，培养7-8天，收集含去甲基金霉素的发酵液，用于下一步的分离纯化。种子培养基(g/L)：可溶性淀粉2.0，葡萄糖1.5，黄豆饼粉1.5，氯化钠0.3；发酵培养基(g/L):可溶性淀粉5.0，麦芽糊精2.0，葡萄糖1.0，黄豆饼粉3.0，干酵母粉5.0，豆油2.0，CaCO30.3。下述实施例中的阳离子表面活性剂PurumTTAC150和PurumCTAC150购于韩国idchem有限公司。DMCTCHPLC分析方法如下：分析定柱：ODSC18柱，4.6×250mm，5um；柱温：40℃；流动相A相为0.02mol/L的磷酸二氢钾(0.1％磷酸)水溶液:乙腈＝90：10(V/V)，B相为0.02mol/L的磷酸二氢钾(0.1％磷酸)水溶液:乙腈＝70：30(V/V)；流速为1.0mL/min；检测器波长254nm；进样量10uL，运行时间为20min。梯度洗脱表：时间(min)A相(％)B相(％)010005100080100180100231000301000实施例1含去甲基金霉素的发酵液，其图谱如图1所示，发酵单位为3250mg/L，体积为1000mL，用硫酸水溶液调节pH值至1.5，搅拌30分钟，经过0.45μm陶瓷膜过滤，收集滤液。加入3.0％PurumTTAC150，然后用NaOH水溶液调节pH值至8.5，板框过滤，收集滤饼。经过水洗涤后，用硫酸水溶液调节pH值到1.5，加入尿素并维持pH值为1.5，过滤，收集滤饼。用NaOH水溶液调pH至2.5，搅拌，过滤，收集滤液。向滤液加入盐酸至pH值为0.5，搅拌，降温至5℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种去甲基金霉素的提取方法，其特征在于：其包括如下步骤：(1)调含去甲基金霉素的发酵液的pH值至酸性，所述发酵液与菌体进行固液分离，得液体1；(2)所得液体1与3‑4％的阳离子表面活性剂，在pH值为8.0‑8.5，发生络合反应，固液分离，得络合物1；所述阳离子表面活性剂为十四烷基三甲基氯化铵和/或十六烷基三甲基氯化铵；所述百分比为所述阳离子表面活性剂的质量占所述液体1的质量的百分比；(3)调所得络合物1的pH值，并与尿素发生络合反应，固液分离，得络合物2；(4)调所得络合物2的pH值，所得络合物2溶解，过滤，得液体2；(5)用盐酸调节所得液体2的pH值，降温、结晶，得DMCTC盐酸盐。

【技术特征摘要】
1.一种去甲基金霉素的提取方法，其特征在于：其包括如下步骤：(1)调含去甲基金霉素的发酵液的pH值至酸性，所述发酵液与菌体进行固液分离，得液体1；(2)所得液体1与3-4％的阳离子表面活性剂，在pH值为8.0-8.5，发生络合反应，固液分离，得络合物1；所述阳离子表面活性剂为十四烷基三甲基氯化铵和/或十六烷基三甲基氯化铵；所述百分比为所述阳离子表面活性剂的质量占所述液体1的质量的百分比；(3)调所得络合物1的pH值，并与尿素发生络合反应，固液分离，得络合物2；(4)调所得络合物2的pH值，所得络合物2溶解，过滤，得液体2；(5)用盐酸调节所得液体2的pH值，降温、结晶，得DMCTC盐酸盐。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤(1)中，所述pH值调至1.0-2.0，所述pH值较佳地调至1.5。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的固液分离为微...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈少欣，沈晓放，吴远杰，杨松柏，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：上海,31