一种参枝苓制剂指纹图谱的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种药用制剂的检测方法，具体涉及一种中药制剂参枝苓口服液指纹图谱的构建方法。本发明专利技术主要采用高效液相色谱法检测，流动相：乙腈‑0.5％冰乙酸水溶液，A为乙腈，流动相B为0.5％冰乙酸水溶液，检测波长203nm，柱温30℃，进样量10μl，所有组分均在60min内被检测完。

【技术实现步骤摘要】
一种参枝苓制剂指纹图谱的测定方法
本专利技术涉及一种药用制剂的检测方法，具体涉及一种中药制剂参枝苓口服液的指纹图谱测定方法。
技术介绍
阿尔茨海默病（Alzheimer’sDisease,AD）是当今社会严重危害老年人健康的一种神经退行性疾病，是老年痴呆中最常见的类型，占痴呆患者的60%~70%。我国正面临人口老龄化的挑战，目前中国的老年痴呆的患者已达到1000万人，居世界第一，我国是已成为世界上痴呆人数最多且增长速度最快的国家。中药治疗阿尔茨海默病有其优势，如已经上市的中药参枝苓口服液，其配方和工艺描述在中国专利201310002188.9“一种治疗阿尔茨海默症的中药制剂”中，临床用于轻中度阿尔茨海默病心气不足证。参枝苓口服液作为一种中药复方制剂，由党参、桂枝、白芍、炙甘草、茯苓、干姜、制远志、石菖蒲、龙骨、牡蛎等10味药材组成，以益气安神和补中健脾的党参和温通经脉、助阳化气的桂枝作为君药，白芍敛阴养血、柔肝止痛，甘草益气补脾，养心复脉，茯苓补益心脾之气，渗湿安神，共同作为臣药；干姜回阳通脉，温中散寒，燥湿消痰，远志安神益智，化痰，龙骨收敛固涩，安神定惊，牡蛎重镇安神，潜阳补阴，共为佐药；石菖蒲开窍豁痰，益智醒神，化湿开胃，引诸药直达病所，兼做使药，成分复杂多样。目前其质控技术多采用对一种或少数几种成分的含量测定方法，如中国专利技术专利CN201510224392.4，公开了一种参枝苓口服液指纹图谱的建立方法，其仅对肉桂酸、芍药苷、甘草苷、芍药内酯苷、甘草酸铵等有效成分作定量分析，只涉及桂枝、芍药两种原药材，对其他8味药材的主要成分未做研究，特别是对君药党参、臣药甘草、茯苓等对药品疗效有重要影响的药材缺乏检测，难以判定制剂整体质量。因此，开发建立一种简便易行，准确性高，重复性良好且能尽可能多地反映复方制剂所含多成分的指纹图谱检测方法对于参枝苓口服液的质量控制和评价非常必要。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种参枝苓口服液的指纹图谱测定方法。本专利技术通过对参枝苓口服液指纹图谱的研究，提供了一种操作简便、稳定、精密度高和重现性好，可用于参枝苓口服液的质量检测和评价的方法，包含了除龙骨和牡蛎外其他8种原药材有效成分的信息，弥补了现有质量控制方法的不足，使参枝苓口服液的质量控制技术更为完善、科学。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：(1)供试品溶液的制备：取参枝苓口服液，加入甲醇，超声提取，用水饱和正丁醇萃取，萃取液过滤，取续滤液回收正丁醇，加甲醇定容即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的党参炔苷、肉桂酸、芍药苷、甘草酸铵、茯苓酸、姜辣素、远志总糖酯、β-细辛醚对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得参枝苓口服液指纹图谱；步骤(3)中，测定的液相色谱条件为：色谱柱为PHENOMENEXLUNAC-18色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.5％冰乙酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱；流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为203nm。步骤(3)中，梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：0-10min，流动相A10%～12%，流动相B90％-88％；10-15min，流动相A12%～16%,流动相B88％-84％；15-26min，流动相A16%～24.2%,流动相B84％-75.8％；26-45min，流动相A24.2%～30%,流动相B75.8％-70％；45-53min，流动相A30%～38.5%,流动相B70％-61.5％；53-60min，流动相A38.5%～65.8%,流动相B61.5％-34.2％。具体的，步骤(1)中，供试品溶液的制备方法为：精密量取1.0ml参枝苓口服液于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声提取15min，恢复至室温，用水饱和正丁醇萃取，萃取液过0.45μm微孔滤膜，取续滤液回收正丁醇，转移至10ml容量瓶中加甲醇定容，即得供试品溶液。步骤(2)中，对照品溶液的制备方法为：精密称取党参炔苷标准品3.25mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.325mg/mL的对照品溶液；精密称取肉桂酸标准品1.25mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.125mg/mL的对照品溶液；精密称取芍药苷标准品1.58mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.158mg/mL的对照品溶液；精密称取甘草酸铵标准品3.22mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.322mg/mL的对照品溶液；精密称取茯苓酸标准品5.82mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.582mg/mL的对照品溶液；精密称取姜辣素标准品1.48mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.148mg/mL的对照品溶液；精密称取远志总糖酯标准品4.61mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.461mg/mL的对照品溶液；精密称取β-细辛醚标准品2.75mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.275mg/mL的对照品溶液。步骤(3)中，分别精密量取供试品溶液和对照品溶液的体积均为10μL。需要说明的是，本专利技术的指纹图谱的构建方法是经过科学实验而筛选得到的，并非是本领域的常规选择，本专利技术主要对供试品溶液的制备方法，色谱条件，检测波长和分析时间等条件进行了优选。其中：1)供试品溶液配制方法的考察：试验比较了不同提取溶剂如丙酮、乙醇、甲醇的水浴回流和索氏提取、超声提取等不同提取方法的提取效果，结果以甲醇超声提取的总体效果为佳；同时还考察了以甲醇为提取溶剂，不同提取时间（10,15，20min）的提取效果，结果表明，超声提取15min，提取较完全；同时还考察了以乙醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇对甲醇提取物进行萃取的效果，结果表明采用水饱和正丁醇萃取后所得图谱信息量较大，既含脂溶性成分也包括水溶性成分，符合指纹图谱整体性的要求，其尽可能反映了药材所含的全部信息。因而供试品溶液制备方法选择甲醇超声15min提取，再采用水饱和正丁醇萃取的方法。此外还比较了提取溶剂稀释倍数对样品溶液检测效果的影响，如稀释20倍，10倍和5倍，结果以甲醇作为提取溶剂稀释10倍的检测效果为佳。2)色谱条件的选择及优化：洗脱系统的筛选：本专利技术在流动相系统的选择中，分别以甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸、甲醇--0.1%磷酸、乙腈-0.3%磷酸、乙腈-0.1％冰乙酸水、乙腈-0.5％冰乙酸水等不同体积分数、不同比例的流动相系统进行了等度和梯度洗脱试验；根据色谱峰分离效果和峰型等，优选乙腈-0.5％冰乙酸水为最终洗脱系统。洗脱程序的筛选：本专利技术以乙腈-0.5％冰乙酸水做流动相，筛选了程序1-6的洗脱程序，以乙腈百分比表示，括号内表示时间（min）:程序1：10%（0）～12%（10）～20.5%（26）～24.2%（39）～28%（46）～39.4%（55）～43%（60）程序2：10%（0）～18%（2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种参枝苓口服液指纹图谱构建方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：(2)对照品溶液的制备：(3)测定供试品溶液和对照品溶液色谱图；(4)得到参枝苓口服液指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种参枝苓口服液指纹图谱构建方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：(2)对照品溶液的制备：(3)测定供试品溶液和对照品溶液色谱图；(4)得到参枝苓口服液指纹图谱。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取参枝苓口服液，加入甲醇，超声提取，用水饱和正丁醇萃取，萃取液过滤，取续滤液回收正丁醇，加甲醇定容即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的党参炔苷、肉桂酸、芍药苷、甘草酸铵、茯苓酸、姜辣素、远志总糖酯、β-细辛醚对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得参枝苓口服液指纹图谱。3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，供试品溶液的制备方法为：精密量取1.0ml参枝苓口服液于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声提取15min，恢复至室温，用水饱和正丁醇萃取，萃取液过0.45μm微孔滤膜，取续滤液回收正丁醇，转移至10ml容量瓶中加甲醇定容，即得供试品溶液。4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对照品溶液的制备方法为：精密称取党参炔苷标准品3.25mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.325mg/mL的对照品溶液；精密称取肉桂酸标准品1.25mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.125mg/mL的对照品溶液；精密称取芍药苷标准品1.58mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到浓度为0.158mg/mL的对照品溶液；...

【专利技术属性】
技术研发人员：程世娟，曾英姿，周万辉，王冬梅，于洪亮，赵磊，刘春蕾，高燕，高阳，
申请(专利权)人：山东沃华医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37