一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法技术

本发明专利技术涉及中药有效成分提取领域，公开了一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，包括如下步骤：(1)新鲜蕨菜杀青、烘干、粉碎，过筛后得干粉；(2)蕨菜干粉放入三角烧瓶中，按比例加入乙醇，超声功率280‑320W条件下提取15‑25min，提取2‑4次，每次间隔14‑16min；(3)冷却至室温，加入复合酶，再于50‑55℃条件下浸提110‑120min，过滤，收集滤液；(4)减压浓缩至浆状，冷冻干燥；(5)聚酰胺柱纯化、冷冻干燥。本发明专利技术的优点在于：采用超声辅助复合酶法提取技术，提取的蕨菜中黄酮含量9.0‑9.2％，芦丁含量0.95‑1.2％，紫云英苷含量0.80‑0.90％。

Extraction of total flavonoids from bracken by ultrasonic assisted complex enzyme method

The invention relates to the extraction field of effective components of Chinese medicine, and discloses a method of extracting total flavonoids in the fern by ultrasonic assisted compound enzyme method, including the following steps: (1) the fresh fern is killed, dried, crushed and dried after sifting; (2) the dry powder of the fern is put into the triangle flask, and the ethanol is added in proportion, the ultrasonic power is 280 320W conditions At the same time, 15 25min was extracted and extracted 2 times, 4 times at intervals of 14. (3) cooling to room temperature, adding compound enzyme, then extracting 110 120min, filtering and collecting filtrate at 50 55 C; (4) vacuum condensation to slurry, freeze drying; (5) polyamide column purification, cold freeze drying. The advantages of the invention are as follows: the extraction technology of ultrasonic assisted compound enzyme method, the content of flavonoids in the extracted fern is 9, 9.2%, the content of rutin is 0.95, 1.2%, and the content of the glucoside is 0.80 0.90%.

【技术实现步骤摘要】
一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法
本专利技术涉及中药有效成分提取领域，尤其涉及一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法。
技术介绍
尿酸是人类嘌呤代谢的终末产物，由次黄嘌呤、黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(XO)的作用下生成。由于人体内缺乏尿酸氧化酶，不能将其进一步分解成可溶性的尿囊素，而使人类极易形成高尿酸血症。任何原因引起尿酸生成增多和(或)排泄减少均可导致高尿酸血症。通常高尿酸血症被认为是痛风的标志，据统计约有5％-12％的高尿酸血症最终可发展为痛风。近年的研究表明，高尿酸血症不仅是痛风最重要的生化基础，而且与高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖、胰岛素抵抗的发生密切相关，已成为威胁人类健康的严重代谢性疾病。目前治疗高尿酸血症的药物非常有限，主要依赖于XO抑制剂别嘌醇和促尿酸排泄药丙磺舒、苯溴马隆、非布司他和培格洛替酶等，但这些药物毒副作用大，患者常常不能耐受，在一定程度上限制了其使用。因此，本实验课题组前期研制出了一种以蕨菜黄酮作为唯一活性成分的抗高尿酸血症药物(申请号为201410089031.9的专利申请)，并公开了相应的蕨菜黄酮的提取方法“将新鲜蕨菜在温度103℃条件下烘干，研成蕨菜粉末；用乙醚对蕨菜粉末进行脱脂，得到蕨菜干粉，加入3-5倍质量的体积分数为70-90％乙醇，回流提取1-3小时，提取3-5次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮”。然而，该提取方法时间长，耗能多，且蕨菜黄酮的提取率仅有7％左右，还尚待进一步改进。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种提取时间短、耗能少，且蕨菜黄酮提取率高的超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，包括如下步骤：(1)采取新鲜的蕨菜幼嫩叶及叶柄杀青、烘干、粉碎，过筛后得蕨菜干粉；(2)将蕨菜干粉放入三角烧瓶中，再按1:(15-20)比例加入浓度为70-75％乙醇，在超声功率280-320W的条件下提取15-25min，提取2-4次，每次间隔14-16min；(3)冷却至室温，向其加入1.3-1.8％复合酶，再于50-55℃温度条件下浸提110-120min，过滤，收集滤液，得蕨菜黄酮提取液；(4)减压浓缩至浆状，冷冻干燥，得粗蕨菜黄酮干粉；(5)聚酰胺柱纯化、冷冻干燥，得精制蕨菜黄酮干粉。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中过筛为35-45目筛。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(3)中复合酶具体为含纤维素酶和果胶酶的复合酶。作为本专利技术的优选方式之一，所述复合酶中纤维素酶和果胶酶的重量比为(1-3)：1。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中蕨菜黄酮提取液于旋转蒸发瓶中35-40℃温度条件下进行减压浓缩。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(5)中精制蕨菜黄酮干粉中含黄酮类物质大于60％，蕨菜黄酮提取率9.0-9.2％。作为本专利技术的优选方式之一，取步骤(5)中精制蕨菜黄酮干粉，加水稀释溶解后，经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取；将所得乙酸乙酯部分硅胶柱层析、乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，再经SephadexLH20氯仿-甲醇及甲醇系统反复柱层析分离，甲醇反复重结晶，获得芦丁0.95-1.2％、紫云英苷0.80-0.90％。作为本专利技术的优选方式之一，所述精制蕨菜黄酮干粉加水稀释溶解至1.1-1.3g/mL浓度后用于后期萃取。本专利技术相比现有技术的优点在于：本专利技术选择提取设备要求低的超声辅助复合酶法提取技术提取蕨菜黄酮，工艺简单，操作方便，将乙醇回流蕨菜黄酮得率从7％左右提高至9.0％左右，且芦丁含量0.95-1.2％，紫云英苷含量0.80-0.90％；本专利技术制备得到的精制蕨菜黄酮经实验证明，具有更好的降尿酸作用，并可进一步有效减轻尿酸沉积引起的血管损失、肾损伤。附图说明图1是实施例4中正常组的肾组织观察图；图2是实施例4中模型组的肾组织观察图；图3是实施例4中超声辅助复合法提蕨菜黄酮组的肾组织观察图；图4是实施例4中醇提蕨菜黄酮组的肾组织观察图；图5是实施例4中苯溴马隆组的肾组织观察图。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1本实施例的一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，包括如下步骤：(1)采取新鲜的蕨菜幼嫩叶及叶柄，杀青，100℃烘干至8成干，掰成1cm小段，放入高速粉碎机进行粉碎，过35目筛，得蕨菜干粉，继续100℃烘干至9九成干；(2)将50g蕨菜干粉放入500mL三角烧瓶中，再按1:15比例加入浓度为70％乙醇，在超声功率280W的条件下提取15min，提取2次，每次间隔14min；(3)冷却至室温，向其加入1.3％复合酶(纤维素酶：果胶酶＝1：1)，再于50℃温度条件下浸提110min，过滤，收集滤液，得蕨菜黄酮提取液；(4)取上述蕨菜黄酮提取液放于旋转蒸发瓶中，并在35℃温度条件下进行减压浓缩，浓缩至浆状，冷冻干燥，得粗蕨菜黄酮干粉；(5)聚酰胺柱纯化、冷冻干燥，得精制蕨菜黄酮干粉。用分光光度法测黄酮含量达4.61g，取精制蕨菜黄酮干粉4.61g，加水稀释溶解至1.1g/mL浓度后，经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取；将所得乙酸乙酯部分硅胶柱层析、乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，得32个馏分，再经SephadexLH20氯仿-甲醇及甲醇系统反复柱层析分离，甲醇反复重结晶，获得芦丁0.52mg/g、紫云英苷0.41mg/g。实施例2本实施例的一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，包括如下步骤：(1)采取新鲜的蕨菜幼嫩叶及叶柄，杀青，100℃烘干至8成干，掰成1cm小段，放入高速粉碎机进行粉碎，过45目筛，得蕨菜干粉，继续100℃烘干至9九成干；(2)将蕨菜干粉放入500mL三角烧瓶中，再按1:20比例加入浓度为75％乙醇，在超声功率320W的条件下提取25min，提取4次，每次间隔16min；(3)冷却至室温，向其加入1.8％复合酶(纤维素酶：果胶酶＝3：1)，再于55℃温度条件下浸提120min，过滤，收集滤液，得蕨菜黄酮提取液；(4)取50g上述蕨菜黄酮提取液放于旋转蒸发瓶中，并在40℃温度条件下进行减压浓缩，浓缩至浆状，冷冻干燥，得粗蕨菜黄酮干粉；(5)聚酰胺柱纯化、冷冻干燥，得精制蕨菜黄酮干粉。用分光光度法测黄酮含量达4.53g，取4.53g精制蕨菜黄酮干粉，加水稀释溶解至1.3g/mL浓度后，经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取；将所得乙酸乙酯部分硅胶柱层析、乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，得32个馏分，再经SephadexLH20氯仿-甲醇及甲醇系统反复柱层析分离，甲醇反复重结晶，获得芦丁0.532mg/g、紫云英苷0.431mg/g。实施例3本实施例的一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，包括如下步骤：(1)采取新鲜的蕨菜幼嫩叶及叶柄，杀青，100℃烘干至8成干，掰成2cm小段，放入高速粉碎机进行粉碎，过40目筛，得蕨菜干粉，继续100℃烘干至9九成干；(2)将50g蕨菜干粉放入500mL三角烧瓶中，再按1:18比例加入浓度为73％乙醇，在超声功率3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采取新鲜的蕨菜幼嫩叶及叶柄杀青、烘干、粉碎，过筛后得蕨菜干粉；(2)将蕨菜干粉放入三角烧瓶中，再按1:(15‑20)比例加入浓度为70‑75％乙醇，在超声功率280‑320W的条件下提取15‑25min，提取2‑4次，每次间隔14‑16min；(3)冷却至室温，向其加入1.3‑1.8％复合酶，再于50‑55℃温度条件下浸提110‑120min，过滤，收集滤液，得蕨菜黄酮提取液；(4)减压浓缩至浆状，冷冻干燥，得粗蕨菜黄酮干粉；(5)聚酰胺柱纯化、冷冻干燥，得精制蕨菜黄酮干粉。

【技术特征摘要】
1.一种超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采取新鲜的蕨菜幼嫩叶及叶柄杀青、烘干、粉碎，过筛后得蕨菜干粉；(2)将蕨菜干粉放入三角烧瓶中，再按1:(15-20)比例加入浓度为70-75％乙醇，在超声功率280-320W的条件下提取15-25min，提取2-4次，每次间隔14-16min；(3)冷却至室温，向其加入1.3-1.8％复合酶，再于50-55℃温度条件下浸提110-120min，过滤，收集滤液，得蕨菜黄酮提取液；(4)减压浓缩至浆状，冷冻干燥，得粗蕨菜黄酮干粉；(5)聚酰胺柱纯化、冷冻干燥，得精制蕨菜黄酮干粉。2.根据权利要求1所述的超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，其特征在于，所述步骤(1)中过筛为35-45目筛。3.根据权利要求1所述的超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，其特征在于，所述步骤(3)中复合酶具体为含纤维素酶和果胶酶的复合酶。4.根据权利要求3所述的超声辅助复合酶法提取蕨菜中总黄酮的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈乃富，谷仿丽，姜雪萍，陈乃东，韩邦兴，张自红，
申请(专利权)人：皖西学院，
类型：发明
国别省市：安徽,34