FCV重组疫苗及其用途制造技术

本发明专利技术涵盖FCV疫苗或组合物。所述疫苗或组合物可以是含有FCV抗原的疫苗或组合物。本发明专利技术还涵盖编码和表达可用于保护动物免受FCV感染的FCV抗原、表位或免疫原的重组载体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】FCV重组疫苗及其用途相关申请的交叉引用本申请要求于2015年8月20日提交的美国临时申请62/207,638的优先权。专利
本专利技术涉及用于在动物中对抗猫杯状病毒(felinecalicivirus，FCV)感染的组合物。本专利技术提供了包含FCV抗原的药物组合物或疫苗，针对FCV的疫苗接种方法以及与此类方法和组合物一起使用的试剂盒。专利技术背景在1957年首次描述了猫杯状病毒(FCV)(FastierL.B.,Am.J.Vet.Res.,1957,18:382-389)。猫杯状病毒和猫疱疹病毒是家猫和野生猫科动物上呼吸道病毒性疾病的主要来源。FCV影响大量猫科家族的动物，在临床上健康的家猫中FCV携带率为15-20％的量级(Coutts等，Vet.Rec.,1994,135:555-556；EllisT.M.,AustralianVet.J.,1981,57:115-118；Harbour等，Vet.Rec.,1991,128:77-80；Reubel等，FelineDendistry,1992,22:1347-1360)。在高热的初始阶段之后，这些呼吸系统疾病通常伴随着颊部溃疡(上颚、舌、唇、鼻)、鼻炎、结膜炎、可能还有厌食症和虚弱。FCV也可引起肺炎、肠炎和关节痛(跛行综合症)。在过去的十年中，FCV相关的VSD已经出现在美国和英国。几次爆发与高(高达50％)死亡率和非典型的严重临床症状(高热、皮肤水肿、溃疡性皮炎和黄疸)相关。FCV仅水平传播，在妊娠期间没有从母猫到其小猫的垂直传播(JohnsonR.P.,Res.Vet.Sci.,1984,31:114-119)。FCV通过在受感染的动物与健康动物之间的接触或在打喷嚏时通过气道传播(WardleyRC.,Arch.Virol.,1976,52:243-249)。杯状病毒科的猫杯状病毒是一种无包膜病毒，具有单链正RNA(Radfor等，Proc.1stInt.Symp.,CalicivirusesESVV,1997,93-99)。FCV衣壳由66kDa的单一主要衣壳蛋白即p66蛋白构成。大多数商用FCV疫苗是减毒疫苗。也有少数灭活疫苗可供利用。Povey和同事(Povey等，FelinePractice,1978,8(3):35-42)描述了用于猫的福尔马林灭活和佐剂化的FCV制备物。US6,534,066和US7,850,978描述了FCV的新株用于生产FCV疫苗的用途。灭活疫苗通常含有佐剂以改善免疫应答和诱导针对猫群中出现的异源FCV株的更好保护。然而，佐剂化的疫苗诱导比未佐剂化的疫苗更高比率的局部不良反应(Gobar等，JAVMA,2002,220(10),1477-1482)，从而增加注射部位处疫苗相关纤维肉瘤的风险(BakerR.J.,FelinePractice,1998,26(5),18-20)。未佐剂化的FCV疫苗是通常含有F9株的经修饰的活疫苗。一些作者已经报道了在接种后杯状病毒病中有FCVF9的残余毒力(Dawson等，Vet.Rec.1993,132:346-350)。FCV修饰的活毒株与该领域中新抗原变体的出现相关(Radford等，Vaccine,1997,15(12/13),1451-1458)。因此经修饰的活疫苗的安全性值得怀疑。FCV是杯状病毒科的成员。其具有7.7-kb的正义RNA基因组，具有三个开放阅读框架(ORF)，编码非结构蛋白、主要衣壳蛋白(Carter等，1992,Arch.Virol.,122:223-235；Tohya等，1997,J.Gen.Virol.,78(pt.2),303-305)和次要结构蛋白(Sosnovtsev等，2005,J.Virol.,79,4012-4024)。遗传上，FCV株属于一个多样的基因群，几乎没有亚种群聚的证据。这种遗传多样性伴随着抗原多样性，尽管存在足够的交叉反应性而能够将所有分离株视为属于单一血清型。来自人杯状病毒的几个株的衣壳蛋白已经在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中表达。通过在杆状病毒表达系统中表达衣壳前体，也已经从伞状病毒猫杯状病毒(FCV)产生了病毒样颗粒(DeSilver等，,Expressionofthecompletecapsidandthehypervariableregionoffelinecalicivirusinthebaculovirusexpressionsystem.In:FirstInternationalSymposiumonCaliciviruses.第131–143页)，其中用感染杆状病毒的昆虫sf9细胞的粗收集物完成猫的免疫。未灭活的杆状病毒具有佐剂效果(Hervas-Stubbs等，JournalofImmunology,2007,178:2361–2369；Margine等，PlosOneDecember2012|第7卷|第12期|e51559)。昆虫细胞或级分被用作佐剂以增强抗原的免疫原性(US6,224,882)。DiMartino等(2007,Vet.Microbiol.,120,173–178)论述了FCV衣壳VP1蛋白在昆虫细胞中的表达以及使用表达的衣壳VP1蛋白在体外中和FCV株。然而，未进行体内攻击研究来证明表达的衣壳VP1蛋白在猫中的功效。鉴于上述情况，显然需要具有改善的安全性和良好功效的疫苗，包括针对异源FCV株的疫苗。考虑到动物(包括人，尽管很少)对FCV的易感性，预防FCV感染和保护动物的方法是至关重要的。因此，需要更有效、稳定和安全的针对FCV的疫苗。专利技术概述提供了包含抗原性FCV多肽及其片段和变体的组合物或疫苗。FCV抗原及其片段和变体具有免疫原性和保护性质。FCV抗原可以通过昆虫细胞中的杆状病毒表达载体产生，并装配成FCV空衣壳或FCVVLP(病毒样颗粒)。可将抗原性多肽及其片段和变体配制成疫苗和/或药物组合物。这种疫苗或组合物可用于接种动物并提供抗同源和异源FCV株的保护。本专利技术首次令人惊讶地证明了包含FCVVLP的未佐剂化组合物或疫苗(其中昆虫细胞被灭活并且细胞碎片被除去)提供了抗超毒力FCV异源攻击的优异功效。还提供了包含至少一种抗原性多肽或其片段或变体以及使用说明的试剂盒。附图概述可结合附图来最好地理解以下详细描述。所述详细描述以举例方式提供，但并非旨在将本专利技术仅限于所描述的特定实施方案，其中：图1描绘概述DNA和蛋白质序列的表。图2描绘pMEB062的质粒图谱。图3描绘表达的FCV衣壳蛋白的考马斯染色和Western印迹分析。图4描绘感染的动力学(MOI和感染后天数)。图5描绘FCVVLP的电子显微镜检查。图6描绘攻击后每组存活猫的百分比。图7显示攻击后平均直肠温度的演变。图8描绘攻击后每组的平均体重。图9描绘攻击后每组相对日体重增加的分布。图10描绘攻击后每组的平均临床评分。图11描述每组的总体评分分布。图12描绘每组的平均FCVAb滴度(以log10OD50计)。图13描绘了攻击后每组的病毒排泄(以log10细胞培养物感染剂量50/mL计)的演变。图14描绘每组的wAuC的分布。图15描绘序列比对。详述提供了包含在动物中引发免疫原性应答的FCV多肽、抗原及其片段和变体的组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含猫杯状病毒(FCV)抗原的组合物或疫苗。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.20 US 62/207,6381.一种包含猫杯状病毒(FCV)抗原的组合物或疫苗。2.权利要求1的组合物或疫苗，其中所述FCV抗原形成FCVVLP或空衣壳。3.权利要求1或2的组合物或疫苗，其中所述FCV抗原在昆虫细胞中由杆状病毒载体表达。4.权利要求3的组合物或疫苗，其中所述昆虫细胞被灭活并且细胞碎片被去除。5.权利要求1-4中任一项的组合物或疫苗，其中所述FCV抗原是FCV衣壳蛋白。6.权利要求1-5中任一项的组合物或疫苗，其中所述FCV抗原包含与SEQIDNO：3或4所示序列具有至少90％序列同一性的多肽。7.权利要求1至6中任一项的组合物或疫苗，其中所述FCV抗原由与SEQIDNO：1或2所示序列具有至少90％序列同一性的多核苷酸编码。8.权利要求1-7中任一项的组合物或疫苗...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·普雷特，F·瑞那德，
申请(专利权)人：梅里亚股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US