调控免疫反应的方法及多肽技术

本发明专利技术发现TLT‑1直接结合至免疫细胞并触发细胞从而表现免疫抑制表型；即，下调HLA‑DR并上调PD‑L1。通过TLT‑1或TLT‑1衍生的多肽诱导PD‑L1并降低HLA‑DR可因此用于治疗与免疫高反应性相关的疾病，例如自体免疫性疾病、过敏反应、移植排斥及移植物抗宿主病症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】调控免疫反应的方法及多肽
本专利技术涉及免疫反应的调控。特定地，本专利技术涉及通过使TLT-1直接结合至免疫细胞且触发细胞表达免疫抑制表型来调控免疫反应的方法及多肽。
技术介绍
血小板是重要的止血介体。最新进展表明，血小板可影响先天性及适应性免疫反应二者。经活化血小板可释放可溶性介体(例如可溶性CD40L)，这些介体与白血球相互作用以调控发炎过程且可促使患有败血症的患者的免疫失调。TREM样转录物-1(TLT-1)仅在静息血小板巨核细胞的α颗粒中及经活化血小板的表面上观察到。TLT-1是TREM家族的成员，所述TREM家族由单一V-set免疫球蛋白(Ig)结构域、短胞质尾区及跨膜结构域中的带电残基组成。使用针对TLT-1的抗体的最新研究揭示蛋白质在凝血酶诱导的血小板凝集中的作用(GiomarelliB、WashingtonVA、ChisholmMM、QuigleyL、McMahonJB等人，(2007)Inhibitionofthrombin-inducedplateletaggregationusinghumansingle-chainFvantibodiesspecificforTREM-liketranscript-1.ThrombHaemost97:955-963)。US7553936B2涉及调控血小板活性的方法及组合物及用于治疗个体的与血小板活性相关的疾病或病症的方法及组合物，其包括以有效调控血小板活性的量投与单链抗TREM样转录物-1(TLT-1)抗体或其功能性片段或变体。在正常人类血清中观察到TLT-1细胞外结构域的小的可溶性片段(12及14kDa)，但在血浆中未观察到。研究已显示TLT-1可通过与纤维蛋白原连接以促进血小板凝聚用作止血的调节剂，且亦展示高含量的可溶性TLT-1(sTLT-1)与散播性血管内凝血评分间的显著相关性。US20040180409A1提供TLT-1核酸及蛋白分子，其可在各种细胞过程(例如，血液凝固及免疫反应)的调节中用作调控剂。血浆中的经延长sTLT-1表达与患有败血性休克的患者的缩短存活期相关(WashingtonAV、GibotS、AcevedoI、GattisJ、QuigleyL等人，(2009)TREM-liketranscript-1protectsagainstinflammation-associatedhemorrhagebyfacilitatingplateletaggregationinmiceandhumans.JClinInvest119:1489-1501)。US20130029921A1揭示TLT-1及TLT-1衍生的肽通过特异性抑制TREM-1活性展现抗发炎性质。最近，Derive等人展示sTLT-1可结合至可溶性TREM-1配体，从而干扰白血球活化(DeriveM、BouazzaY、SennounN、MarchionniS、QuigleyL等人，(2012)SolubleTREM-liketranscript-1regulatesleukocyteactivationandcontrolsmicrobialsepsis.JImmunol188:5585-5592)。总之，sTLT-1的这些临床及活体外研究表明其可具有双重效应，在血小板凝聚中起作用且在败血症期间调介白血球功能。因此，仍需要开发用于调控免疫反应的药剂或疗法。
技术实现思路
本专利技术提供调控免疫反应的方法，其包括使TREM样转录物1(TLT-1)多肽结合至免疫细胞，其中TLT-1多肽至免疫细胞的结合抑制免疫反应。在一实施例中，TLT-1多肽至免疫细胞的结合治疗及/或预防与免疫高反应性相关的疾病；优选地，所述疾病是自体免疫性疾病、过敏反应、移植排斥或移植物抗宿主病症。在一些实施例中，TLT-1多肽是下文所述的彼等。本专利技术亦提供多肽，其包括包含SEQIDNO:1、2或42的至少5个氨基酸或与SEQIDNO:1、2或42具有至少约50％的氨基酸序列一致性的氨基酸序列或其生物活性片段或变体。在一些实施例中，多肽包括与SEQIDNO:1、2或42中所述的氨基酸序列具有至少约80％氨基酸序列一致性的氨基酸序列；优选地，多肽包括SEQIDNO:1、2或42中所述的氨基酸序列。在一实施例中，所述多肽是重组多肽或合成多肽。在一些实施例中，多肽经聚乙二醇化或与组织靶标分子、白蛋白或血清白蛋白结合肽偶联。在一些实施例中，多肽与组织靶标分子、白蛋白或血清白蛋白结合肽融合。本专利技术进一步提供包括本专利技术的TLT-1多肽及医药上可接受的载剂的组合物。本专利技术亦提供治疗及/或预防与免疫高反应性相关的疾病的方法，其包括向个体投与本专利技术的TLT-1多肽或包括TLT-1多肽的组合物。本专利技术进一步提供TLT-1融合蛋白，其包括与一或多个异质多肽或本专利技术的其他TLT-1多肽融合的本专利技术的TLT-1多肽。本专利技术进一步提供经聚乙二醇化的TLT-1多肽，其包括一或多个可操作地连接至本专利技术的TLT-1多肽的N-末端的至少一个氨基酸残基的聚乙二醇(PEG)分子。本专利技术进一步提供TLT-1多肽偶联物，其包括偶联至免疫抑制剂的本专利技术的TLT-1多肽。图式简单说明图1显示TLT-1与白血球间的相互作用。将PBMC与rsTLT-1一起培育1小时并用生物素-山羊抗TLT-1抗体APC-抗生物素蛋白染色以检测TLT-1的表面结合。(A)绘示各种白血球在TLT-1处理存在或不存在下的代表性FACS直方图。单核球、PMN及淋巴球是基于其FSC/SSC性质设门(粗线直方图，经rsTLT-1处理的细胞；虚线直方图，未经处理的细胞；细虚线直方图，适当同种型对照)。TLT-1与单核球及PMN结合，但不与淋巴球结合。(B)绘示不同浓度的rsTLT-1至单核球及PMN的结合。PMN及单核球能够以剂量依赖方式结合rsTLT-1。数值表示为来自3次独立实验的平均值±SEM。图2显示sTLT-1对单核球中HLA-DR及PD-L1分子的表面表达的效应。(A)将单核球与rsTLT-1(10μg/ml)一起培育3天。在指示时间点处，收获细胞且使用流式细胞术分析HLA-DR及PD-L1分子。利用rsTLT-1处理导致下调HLA-DR表达的趋势。与此相比，rsTLT-1初免上调PD-L1于单核球上的表达量。(B)将单核球与不同浓度的rsTLT-1一起培育2天。然后收获细胞且使用流式细胞术分析HLA-DR及PD-L1分子。表面分子表达呈现为相对于利用对照培养基处理的细胞(虚线)的每一天的平均荧光强度(MFI)。数值表示为来自3次独立实验的平均值±SEM。图3显示TLT-1多肽对单核球中PD-L1分子的表面表达的效应。(A)绘示TLT-1的细胞外结构域及所设计TLT-1多肽的结构特征。(B)显示将单核球与不同长度的TLT-1多肽(10μg/ml)及10μg/ml的rsTLT-1一起培育1天。然后收获细胞且使用流式细胞术分析PD-L1分子。表面分子表达呈现为相对于利用培养基对照处理的细胞(虚线)的每一天的MFI。图4显示TLT-115-63多肽对单核球中HLA-DR分子的表面表达的效应。将单核球与10μg/ml的TLT-115-63多肽及10μg/mlrsTLT-1一起培育本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种调控免疫反应的方法，其包括使TREM样转录物1(TLT‑1)多肽结合至免疫细胞，其中所述TLT‑1多肽至所述免疫细胞的结合抑制免疫反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.12 US 62/174,681;2015.06.12 US 62/174,6731.一种调控免疫反应的方法，其包括使TREM样转录物1(TLT-1)多肽结合至免疫细胞，其中所述TLT-1多肽至所述免疫细胞的结合抑制免疫反应。2.如权利要求1的方法，其中TLT-1多肽至所述免疫细胞的所述结合治疗及/或预防与免疫高反应性相关的疾病。3.如权利要求2的方法，其中与免疫高反应性相关的所述疾病是自体免疫性疾病、过敏反应、移植排斥或移植物抗宿主病症。4.如权利要求1或2的方法，其中所述免疫细胞是单核球或嗜中性球。5.如权利要求1、2或3的方法，其中所述TLT-1多肽是包括包含SEQIDNO:1的至少5个氨基酸或与SEQIDNO:1具有至少约80％氨基酸序列一致性的氨基酸序列、或其生物活性片段或变体的多肽。6.如权利要求5的方法，其中所述多肽包括包含SEQIDNO:2的至少5个氨基酸或与SEQIDNO:2中所述的氨基酸序列具有至少约80％氨基酸序列一致性的氨基酸序列、或其生物活性片段或变体。7.如权利要求5的方法，其中所述多肽包括包含SEQIDNO:3的至少5个氨基酸或与SEQIDNO:3中所述氨基酸序列具有至少约80％氨基酸序列一致性的氨基酸序列、或其生物活性片段或变体。8.如权利要求5、6或7的方法，其中所述多肽具有SEQIDNO:1、2或3中所述的氨基酸序列。9.一种多肽，其包括包含SEQIDNO:1的至少5个氨基酸或与SEQIDNO:1具有至少约80％氨基酸序列一致性的氨基酸序列、或其生物活性片段或变体。10.如权利要求9的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO:1中所述的氨基酸序列。11.一种多肽，其包括包含SEQIDNO:2的至少5个氨基酸或与SEQIDNO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕衍达，张家鸣，魏采音，
申请(专利权)人：台湾基督长老教会马偕医疗财团法人马偕纪念医院，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71