一种大鲵粘液提取物的制备方法技术

本发明专利技术属于医药技术或保健食品等技术领域，具体涉及一种大鲵粘液提取物的制备方法。该方法包括电刺激法、真空法、刮擦法，得到大鲵粘液，进一步针对大鲵粘液乙醇低温沉淀，沉淀物调pH值、酶解，超滤的方法，得到大鲵粘液的提取物，本发明专利技术工艺方法适合工业化生产，对环境无污染，具有提取率高，有效成分含量高等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种大鲵粘液提取物的制备方法
本专利技术属于医药技术或保健食品等
，具体涉及一种大鲵粘液提取物的制备方法。
技术介绍
大鲵(AndriasdavidianusBlanchard)为大型两栖纲、有尾目、隐鳃鲵科，俗名“娃娃鱼”，属国家二级保护动物，被称为“生物界活化石”。隐鳃鲵科目前仅存2属3种，其中大鲵属有2种：即中国大鲵(Andriasdavidianus)和日本大鲵(Andriasjaponicus)；隐鳃鲵属仅有分布于北美的隐鳃鲵(Cryptobranshusalleganiensis)一种。大鲵雌雄异体，7-8月产卵于岩石之上，随水漂流孵化。大鲵头部宽而扁阔，口大眼小，四肢短小，皮肤两侧有明显的褶皱，躯体多分布疣粒。大鲵的迁徙能力较差，对水环境的依赖性大，故常栖于水质清凉、岩石空洞较多的山间小溪的阴暗潮湿之地；其性情凶猛，以肉食为主，多有冬眠，成年大鲵体长可达2m以上。大鲵体表光滑无鳞，皮肤多显暗黑色和灰褐色，皮肤上有各种斑纹和丰富的腺体结构，当大鲵受到外来不良刺激时可分泌大量白色状粘液，粘液起初呈浆状，后渐变为粘稠胶状物，并伴有特殊性气味。大鲵几乎在全国各地均有分布，主要遍布在长江流域中上游和中南部山区，以陕西、湖北、湖南、江西、贵州等省分布较为集中。陕南作为大鲵生长的最佳适宜生活区域之一，有“大鲵之乡”之称。在汉中地区的城固、南郑、勉县、洋县、留坝、西乡、略阳等县广泛分布。目前，汉中地区大鲵养殖有200万尾左右，年孵化幼鲵突破50万尾以上，养殖户达1500多户，为大鲵向商品化、规模化、产业化发展奠定了基础。大鲵全身都是宝，其表皮所分泌的粘液是一项极为重要的新材料。大鲵粘液在伤口愈合方面存在巨大的医用价值，未来可应用于手术创口愈合和战场急救等医学领域。大鲵除了高营养价值，还有更神奇的特性。大鲵在遇到外部刺激时，身体表层会分泌出一种粘液。将该粘液制成的粉末涂于动物内脏的创口时发现，伤口在2秒左右就自动愈合，瞬间止血，而且发现粘合后的创口表面仅有一条细线，粘合的非常牢固。大鲵粘液具有的这种生物特性，是一种非常好的组织粘合剂，具有优异的医用性能。技术人员在后续的活体试验中发现，粘液的固体粉末没有毒性等副作用，是目前最具前景的天然医用生物材料。大鲵经历了长期的进化，其粘液材料的微结构和与之对应的力学性能趋于最优化，所表现出的优异强韧性和功能适应性，是传统人工合成材料无法比拟的。大鲵粘液材料经过加工后用于人体组织和器官的修复，具有很好的生物相容性。中国独有、世界首创的大鲵粘液这种生物材料，颠覆传统医学伤口缝合技术，更将是颠覆传统大鲵养殖产业的新机遇。目前国内常用的医用粘合剂主要有血纤维蛋白、氰基丙烯酸酯以及贻贝足丝蛋白等。血纤维蛋白粘合力弱，固化缓慢，机械强度差。氰基丙烯酸酯毒性强，聚合物膜易碎。来源于海洋贻贝足丝的足丝蛋白，相比前两种具有高强度高韧性和防水性，但是一万个贻贝中才能制取1克粘附蛋白，导致贻贝足丝蛋白成本十分高昂。与贻贝足丝相比，大鲵体表粘液产量非常充足，每条一次可采50g左右，可重复循环大量采集实现规模化生产。大鲵的生活环境较为独特，一般在水流湍急，水质清凉，水草茂盛，石缝和岩洞多的山间溪流、河流和湖泊之中。大鲵粘液的应用目前在国际上完全是空白。因此，研究开发新的大鲵粘液的提取物制备方法，具有重要意义。
技术实现思路
基于上述原因，我们通过科学的实验，确定一种新的大鲵粘液提取物的制备方法，该方法包括包括电刺激法、真空法、刮擦法，得到大鲵粘液，进一步针对大鲵粘液乙醇低温沉淀，沉淀物调pH值、酶解，超滤的方法，得到大鲵粘液的提取物，本专利技术工艺方法适合工业化生产，对环境无污染，具有提取率高，有效成分含量高等优点。本专利技术所述的大鲵为：经过人工仿生态环境饲养得到的子二代或子三代的大鲵。本专利技术所述的大鲵粘液又名：大鲵黏液。本专利技术通过以下技术方案实现的。一种大鲵粘液提取物的制备方法，其制备方法包括电刺激法、真空法、刮擦法，得到大鲵粘液。其中电刺激法中电压为5-10V，真空法中真空度1kPa-10kPa。所述的一种大鲵粘液提取物的制备方法，还包括酶解法。所述的一种大鲵粘液提取物的制备方法：步骤(1)：取大鲵粘液，加入大鲵粘液1-3倍的注射用水，水浴加热至30℃-45℃，保持体系温度30℃-45℃，搅拌10-30min，加入大鲵粘液0.5-1.5倍的乙醇，搅拌5min-10min，从水浴中取出，放置0℃-5℃环境下静置8-12小时，过滤，得到沉淀A，滤液备用；步骤(2)：取步骤(1)滤液，水浴加热至30℃-45℃，保持体系温度30℃-45℃，加入大鲵粘液3-4倍的乙醇，搅拌5min-10min，从水浴中取出，放置0℃-5℃环境下静置8-12小时，过滤，得到沉淀B，沉淀A与沉淀B合并，得到沉淀；步骤(3)：取步骤(2)得到的沉淀，加沉淀重量2-3倍的注射用水，用pH调节剂A调节pH值4.5-5.5，加入沉淀重量0.20-0.40倍的中性蛋白酶，水解2-4小时后，加注射用水，用pH调节剂B调节pH值为6.0-7.0，再加入沉淀重量1-2倍的菠萝蛋白酶，水解3-6小时，得到酶解液；步骤(4)：取步骤(3)得到酶解液，加入乙醇，使酶解液中含醇量达到50％-60％，静置12-24小时，过滤，得到沉淀；步骤(5)：取步骤(4)沉淀，加入沉淀重量4-8倍的注射用水，用0.22μm滤芯过滤，滤液再用截取分子量10000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液冷冻干燥，得到大鲵粘液提取物。其中pH调节剂A为枸橼酸、苹果酸或酒石酸。pH调节剂B为枸橼酸钠。本专利技术所述的大鲵为：经过人工仿生态环境饲养得到的子二代或子三代的大鲵。本专利技术所述的大鲵粘液又名：大鲵黏液。制备实施例实施例1取大鲵10只，采用真空法(真空度1kPa)，获得大鲵粘液508g；步骤(1)：取大鲵粘液，加入大鲵粘液1倍的注射用水，水浴加热至30℃，保持体系温度30℃，搅拌10min，加入大鲵粘液0.5倍的乙醇，搅拌5min，从水浴中取出，放置0℃环境下静置8小时，过滤，得到沉淀A，滤液备用；步骤(2)：取步骤(1)滤液，水浴加热至30℃，保持体系温度30℃，加入大鲵粘液3倍的乙醇，搅拌5min，从水浴中取出，放置0℃环境下静置8小时，过滤，得到沉淀B，沉淀A与沉淀B合并，得到沉淀；步骤(3)：取步骤(2)得到的沉淀，加沉淀重量2倍的注射用水，用枸橼酸调节pH值4.5，加入沉淀重量0.20倍的中性蛋白酶，水解2小时后，加注射用水，用枸橼酸钠调节pH值为6.0，再加入沉淀重量1倍的菠萝蛋白酶，水解6小时，得到酶解液；步骤(4)：取步骤(3)得到酶解液，加入乙醇，使酶解液中含醇量达到50％，静置24小时，过滤，得到沉淀；步骤(5)：取步骤(4)沉淀，加入沉淀重量4倍的注射用水，用0.22μm滤芯过滤，滤液再用截取分子量10000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液冷冻干燥，得到大鲵粘液提取物53.9g(总糖含量为61.3％)。实施例2取大鲵10只，采用真空法(真空度10kPa)，获得大鲵粘液496g；步骤(1)：取大鲵粘液，加入大鲵粘液3倍的注射用水，水浴加热至45℃，保持体系温度45℃，搅拌30min，加入大鲵粘液1.5倍的乙醇，搅拌10min，从水浴中取出，放置本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大鲵粘液提取物的制备方法，其特征在于：制备方法包括电刺激法、真空法、刮擦法，得到大鲵粘液。

【技术特征摘要】
1.一种大鲵粘液提取物的制备方法，其特征在于：制备方法包括电刺激法、真空法、刮擦法，得到大鲵粘液。2.根据权利要求1所述的一种大鲵粘液提取物的制备方法，其中电刺激法中电压为5-10V，真空法中真空度1kPa-10kPa。3.根据权要求1所述的一种大鲵粘液提取物的制备方法，其特征在于还包括酶解法。4.根据权利要求3所述的一种大鲵粘液提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)：取大鲵粘液，加入大鲵粘液1-3倍的注射用水，水浴加热至30℃-45℃，保持体系温度30℃-45℃，搅拌10-30min，加入大鲵粘液0.5-1.5倍的乙醇，搅拌5min-10min，从水浴中取出，放置0℃-5℃环境下静置8-12小时，过滤，得到沉淀A，滤液备用；步骤(2)：取步骤(1)滤液，水浴加热至30℃-45℃，保持体系温度30℃-45℃，加入大鲵粘液3-4倍的乙醇，搅拌5min-10min，从水浴中取出，放置0℃-5℃环境下静置8-...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊林，
申请(专利权)人：太鲵生物科技天津有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12