杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用制造技术

本发明专利技术涉及杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用。所述杀虫蛋白至少选自Cry8H和/或Cry8G。

Application of insecticidal protein in the prevention and control of the adult beetle

The invention relates to the application of insecticidal protein in preventing and controlling adults of scarab. The insecticidal proteins are selected at least from Cry8H and / or Cry8G.

【技术实现步骤摘要】
杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用
本专利技术涉及杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用。
技术介绍
苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis，Bt)是一种对多种害虫具有特异性杀虫活性的革兰氏阳性菌，其可产生晶体蛋白和可溶性分泌蛋白，由于这些蛋白对靶标害虫具有高效特异的杀虫活性，使其在全球范围内得到普遍应用。鞘翅目害虫蛴螬(金龟子幼虫)为害萌发种子幼苗、根茎，而金龟子成虫取食植物的叶片、花蕾和果穗，危害比幼虫更加严重。目前，多关注对蛴螬(金龟子幼虫)的防治，忽视了对其成虫的防治。然而由于蛴螬属于土栖性害虫，因此，存在防治困难的特点。
技术实现思路
本申请采取了不同于现有技术中防治金龟子幼虫的手段，从防治金龟子成虫的角度出发，寻找对金龟子成虫具有良好杀虫活性的杀虫蛋白。为此，本申请之一提供了杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用，所述杀虫蛋白选自具有如(I)至(VIII)中的至少一种的氨基酸序列：(I)Cry8H的氨基酸序列，优选Cry8Ha1的氨基酸序列；(II)与(I)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(I)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(I)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(I)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(III)由(I)中的氨基酸序列经过胰蛋白酶酶解后获得的55kDa和/或70kDa的蛋白片段的氨基酸序列；(IV)与(III)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(III)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(III)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(III)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(V)Cry8G的氨基酸序列，优选Cry8Ga1的氨基酸序列；(VI)与(V)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(V)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(V)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(V)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(VII)由(V)中的氨基酸序列经过胰蛋白酶酶解后获得的55kDa和/或70kDa的蛋白片段的氨基酸序列；(VIII)与(VII)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(VII)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(VII)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(VII)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。Cry8Ha1的氨基酸序列的Genbank登录号为AAW81032。优选Cry8Ha1的核苷酸序列的Genbank登录号为AY897354。Cry8Ga1的氨基酸序列的Genbank登录号为AAT46073。优选Cry8Ga1的核苷酸序列的Genbank登录号为AY590188。通过(II)、(IV)、(VI)或(VIII)限定的杀虫蛋白在与相应的氨基酸序列具有相同功能的同时，也具有与相应的氨基酸序列相当或者更优的效果。在一个具体实施例中，所述金龟子选自华北大黑鳃金龟(HolotrichiaoblitaFaldermann)、暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)和铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotsehulsiy)中的至少一种。在一个具体实施方式中，杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用，所述杀虫蛋白选自具有如(I)至(IV)中的至少一种的氨基酸序列：(I)Cry8H的氨基酸序列，优选Cry8Ha1的氨基酸序列；(II)与(I)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(I)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(I)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(I)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(III)由(I)中的氨基酸序列经过胰蛋白酶酶解后获得的55kDa和/或70kDa的蛋白片段的氨基酸序列；(IV)与(III)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(III)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(III)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(III)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；其中，所述金龟子选自华北大黑鳃金龟(HolotrichiaoblitaFaldermann)、暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)和铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotsehulsiy)中的至少一种。在一个具体实施方式中，杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用，所述杀虫蛋白选自具有如(V)至(VIII)中的至少一种的氨基酸序列：(V)Cry8G的氨基酸序列，优选Cry8Ga1的氨基酸序列；(VI)与(V)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(V)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(V)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(V)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(VII)由(V)中的氨基酸序列经过胰蛋白酶酶解后获得的55kDa和/或70kDa的蛋白片段的氨基酸序列；(VIII)与(VII)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(VII)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(VII)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(VII)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；其中，所述金龟子选自暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)和/或铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotsehulsiy)。本申请之二提供了编码如本申请之一所述的应用中的所述杀虫蛋白的核苷酸序列在防治金龟子成虫中的应用。其中，该核苷酸序列可以以含有其的菌株为模板，或以克隆的全长DNA片段为模板，通过PCR扩增得到；也可以根据给定的序列人工合成。在一个具体实施例中，所述金龟子选自华北大黑鳃金龟(HolotrichiaoblitaFaldermann)、暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)和铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotsehulsiy)中的至少一种。本申请之三提供了含有如本申请之一所述的应用中的所述杀虫蛋白的组合物在防治金龟子成虫中的应用。在一个具体实施例中，所述金龟子选自华北大黑鳃金龟(HolotrichiaoblitaFaldermann)、暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)和铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotsehulsiy)中的至少一种。本申请之四提供了含有编码如本申请之一所述的应用中的所述杀虫蛋白的核苷酸序列，且能产生如本申请之一所述的应用中的所述杀虫蛋白的转基因微生物在防治金龟子成虫中的应用。在一个具体实施例中，所述转基因微生物包括芽胞杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、肠杆菌(Escherichia)和酵母(Saccharomyces)中的至少一种。在一个具体实施例中，所述芽胞杆菌包括苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)、枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)、萎缩芽胞杆菌(Bacillusatrophaeus)和蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)中本文档来自技高网...

【技术保护点】
杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用，所述杀虫蛋白选自具有如(I)至(VIII)中的至少一种的氨基酸序列：(I)Cry8H的氨基酸序列，优选Cry8Ha1的氨基酸序列；(II)与(I)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(I)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(I)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(I)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(III)由(I)中的氨基酸序列经过胰蛋白酶酶解后获得的55kDa和/或70kDa的蛋白片段的氨基酸序列；(IV)与(III)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(III)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(III)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(III)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(V)Cry8G的氨基酸序列，优选Cry8Ga1的氨基酸序列；(VI)与(V)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(V)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(V)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(V)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(VII)由(V)中的氨基酸序列经过胰蛋白酶酶解后获得的55kDa和/或70kDa的蛋白片段的氨基酸序列；(VIII)与(VII)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(VII)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(VII)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(VII)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。...

【技术特征摘要】
1.杀虫蛋白在防治金龟子成虫中的应用，所述杀虫蛋白选自具有如(I)至(VIII)中的至少一种的氨基酸序列：(I)Cry8H的氨基酸序列，优选Cry8Ha1的氨基酸序列；(II)与(I)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(I)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(I)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(I)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(III)由(I)中的氨基酸序列经过胰蛋白酶酶解后获得的55kDa和/或70kDa的蛋白片段的氨基酸序列；(IV)与(III)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(III)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(III)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(III)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(V)Cry8G的氨基酸序列，优选Cry8Ga1的氨基酸序列；(VI)与(V)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(V)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(V)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(V)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；(VII)由(V)中的氨基酸序列经过胰蛋白酶酶解后获得的55kDa和/或70kDa的蛋白片段的氨基酸序列；(VIII)与(VII)中的氨基酸序列的一致性在98％以上，且与(VII)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列；优选其氨基酸序列为与(VII)中的氨基酸序列的一致性在99.5％以上，且与(VII)中的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述金龟子选自华北大黑鳃金龟(HolotrichiaoblitaFaldermann)、暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)和铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotsehulsiy)中的至少一种。3.编码如权利要求1或2所述的应用中的所述杀虫蛋白的核苷酸序列在防治金龟子成虫中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述金龟子选自华北大黑鳃金龟(HolotrichiaoblitaFaldermann)、暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)和铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotsehulsiy)中的至少一种。5.含有如权利要求1或2所述的应用中的所述杀虫蛋白的组合物在防治金龟子成虫中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述金龟子选自华北大黑鳃金龟(HolotrichiaoblitaFaldermann)、暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)和铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotsehulsiy)中的至少一种。7.含有编码如权利要求1或2所述的应用中的所述杀虫蛋白的核苷酸序列，且能产生如权利要求1或2所述的应用中的所述杀虫蛋白的转基因微生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：束长龙，张杰，黄世智，丁学知，耿丽丽，彭琦，宋福平，梁影屏，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11