使用吸附介质诊断感染性疾病的方法技术

本发明专利技术提供用于浓缩生物样品中发现的感染性病原体的体外方法，上述生物样品获自怀疑被病原体感染的个体。本文还提供用于减少或消除获自怀疑被感染性病原体感染的个体的样品的血细胞的体外方法。本发明专利技术还提供用于诊断疟疾的方法，和用于确定个体是否被病原体感染的方法。本文还提供用于这些方法的浓缩器和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用吸附介质诊断感染性疾病的方法相关申请交叉引用本申请要求2015年10月16日提交的美国专利申请第14/885,729号的权益，美国专利申请第14/885,729号是2014年11月6日提交的PCT/US2014/064419的部分继续申请，该PCT/US2014/064419申请要求2013年11月8日提交的美国临时专利申请第61/902,070号的优先权益，所述申请的公开内容在此出于所有目的通过引用将其全部并入本文。专利技术背景感染性疾病的早期检测对于控制其传播、指导治疗和改善患者预后来说是必需的。例如，致命病原体爆发的早期准确鉴定可以防止全球大流行的发生。目前许多用于例如病毒(包括埃博拉和相关的线状病毒)或抗药细菌导致的血流感染的诊断方法要求进行至少24小时或更久。在本领域对于使检测个体样品中病原体的存在所需的时间最小化的方法存在需求。目标在于当病原体仍以很低的浓度存在时对其进行检测，如果可能，在临床症状明显之前。然后早期干预可以使感染的强度和持续时间最小化，从而降低发病率和死亡率。在一些情形中，样品中细胞例如血细胞(例如，红血细胞和白血细胞)的存在降低了测定方法的特异性和灵敏度。目前，不存在用于从生物样品快速分离和收集感染性病原体从而使得病原体可以在以很低的量存在时得以鉴定或分析的手段。此外，在本领域存在对于可以提高检测病原体的现有诊断方法的灵敏度的技术的需求。本专利技术满足这些及其他需求。专利技术概述一方面，本专利技术提供用于浓缩生物样品中存在的宽范围的感染性病原体和毒素的体外方法，上述生物样品获自怀疑被所述病原体感染的对象。该方法包括：(a)在形成包括吸附介质和所述病原体的粘附复合物的条件下，使获自对象的生物样品与广谱吸附介质接触；(b)在保持复合物的同时将粘附复合物与样品中没有包括在复合物中的组分分离，例如，通过将粘附复合物用缓冲溶液洗涤；和(d)通过将洗脱缓冲液应用于复合物收集粘附复合物的病原体，从而浓缩洗脱液中的感染性病原体。在一些实施方式中，该方法还包括检测分离的感染性病原体。在一些情形中，检测分离的感染性病原体包括比色测定、免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、基于PCR的测定、任选染色的病原体生长测定或其组合。在一些实施方式中，洗涤缓冲液是普通盐水溶液。在一些实施方式中，洗脱缓冲液是高离子强度或高渗盐水溶液。在一些实施方式中，生物样品选自全血、血清、血浆、尿、粪便、痰、泪、唾液、支气管灌洗液、其他体液及其组合。在一些实施方式中，吸附介质是其表面上具有至少一种多糖分子吸附剂的高表面积的固体基质。在一些实施方式中，通过端点附着将至少一种多糖吸附剂附着于固体基质的表面。在一些实施方式中，至少一种多糖吸附剂是选自肝素、硫酸乙酰肝素、甘露糖、硫酸葡聚糖、透明质酸、水杨酸、壳聚糖及其组合的成员。在一些实施方式中，甘露糖是D-甘露糖或D-甘露糖聚合物。在一些实施方式中，至少一种多糖吸附剂是肝素和甘露糖。在一些实施方式中，固体基质包括多个刚性聚合物珠。所述多个刚性聚合物珠可以是刚性聚乙烯珠。在一些实施方式中，病原体选自恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、间日疟原虫(Plasmodiumvivax)、卵形疟原虫(Plasmodiumovale)、三日疟原虫(Plasmodiummalariae)、埃博拉病毒(EBOV)、非EBOV线状病毒(filovirus)、黄病毒科(Flaviviridae)、金黄色葡萄球菌(Streptococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、碳青霉烯(carbapenem)抗性肠杆菌科(enterobacteriaceae)(CRE)细菌、产生ESBL的病原体、万古霉素抗性肠球菌(enterococci)(VRE)细菌、鲍氏不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)、产酸克雷伯菌(Klebsiellaoxytoca)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、屎肠球菌(Enterococcusfaecium)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、巨细胞病毒(CMV)、腺病毒、单纯性疱疹病毒1(HSV1)、单纯性疱疹病毒2(HSV2)及其任意组合。在第二方面，本专利技术提供用于减少或消除来自生物样品的血细胞的体外方法，上述生物样品获自怀疑被病原体感染的对象。该方法包括：(a)在形成包括吸附介质和样品中存在的病原体的粘附复合物的条件下，使获自对象的生物样品与任选地广谱的吸附介质接触；和(b)在保持粘附复合物的同时将样品的血细胞和粘附复合物分离，从而减少或消除来自样品的血细胞。在一些实施方式中，步骤(b)还包括将粘附复合物用盐水溶液洗涤。在一些实施方式中，该方法还包括：(c)将洗脱缓冲液应用于粘附复合物；和(d)收集粘附复合物的病原体。在一些实施方式中，该方法还包括检测分离的感染性病原体。在一些情形中，检测分离的感染性病原体包括比色测定、免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、基于PCR的测定、病原体生长测定或其组合。在一些实施方式中，洗涤缓冲液是盐水溶液。在一些实施方式中，洗脱缓冲液是高离子强度或高渗盐水溶液。在一些实施方式中，生物样品选自全血、血清、血浆、尿、粪便、痰、泪液、唾液、支气管灌洗液、其他体液及其组合。在一些实施方式中，吸附介质是其表面上具有至少一种多糖吸附剂的高表面积的固体基质。在一些实施方式中，通过端点附着将至少一种多糖吸附剂附着于固体基质的表面。在一些实施方式中，至少一种多糖吸附剂是选自肝素、硫酸乙酰肝素、甘露糖、硫酸葡聚糖、透明质酸、水杨酸、壳聚糖及其组合的成员。在一些情形中，甘露糖是D-甘露糖或D-甘露糖聚合物。在一些情形中，至少一种多糖吸附剂是肝素和甘露糖。在一些实施方式中，固体基质包括多个刚性聚合物珠。所述多个刚性聚合物珠可以是刚性聚乙烯珠。在一些实施方式中，病原体选自恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、埃博拉病毒(EBOV)、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、碳青霉烯抗性肠杆菌科(CRE)细菌、产生ESBL的病原体、万古霉素抗性肠球菌(VRE)细菌、鲍氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、粪肠球菌、屎肠球菌、白色念珠菌、巨细胞病毒(CMV)、单纯性疱疹病毒1(HSV1)、单纯性疱疹病毒2(HSV2)及其任意组合。在第三方面，本专利技术提供用于在怀疑被疟原虫感染的对象中诊断疟疾的体外方法。该方法包括：(a)在形成包括吸附介质和被疟原虫感染的样品中存在的细胞的粘附复合物的条件下，使获自所述对象的样品与吸附介质接触；(b)通过检测吸附介质的物理变化，确定粘附复合物的存在；和(c)基于吸附介质相比较于已经与对照样品接触的参考吸附介质的物理变化，预测对象具有疟疾。在一些实施方式中，该方法还包括生成已经与对照样品接触的参考介质的物理变化的标准曲线。在一些实施方式中，生物样品选自全血、血清、血浆、尿、粪便、痰、泪液、唾液、支气管灌洗液、其他体液及其组合。在一些情形中，样品是全血。在一些实施方式中，对照样品是来自健康对象的样品。在一些实施方式中，对照样品是来自具有疟疾的对象的样品。在一些实施方式中，物理变化是吸附本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测生物样品中存在的感染性病原体的体外方法，所述生物样品获得自怀疑被所述病原体感染的对象，所述方法包括：(a)在形成包括吸附介质和所述病原体的粘附复合物的条件下，使获自对象的生物样品与吸附介质接触；(b)在保持复合物的同时将粘附复合物与样品中没有包括在复合物中的组分分离；和(c)收集粘附复合物中的病原体，其中在所述病原体保留在所述吸附介质上时，使用酶促消化后收集所述病原体或所述病原体的组分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.16 US 14/885,7291.用于检测生物样品中存在的感染性病原体的体外方法，所述生物样品获得自怀疑被所述病原体感染的对象，所述方法包括：(a)在形成包括吸附介质和所述病原体的粘附复合物的条件下，使获自对象的生物样品与吸附介质接触；(b)在保持复合物的同时将粘附复合物与样品中没有包括在复合物中的组分分离；和(c)收集粘附复合物中的病原体，其中在所述病原体保留在所述吸附介质上时，使用酶促消化后收集所述病原体或所述病原体的组分。2.权利要求1的方法，其中所述酶促消化是蛋白水解消化。3.权利要求1的方法，其中所述生物样品选自全血、血清、血浆、尿、粪便、痰、泪液、唾液、支气管灌洗液、其他体液及其组合。4.权利要求1的方法，其中所述吸附介质是其表面上具有至少一种多糖吸附剂的高表面积的基质。5.权利要求4的方法，其中通过端点附着，所述至少一种多糖吸附剂附着于固体基质的表面。6.权利要求4的方法，其中所述基质包括多个刚性聚合物珠。7.权利要求6的方法，其中所述多个刚性聚合物珠是刚性聚乙烯珠。8.权利要求6的方法，其中所述多个刚性聚合物珠包含于装置中。9.权利要求6的方法，其中所述吸附介质附着于浸渍棒或被配置成浸渍棒。10.权利要求6的方法，其中所述吸附介质被附着至或涂覆至选自金属、纤维素、开孔泡沫、磁体和纤维的基质。11.权利要求6的方法，其中所述多个刚性聚合物珠与所述生物样品混合。12.权利要求7的方法，其中所述至少一种多糖吸附剂是选自肝素、硫酸乙酰肝素、甘露糖、硫酸葡聚糖、透明质酸、水杨酸、壳聚糖及其组合的成员。13.权利要求12的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·S·沃德，K·R·麦克雷，
申请(专利权)人：艾克塞拉医疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US